北京核蛋白提取试剂盒现货供应

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博供应的北京核蛋白提取试剂盒现货供应用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多核蛋白提取试剂盒等蛋白质研究产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：北京核蛋白提取试剂盒现货供应
编号：QN1079
规格：50T|100T
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
本核蛋白提取试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。整个过程只需约60分钟就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。得到的蛋白可以用于Western blot等实验。本试剂盒通过浆蛋白抽提试剂使细胞膨胀破裂，释放出胞浆蛋白，再通过离心得到细胞核。然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。本试剂盒可以抽提50/100个样品(每个样品约2×106个Hela细胞或40mg组织)。

体外培养细胞的操作方法(裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行)：

1．根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。PMSF需现用现加，若目标蛋白含有丰富的半胱*酸，可以在两种蛋白抽提液中加入DTT至终浓度0.5mM。
2．对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS洗一遍，用细胞刮刀收集细胞，或用EDTA消化后吹打下细胞(最好不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白)。500g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清留下沉淀备用。
3．对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，500 g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
4．每20μl细胞沉淀加入200μl浆蛋白抽提试剂(2×106个细胞沉淀的体积约20μl或40mg)。
5．用移液器吹打或高速涡旋15秒(可适当延长)，必须使细胞沉淀完全分散开成单细胞悬液。细胞沉淀分散不完全会导致蛋白产量降低。
6．冰浴10分钟。
7．最高转速剧烈涡旋10秒，4℃，12000～16000g离心10分钟。
8．上清即为抽提得到的细胞浆蛋白，立即吸取上清至预冷的样品管中备用，进行后续的PAGE、Western等实验，但蛋白浓度较低，可根据需要进行相应浓缩。
9．沉淀即为细胞核，要完全吸尽残余的上清(避免细胞浆蛋白的污染)，加入50-100μl核蛋白抽提试剂。
10．用移液器吹打或高速涡旋15秒(可适当延长)至沉淀完全分散，冰浴10分钟。
11．最高转速剧烈涡旋10秒，4℃，12000～16000g离心10分钟。
12．立即吸取上清至预冷的样品管中，此即为抽提得到的细胞核蛋白。可进行后续实验或-70℃冻存。 对于组织样品：把组织称重后，尽可能切成非常细小的碎片，按每50mg组织加入200μl～500μl PBS，用匀浆器冰上匀浆制成细胞悬液，500g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清，收集沉淀。加入200μl浆蛋白抽提试剂后接上述步骤5。

注意事项：
1．裂解得到的蛋白样品，由于含有较高浓度的去垢剂干扰，不能用Bradford法测定蛋白浓度，可以选用本公司生产的BCA蛋白定量试剂盒(货号QN1075)测定蛋白浓度。
2．对于组织样品，本试剂盒适用于新鲜组织，对冻存组织抽提效果较差。
3．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：核/浆蛋白抽提试剂4℃保存，PMSF于-20℃保存。

关于北京核蛋白提取试剂盒现货供应的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·胸腺嘧啶
编号：QN0545
英文名称：Thymine
规格：5g|25g
胸腺嘧啶可用于研究化学过程影响DNA的结构，胸腺嘧啶可用于研究*键动力学和能量的参数与其他碱基如腺嘌呤。胸腺嘧啶是用于开发敏感的重金属(汞)探测器基于配位化学和纳米结构。

CAS号：65-71-4
分子式：C5H6N2O2
分子量：126.11
储存条件：低温干燥

·赤霉素GA3
编号：QN0236
英文名称：Gibberellic Acid (GA3)
规格：250mg|1g
本品赤霉素也称为赤霉素A3(GA3)，一种内源性的植物生长调节剂，在植物发育过程中发挥着各种重要功能：1)刺激细胞分裂和延伸从而促进根茎快速延伸;2)对需要层积处理或者光照诱导发芽的一些植物，赤霉素可解除休眠，诱导有丝分裂和开始;3)提高种子萌发率。还能参与一些生理活动，比如向重力性，张力和开花式样等。低浓度的GA3可非常显著的调控植物生长，常用工作浓度为0.01-5 mg/L。高浓度的GA3可能会产生相反的效果。

别名：赤霉酸;Gibberellin A3
CAS号：77-06-5
分子式：C19H22O6
分子量：346.37
储存条件：室温干燥保存

溶解性：溶于乙醇，参考浓度50mg/ml。

本品适用于植物细胞培养，可先溶于乙醇(50 mg/ml)，然后用水稀释到需要的工作浓度，建议现配现用。也可过滤除菌后，以相对高些的储存液(稀释的水溶液)浓度于4℃避光保存。

注意事项:
(1)用于细胞实验，溶解后，须用一次性针头滤器过滤除菌。
(2)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


北京核蛋白提取试剂盒现货供应关键词：核蛋白提取试剂盒,QN1079,Nuclear Protein Extraction Kit

ARB10174 人X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良(SEDL)Elisa方法检测 Human x-linked spondyloepiphyseal dysplasia tarda,sedl ELISA KIT
ARB14067 ALV J-Ab elisa检测 
高效RNA保存液 100ml
F030409 胶体金标记山羊抗小鼠IgG3抗体 Goat Anti-Mouse IgG3*GOLD
ARB11199 人组织相容性复合体I类相关基因A(MICA)尿液中含量检测 Human mica  ELISA KIT
ARB11968 大鼠CD8分子(CD8)Elisa分析 Rat cluster of differentiation 8,cd8 ELISA KIT
ARB13935 猪组胺(His)Elisa方法检测 Porcine Histamine,His ELISA KIT
F020223 兔抗豚鼠IgG抗体 Rabbit Anti-Guinea Pig IgG
ARB11836 人凝血因子Ⅱ(FⅡ)Elisa定量检测 Human coagulation factor Ⅱ,fⅡ ELISA KIT
F010106 小鼠抗His-tag抗体 Monoclonal Mouse Anti-His Tag
334-50-9 Spermidie 3HCL  亚精胺三盐*(代"酸")
ARB14271 猪免疫球蛋白M(IgM)血清中含量检测
碱性磷酸酶封闭液(Levamisole法)   100ml
4-*基-3-肼基-5-巯基-1,2,4-三氮唑 CAPSO 1750-12-5
ARB11048 人表皮角蛋白(EK)Elisa分析 Human epidermal keRatin,ek ELISA KIT
ARB11737 人靶向核糖核酸酶(TR)Elisa方法检测 Human targeted ribonuclease, tr ELISA KIT
ARB11650 人蛋白质二硫键异构酶(PDI)酶免分析 Human protein disulfide isomerase,pdi ELISA KIT
北京核蛋白提取试剂盒现货供应关键词：核蛋白提取试剂盒,QN1079,Nuclear Protein Extraction Kit


·潮霉素B
编号：QN0023
英文名称：Hygromycin B
规格：1g
本品常用做蛋白质合成抑制剂，可用于植物细胞培养等生化研究。本品是潮霉素B干粉，用于细胞培养实验溶解后过滤除菌。推荐溶剂水，PBS溶液。

CAS：31282-04-9
储存条件：-20℃
别名：湿霉素乙;效高素;潮霉素B干粉
效价：≥950U/mg

潮霉素B是由吸水链霉菌代谢产生的一种*基糖苷类抗生素，通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成，从而杀死原核(如细菌)、真核(如酵母菌，真菌)和高等哺乳动物真核细胞。

大肠杆菌来源的潮霉素抗性基因(hyg或hph)，编码潮霉素B磷酸转移酶，将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物，从而起到解毒作用。针对这一原理，潮霉素B是一种非常有用的选择性标记，用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。另外，由于作用模式的差异，常与G418，Zeocin™ 和Blasticidin S联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。潮霉素B还能用作抗病毒剂，因其选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞，且具有抑制翻译的功效。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。

使用方法

1. 常用筛选浓度
注意：潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。

2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度，可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现，至少选择5个浓度。
1)第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜;注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2)根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。

终浓度(μg/mL)	培养基体积(ml)	5mg/ml潮霉素B加入体积(ml)
50	9.9	0.1
100	9.8	0.2
250	9.5	0.5
500	9.0	1.0
750	8.5	1.5
1000	8.0	2.0

3)第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4)接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5)按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

3. 稳定转染细胞的筛选
1)转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果最好。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%。
2)每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3)筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4)挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5)之后更换正常培养基培养即可。

注意事项：
1)潮霉素B的抗性基因(hyg或hph)除了来自大肠杆菌之外，还发现于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
2)本品为有毒化合物，避免与皮肤和眼睛接触，请小心操作。
3)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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