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- 详细信息
- 文献和实验
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- 库存:
975
- 英文名:
Large Plasmid Extraction Kit(for cell transfection)
- 保质期:
18个月
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
室温
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博供应的北京转染级质粒大量提取试剂盒厂商用于生化科研试验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多转染级质粒大量提取试剂盒等DNA纯化产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:北京转染级质粒大量提取试剂盒厂商
品牌:百奥莱博
编号:ALH091
产地:国产|进口
英文名:Large Plasmid Extraction Kit(for cell transfection)
规格:20次
本试剂盒适用于BAC/PAC/P1/Cosmid等大型质粒制备。常规的离心柱型质粒抽提试剂盒并不适用于BAC/PAC/P1/Cosmid等大型质粒DNA的抽提。这主要是因为大型质粒DNA分子量很大,常常会超过100kb而且一般拷贝数低产量低,使用常规的离心柱吸附膜吸附效率和产量很低而且过膜会打断这些大分子量的质粒DNA。本试剂盒采用改进碱裂解法从培养菌中提取质粒DNA,采用独特的溶液配方和内毒素清除试剂,只需要几次简单离心去除蛋白质、多糖、内毒素、RNA等杂质,获得高质量的质粒DNA。纯化DNA的OD260/280通常在1.8左右,得到的质粒可直接应用于细胞转染甚至动物体内实验等对DNA纯度要求很高的工作中。纯化后期过程均在Eppendorf管中操作,方法简单,不需特殊设备,无需过柱,不用酚*仿抽提;基本可完全回收细菌裂解释放出的质粒,不必担心质粒DNA的丢失。本方法提取纯化质粒DNA,对质粒损伤小,即使是10kb甚至100kb以上的大型质粒或超大型BAC/PAC质粒,只要碱裂解法能够提取,就可以有效纯化。此外溶液型的试剂可以按照比例放大缩小进行小提/中提/大提,最后可选择任意小体积溶解质粒,浓度可高达3μg/μl。
试剂盒组份(20次):
RNaseA(10mg/ml)-————————1.3ml
溶液P1—————————————130ml
溶液P2—————————————100ml
溶液PⅢ-————————————110ml
杂质清除剂A-——————————3ml
杂质清除剂B-——————————30ml
内毒素清除剂——————————10ml
试剂盒特点:
1.不需要使用有毒的*酚,*仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。快速、 方便、从150-200 ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中,可快速提取0.4-1mg纯净的高拷贝质粒DNA,提取率达80-90 %。
2.获得的质粒产量高,超螺旋比例高,纯度好,可直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
3.内毒素含量极低(<0.1 EU/μg DNA),可直接应用于细胞转染。
注意事项
1. 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb 的大质粒,应加大菌体使用量,同时按比例增加P1、P2、PⅢ的用量。
2. 提取大质粒时操作动作要轻柔,应该使用剪大了开口的吸头,防止机械剪切对DNA 的损坏。
3. DNA 沉淀液沉淀离心后,可能看不到明显沉淀。如未见沉淀,担心DNA 丢失,可保留上清液,待完成全部操作后电泳鉴定,以确定是否获得终产物(数百微克DNA 离心沉淀在管的侧壁上,可能无法看到明显团块)。
4. 得到的质粒DNA 可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1 相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带,也可能为2 条或者多条DNA 条带,这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成,与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过95%。
5. 质粒DNA 确切分子大小, 必须酶切线性化后,对比DNA 分子量Marker 才可以知道。处于环状或者超螺旋状态的质粒,泳动位置不确定,无法通过电泳知道确切大小。
储存条件:室温,有效期18个月。
本品别名:大型质粒大量提取试剂盒(>10kb质粒)|大型质粒提取试剂盒|大型质粒大量制备试剂盒|无内毒素大型质粒提取试剂盒|转染级质粒大量提取试剂盒|细胞转染用大型质粒制备试剂盒|BAC大型质粒提取试剂盒|PAC大型质粒提取试剂盒|P1大型质粒提取试剂盒|Cosmid大型质粒提取试剂盒
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文献和实验的时间和精力,最后因为试剂盒的问题影响实验的进度有点得不偿失,而且脂质体都比较贵。因此,性价比是最重要的因素。大部分的质粒提取试剂盒所得产物可分为如下几个级别:1.高级转染级:这是最高纯度的去内毒素的质粒纯化,主要使用于基因治疗,cell显微注射,原代细胞转染等。2.常规转染级:它要优于2次cscl超速离心纯化的质粒。3.分子生物学级,相当于1次cscl超速离心纯化的质粒。4.测序级:主要用于常规酶切与连接用。我们实验室用过qiagene,axgene,omiga和国产天根的。大家对qiagene
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