Tis-EDTA抗原修复液(50×)现货供应

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")Tis-EDTA抗原修复液(50×)现货供应，我公司供应的细胞生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：Tis-EDTA抗原修复液(50×)现货供应
产地：国产|进口
编号：SY0775
规格：100ml
英文名：Antigen Retrieval Buffer (50×Tris-EDTA, pH 9.0)
免疫染色实验，细胞或组织往往需要经多聚甲醛、甲醛或其他醛类固定来维持本身的形态结构，然而此步操作通常会封闭抗原决定簇，使得相当多的抗原不能与抗体很好的进行反应，从而引起染色信号衰减，甚至出现假阴性现象。引起抗原决定簇被掩盖的原因在于：1）醛类固定剂导致组织上的许多*基酸残基在分子内或分子间形成醛键，从而封闭抗原表位；2）醛类固定剂在固定过程中与蛋白质发生交联（cross-link），形成醛交联蛋白，导致抗原表位被封闭。因此，需要对固定组织进行抗原修复（antigen retrieval，AR）来逆转被掩盖的抗原表位，使其重新暴露出来，恢复抗原表位-抗体的结合能力，从而改善染色效果。

抗原修复的方法非常多，主要有热诱导的抗原修复（Heat Induced Epitope Retrieval，HIER）和酶诱导的抗原修复（Proteolytic Induced Epitope Retrieval），修复方法的选择需要考虑到抗原表达程度、抗体要求、组织类型以及组织固定方法等因素。作为免疫染色至关重要的一步，抗原修复方法的选择、温度、pH值、修复时间、修复介质都会影响到实验结果。实验者需根据自身的实验体系以及实验条件来选择恰当的修复溶液，从而达到最佳的修复效果。

本品为Tris-EDTA抗原修复液，pH 9.0，适合用于经甲醛固定的石蜡切片的抗原修复。本品为50×的浓缩液，使用前需用ddH2O稀释成1×工作液。

储存条件：常温。

关于Tis-EDTA抗原修复液(50×)现货供应的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·PU.1-Luc荧光素酶报告基因质粒
编号：SY0107
英文名称：PU.1 luciferase reporter plasmid
规格：1μg
PU.1荧光素酶报告基因（报告基因质粒）（PU.1 luciferase reporter plasimd）是用于检测PU.1转录活性水平为目的的报告基因。PU.1转录因子因其DNA结合区识别共有序列GAGGAA，故该区又被称为PU.1 box。PU.1主要在造血系统如髓细胞和B淋巴细胞中表达，调节关键髓系基因的转录从而调控造血系统的分化。

PU.1报告基因主要用于检测细胞中PU.1的活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMPU.1-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个PU.1结合位点，可以高灵敏度地检测PU.1的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得PU.1报告基因更易于转染。

质粒图谱



注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用说明
pGMPU.1-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。

储存条件：-20℃。


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·第一条链 cDNA合成试剂盒
编号：SY0290
英文名称：First Strand cDNA Synthesis Kit
规格：50T
本试剂盒是基于Reverse Transcriptase，该酶热稳定性提高，在50℃的半衰期超过240min，且可长时间耐受高达55℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录，能稳定可靠地合成cDNA。且Reverse Transcriptase的独特设计，进一步增强了模板亲和力和行进性，使得全长cDNA的合成能力有了大幅度提升，可获得长达20 kb的cDNA，并且对于常见的逆转录抑制物具有更高的耐受度，非常适合于植物组织RNA的逆转录反应。

本试剂盒包含由总RNA或mRNA合成高质量第一条链cDNA所需的所有成分，并提供两种cDNA合成引物：Random hexamers和oligo（dT）18。合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR、qPCR以及PCR克隆。其中，5×RT Mix*(代"包")含优化的缓冲体系和dNTP； Enzyme Mix*(代"包")含Reverse Transcriptase和RNase inhibitor。可根据需要，选择Oligo (dT)18、Random hexamers或基因特异引物作为逆转录引物。

试剂盒组分：

 

组份	规格
RNase free ddH2O	1 ml
5×RT Mix	200 μl
Enzyme Mix*	50 μl
Oligo dT18 (0.5 μg/μl)	50 μl
Random hexamers (N6)	50 μl
*包含RNase inhibitor，用于抵抗环境和体系中可能存在的痕量的RNase。

储存条件：-20℃，有效期一年。

质量控制

所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶、RNase残留。
功能检测1：以500 ng mouse total RNA为模板，Oligo dT18为引物，50℃反应45分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增ne*(代"b")ulin基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的20.0 kb条带。
功能检测2：以100 pg Hela cell total RNA为模板，Oligo dT18为引物，50℃反应30分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增β-actin基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的550 bp条带。
功能检测3：以500 ng Hela cell total RNA为模板，Oligo dT18为引物，55℃反应45分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增Polε基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的4.8 kb (GC-rich)条带。
功能检测4：以1 pg-1 µg HeLa cell total RNA为模板，以Oligo dT18和Random hexamers为引物，测试qRT-PCR性能。

以6个数量级的模板量的对数值对Ct值做标准曲线，R2>0.990，斜率在-3.20到-3.60之间。

客户需要准备的材料
1.RNase free的1.5 ml微量离心管或0.2ml PCR管
2.水浴锅或PCR仪
3.冰
4.RNA（高质量的完整的RNA对于获得高质量的cDNA是至关重要的。

引物选择
1） 如果模板为真核生物来源，建议选择Oligo dT18，其与真核生物mRNA的3’Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。
2）基因特异性引物 (GSP)的特异性最高。但有些情况下，用于PCR反应的GSP无法有效引导第一链cDNA合成。这时，可改用Oligo dT18或Random hexamers重新进行逆转录。
3）Random hexamers特异性最低，所有RNA，包括mRNA、rRNA、tRNA均可以作为Random hexamers的模板。当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高，或者模板为原核生物来源，使用Oligo dT18或基因特异性引物 (GSP)无法有效引导cDNA合成时，可使用Random hexamers为引物。

应用实例

1 第一条链cDNA合成*（以20μl反应体系为例）
1）按照下表在RNase free离心管中配制如下混合液：

RNase free ddH2O	to 20 μl
Oligo(dT)18(0.5 μg /μl)	1 μl
or Random Primer	or 1 μl
or Gene Speicific Primers	or 2 pmol
5×RT Reaction Mix	4 μl
Enzyme Mix**	0.8-1μl
模板RNA	Total RNA: 50 ng-5 μg/mRNA: 5-500 ng

*可选步骤（一般不需要）：如果RNA模板GC含量丰富或者有复杂二级结构，可以先只加RNA模板、引物和和RNase free H2O混匀，65℃变性5分钟，冰上冷却 5min，短暂离心后加入其它成分继续下面的反转录步骤。
** Enzyme Mix非常粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请瞬时离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。可每次按照0.8μl使用，不会影响使用效果。

2）用移液枪轻轻吹打混匀。
3）如用Oligo(dT)18或基因特异引物(GSP)，42℃孵育30-50min。
如用Random Primer，25℃孵育10 min，42℃孵育30-50 min。
4）65℃加热15 min(或者85℃加热5 min)失活Reverse Transcriptase。

2 RT-PCR
建议取1/10-1/5 体积(2-4 μl)的反转录产物作为PCR模板。
1）建议反应条件
 

Components	Volume	Final Concentration
cDNA Template	2 μl	as required
Forward Primer (10 μM)	1 μl	0.2 μM each
Reverse Primer (10 μM)	1 μl	0.2 μM each
10×Taq Buffer (含Mg2+)	5 μl	1×
2.5 mM dNTPs	4 μl	0.2 mM
Taq DNA Polymerase	0.5 μl	2.5 units
ddH2O to final volume	50 μl	Not applicable

注意事项
1）所有操作均应在冰上进行。
2）除使用RNase free的枪头和离心管外，RNA实验用的试剂建议专用，并在单独的洁净的区域操作。操作时，戴上口罩和一次性手套，避免说话。总RNA提取完成后，建议取少量跑1%琼脂糖凝胶电泳，检验RNA的完整性。
3）逆转录反应抑制物包括酚，盐，SDS，EDTA等。建议用75%乙醇 (用DEPC水配制)仔细洗涤RNA沉淀 (轻弹管底让沉淀悬浮，并静置数分钟)。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。






Tis-EDTA抗原修复液(50×)现货供应关键词：50×,SY0775,Tis-EDTA抗原修复液(50×),Antigen Retrieval Buffer (50×Tris-EDTA, pH 9.0)

SDS-PAGE蛋白质低分子量标准 Tyramine hydrochloride
硫*(代"磺")素S Ammonium alcohol polyvinyl phosphate 1326-12-1
ARB12700 大鼠糖皮质激素受体α(GR-α)含量分析 Rat glucocorticoid receptor-α,gr-α ELISA KIT
大肠杆菌膜蛋白提取试剂盒   50T|100T
ARB12781 小鼠α2抗纤溶酶(α2-AP)elisa检测说明书 Mouse α2-antiplasmin,α2-ap ELISA KIT
002011 肝素*抗凝马血
Acr-Bis(20%,19.6%:0.4%)   500ml
N-三(羟甲基)甲基甘*酸 Inosine 5704-04-1
001006 大鼠血清
ARB11948 大鼠I型前胶原N端前肽(PINP)Elisa定量检测 Rat procollagen i n-terminal Peptide,pinp ELISA KIT
F010104 小鼠抗人血清白蛋白抗体 Monoclonal Mouse Anti-HAS
3-(环己*基)-1-丙磺酸*盐 3,5-Diiodo-L-thyronine 105140-23-6
F030503 FITC标记小鼠抗乙肝表面抗原抗体 Monoclonal Mouse Anti-HBsAg*FITC

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