QN1293型CCK-8试剂盒说明书

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百奥莱博专业生产销*(代"售")QN1293型CCK-8试剂盒说明书，我公司是生物试剂、化学试剂专业供应商，立足北京，服务全国的高校、研究所、医院、企业科研部门，欢迎各位老师来电垂询订购。

名称：QN1293型CCK-8试剂盒说明书
英文名：Cell counting KIT-8
品牌：百奥莱博
编号：QN1293
规格：100T|500T|500T*10
本试剂盒为MTT法的替代方法，是一种基于WST(水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝*基)-3-(4-硝*基)-5-(2,4-二磺基*)-2H-四唑单*盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏等试验。

使用说明：
一、制作标准曲线(测定细胞具体数量时)
1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2、按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。
3、接种后培养至细胞贴壁，然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定OD 值，制作出一条以细胞数量为横坐标(X 轴)，OD 值为纵坐标(Y 轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。)

二、细胞活性检测
1、在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(在37℃,5% CO2的条件下)。
2、向每孔加入10μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数)。
3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
5、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

三、细胞增值-毒性检测
1、在96孔板中配置100 μL 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(在37℃，5% CO2的条件下)。
2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。在培养箱孵育一段适当的时间(例如：6、12、24或48小时)。
3、向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数)。如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基(除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基)，去掉药物影响。
4、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
5、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
6、如果暂时不测定OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

活力计算：.
细胞活力(％)=[A(加药)－A(空白)]／[ A(0加药)－A(空白)]×100
A(加药)：具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度
A(空白)：具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度
A(0 加药)：具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力

注意事项：
①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。
②白细胞可能需要培养较长时间。
③当使用标准96 孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1 ,000个/孔 (100 μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 ( 100 μL培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10% 加入CCK-8溶液。
④如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm 之间的滤光片，但是450nm检测灵敏度最高。
⑤培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。

储存条件：4℃，有效期一年

关于QN1293型CCK-8试剂盒说明书的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·二水槲皮素
编号：QN0735
英文名称：2-(3,4-Dihydroxyphenyl)-3,5,7-trihydroxy-4H-chromen-4-one dihydrate
规格：10g
别名：二水栎精;二水槲皮黄素;栎精二水合物
CAS号：6151-25-3
分子式：C15H10O7.2[H2O]
分子量：338.26626
储存条件：常温干燥保存

·EDTA抗原修复液(1×)
编号：QN1233
英文名称：EDTA Antigen Retrieval Solution,1×
规格：100mL|500mL
EDTA抗原修复液是一种常用的抗原修复液，可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。

通常石蜡切片都需进行抗原修复处理，而冰冻切片可以不进行抗原修复处理。抗原修复可以提高石蜡切片的免疫染色效果，亦可以不同程度的提高冰冻切片的染色效果。当冰冻切片免疫染色效果不理想时，考虑进行抗原修复。

细胞或组织用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后，会导致细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇，同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽，导致免疫染色时染色信号减弱，甚至出现一些假阴性染色结果。所以要求在进行免疫组化染色时，需要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态。从而提高抗原的检出率，降低背景染色，提高检测的准确性。

按照每个片子需要10ml抗原修复液(1×)计算，100ml抗原修复液(1×)可以用于10个样本的抗原修复。

储存条件：室温，有效期1年


QN1293型CCK-8试剂盒说明书关键词：Cell counting KIT-8,QN1293,CCK-8试剂盒


·EDTA二*盐
编号：QN0718
英文名称：Ethylenediaminetetraacetic acid disodiu*(代"m") salt ,dihydrate
规格：500g|1kg|5kg
本品是二价阳离子的螯合剂，能抑制酶的活性，例如金属蛋白酶，因为金属蛋白酶需要二价阳离子的存在才有活性。

CAS号：6381-92-6
分子式：C10H14N2O8Na2·2H2O
分子量：372.24
纯度：＞99.0%
性状：白色结晶性粉末
储存条件：室温

0.5M EDTA(pH=8.0)的配制：
称取EDTA-Na2.2H2O186.1g溶于800mL体积纯水中，加入19g*氧化*，然后用NaOH调节pH至8.0，后定容。高压灭菌后使用。

注意事项：
(1)EDTA-Na2.2H2O不易溶于水，只有在碱性条件下才能溶解，pH调至8时才能够完全溶解。
(2)注意调节终体积溶液pH为8.0。

·酸性蛋白酶(1：50000)
编号：QN0507
英文名称：ACldic Protease
规格：250g|1000g
本品是一种酸性蛋白酶制剂， 在酸性条件下具有较高活性， 由酸性蛋白酶高产菌株——曲霉菌 (Aspergillus)深层发酵而成。具有较强的水解能力能力，能将大分子的蛋白质水解成*基酸等产物。

CAS号：9025-49-4
活性：50000units/g
最适pH：2.0～5.0
最适温度：45～55℃
来源：由黑曲霉经发酵提炼而成而成
性状：固体型为黄褐色粉末
溶解性：易溶于水
储存条件：RT


酶活定义：一个酶活力指1g酶粉或1ml酶液在40℃ PH3.0条件下，1分钟水解酪素产生1ug酪*酸为一个活力单位(u/g或u/ml)。


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·a-糜蛋白酶
编号：QN0502
英文名称：α-Chymotrypsin
规格：1g
本酶是蛋白水解酶类，有分解肽键作用。

别名：胰凝乳蛋白酶
CAS号：9004-07-3
分子量：约25kDa
储存条件：2～8℃
酶活：1200u/mg
性状：白色或类白色结晶性粉末

·SABC免疫组化试剂盒(小鼠/兔IgG)(AP显色)
编号：QN1222
英文名称：SABC(Mouse/Rabbit IgG)-AP Kit
规格：100T-200T
本试剂盒适合于一抗为小鼠/兔IgG的免疫组化实验，AP显色。

SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC 即 StreptAvidin—Biotin Complex。

试剂盒组分：
封闭液（5%BSA）-——————————10ml
Bio-羊抗小鼠/兔IgG浓缩液——————200ul
SABC-AP 浓缩液———————————100ul
稀释液———————————————30ml
1×AP 反应缓冲液——————————30ml
25×BCIP——————————————1ml
25×NBT-——————————————1ml

实验步骤：（以石蜡切片为例，仅作参考）
1. 切片常规脱蜡至水(三次二甲*，三次乙醇)。
2. 可选步聚：
a、热修复抗原
b、酶消化
c、跳过此步，直接进入下一步。
3. 滴加 5%BSA 封闭液，室温 20 分钟。甩去多余液体，不洗。
4. 用稀释液将一抗按一定比例稀释（稀释后的一抗 4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗 37 ℃ 1 小时左右或 20℃时 2 小时左右。也可 4℃过夜。TBS（pH7.2-7.4）洗 2 分钟×3 次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。具体稀释度和孵育时间参考一抗生产厂家说明书。）
5．根据用量，用稀释液将 Bio-羊抗小鼠/兔 IgG 浓缩液按 1:100 稀释成工作液(1ml 稀释液加入 10ul Bio-羊抗小鼠/兔IgG 浓缩液混匀。此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗小鼠/兔IgG工作液，20-37℃ 30分钟。TBS（pH7.2-7.4）洗 2分钟×3次。
6．根据使用量，用稀释液将 SABC-AP 浓缩液按 1:100 稀释成工作液(1ml 稀释液加入 10ul SABC-AP 浓缩液混匀。此工作液 4℃可保存一周)。滴加 SABC-AP 工作液，20-37℃，30 分钟。TBS（pH7.2-7.4）洗 5 分钟×4 次。
7．根据用量，1ml AP 缓冲液中加入 40ul NBT 溶液，混匀后再加入 40ul BCIP 溶液。此工作液现用现配。室温显色, 镜下控制反应时间。蒸馏水洗涤终止反应。

对于冰冻切片，固定后，TBS 漂洗两次，接上述第二步。

注意事项：
1、如果染色背景过高，在 SABC 反应之后，AP 显色之前，用加有 0.01—0.02% TWEEN-20 的 TBST（pH7.2-7.4）洗涤切片 4 次，TBS 洗 2 次，然后 AP 显色。
2、因为免疫组化指标众多，标本不一，此步骤仅作参考。

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