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- 详细信息
- 技术资料
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877
- 英文名:
Alizarin Red S Staining Kit
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
常温
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京茜素红S染色试剂盒价格厂家,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京茜素红S染色试剂盒价格厂家
产地:国产|进口
规格:100mL
英文名:Alizarin Red S Staining Kit
编号:BTN121105
茜素红S染色试剂中的茜素红S可通过与*离子和其他金属离子发生鳌和反应而形成可以在显微镜下直接观察的带颜色的复合物。本产品就是基于此原理而开发。
产品特点:
1.即开即用,用户不需要单独准备各种溶液。
2.操作简捷,性能稳定,显色清晰。
3.可用于组织切片中的*沉积,尤其适用于骨细胞或组织的病理和生理研究。
4.可用于检测动物原生代或培养细胞的*沉积。
5.本产品为通用型,不但用于*离子的检测,还可用于FeCl2和CdCl2的检测。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 茜素红S染色 | 100ml |
| 茜素红S pH调节液 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
使用方法:
注意:试剂具有腐蚀性,操作时须带手套。实验时可以用含金属离子的切片或培养细胞作为阳性对照。可溶性蛋白会干扰茜素红S与*的相互作用,所以样品必须经过固定处理(以去除细胞中的可溶性蛋白)。对培养细胞,还必须洗涤去掉培养基(含血清等蛋白成分)。茜素红S与*的螯合反应需要在水相发生,因此加入茜素红S 前最好用水溶液洗涤掉前面操作所残留的有机溶剂。
一、茜素红S染色液的准备
1、根据所需检查的金属离子按下表选择茜素红S染色液的最佳pH。
| 金属离子 | 最佳PH | 呈现的颜色 |
| CaCl2,CaPO4、CaCO3 | 4.28-6.75 | 橙红 |
| FeCl2 | 5.62-8.05 | 深紫 |
| CdCl2 | 5.11-5.78 | 品红 |
2.用茜素红S pH调节液将茜素红S染色液调到所需的pH值。
二、染色载片上细胞
3.用缓冲中性福尔马林、福尔马林-乙醇混合液或乙醇作为固定剂固定铺在载玻片上的细胞(本试剂盒不提供上述固定剂)。
4.将细胞放入95%乙醇中处理。
5.将载玻片在空气中干燥。
6.将载玻片放在装有茜素红S染色液的染色缸中染色1-5分钟。注意:此步需要密切控制,最好每隔一分钟放在显微镜下检测,最佳时间随样品中盐离子的多少不同而不同。
7.用蒸馏水洗涤载片一次。
8.用丙*(代"酮")浸泡载波片30秒。
9.用丙*(代"酮")-二甲*混合液(50:50)浸泡浸泡载波片15秒。
10.肉眼可见红色或紫色(取决于所检查的离子)即可终止染色,放光学显微镜观察。*沉积阳性细胞将呈现桔红色。
三、染色石蜡包埋切片
11.按常规方法进行固定、包埋、切片、脱蜡和水化等操作,直到70%乙醇处理这步。注意:固定剂最好使用4%的副甲醛或10%福尔马林,切片厚度最好在0.4μm。
12.将切片浸入蒸馏水中。
13.将切片浸泡在茜素红S染色液中30秒-5分钟,具体时间以肉眼或显微镜下可见桔红色斑点为准。
14.用滤纸吸尽染色液后浸入丙*(代"酮")20次。
15.再进入丙*(代"酮")-二甲*混合液(50:50)20次。
16.最后用二甲*处理并用封固剂封片。
四:染色细胞培养(最好是26或6孔培养板培养的细胞,便于在显微镜下观察)
17.小心抽去培养液,注意不要吸走细胞。
18.沿壁上缓慢加入1-2mL自备的1×PBS或HBSS缓冲液,然后再小心将加入的液体吸出。
19.每孔中加入自备的无水乙醇直到全部覆盖细胞,室温放置30分钟后小心移弃无水乙醇,室温晾干。此步用于固定细胞。也可用10%甲醛代替无水乙醇,但固定时间只需要15分钟,同时还需要用蒸馏水洗涤3次才能进入下一步。每次洗涤时,先加入蒸馏水,再浸泡5-10分钟,然后小心吸走蒸馏水。注意:操作时不要破坏细胞单层。
20.每个细胞培养孔中加入1mL 茜素红S染色液,在室温下孵育至少20分钟,最后小心吸走茜素红S染色液。
21.加入1mL蒸馏水,然后小心吸走蒸馏水。此为洗涤步骤。注意:洗涤一定不要震荡以避免形成的*沉积物脱落。
22.重复上步操作3次(共洗涤4次)。
23.样品可立即用于显微镜检测。有*沉积的细胞将呈现桔红色。
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·柱式真菌RNA提取试剂盒
编号:BTN80804
英文名称:Fungal RNA Column extraction kit
规格:50次
本试剂盒是在本公司真菌RNA提取试剂盒(BTN60305)基础上改进的柱式产品,跟真菌RNA提取试剂盒相比,它具有下列特点:
1. 柱式操作,更加简单快捷,整个过程只需要约30分钟。
2. RNA 纯度高,OD260/280一般都在2.0左右,可直接用于RT-PCR、Norther杂交、microarray hybridization、cDNA 合成等。
3. RNA产量高,一般在 20-70μg/mL 酵母培养物(约2.0 ×107个细胞)。
4. 非酶细胞破裂法,适用于各种形态和各个种属的真菌及革兰氏阳性细菌,包括 Candida albican、Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pombe 、 Pichia pastoris 、Bacillus subtilis、Staphylococcusaureus等。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 20ml |
| 溶液B | 25ml |
| 溶液C | 75ml |
| 溶液D | 25ml |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| RNA洗脱液 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
1. 将50mg左右的干菌丝(或100mg左右的鲜菌丝、或适当数量的真菌菌落)转移到 1.5mL塑料离心管中。如果是液体真菌培养物,则直接将1-10mL液体真菌在 1.5mL塑料离心管中 12000~15000g离心 1分钟,并弃尽液体培养基(可以分多次离心)。
2. 加入0.4mL溶液A 并充分吹打混匀。如果 A溶液存放时产生沉淀,请置于65℃融化,用前充分摇晃均匀。
3. 加入0.4mL溶液B,剧烈振荡 30秒。
4. 65℃保温 5分钟。
5.室温 12000~15000g离心 3~5分钟,转移上清到一干净的1.5mL塑料离心管中。
6. 再加入0.1mL溶液B和0.1mL自备*仿,振荡混匀 30秒。
7.室温 12000~15000g离心 3~5分钟,转移上清到一自备的、干净的5mL塑料离心管中。
8. 加入相当于上清 3倍体积的溶液C(约1.2-1.5mL)和1倍体积的溶液D(约0.4-0.5mL),充分混匀。
9. 将混合液(约2.5mL)分 3-4次转 移 到离 心 吸 附 柱中 。 每次13000-15000g室温离心半分钟,弃收集管中的穿透液。
10. 用 0.5mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,室温离心半分钟,弃收集管中的穿透液。
11.一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品 OD260/280 比值不高,可以再用 0.5mL 通用洗柱液重复此步一次。
12.室温离心半分钟。此步十分重要,否则残留的洗柱液会影响 RNA的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 1.5mL塑料离心管中,加入30-100μL RNA 洗脱液。
14.室温离心半分钟,离心管中溶液即为RNA样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的电泳检测:
如果需要做 Northern杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA电泳,因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques,28:414 ,2000)。 如 果是简 单 检 测 ,可以使 用 TAE或SuperBuffer-2 DNA/RNA 两用快速电泳液,但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques,9:558,1990)。普通 DNA上样液不含变性剂,也没经过去 RNase处理,所以最好不要使用。 尤其需要注意的是不要使用 TBE进行 RNA电泳,因为TBE 所含硼*(代"酸")是研究多糖的经典方法----硼*(代"酸")络合法中的关键成分,硼*(代"酸")通过与RNA 核糖中的羟基发生络合反应,形成 RNA分子内或RNA分子间的络合复 合物,使同样长度的RNA 具有不同的泳动速度,电泳条带弥散,同时有大的RNA 络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组 DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼*(代"酸")与RNA的数量比例有关,而 RNA样品中污染的其他多糖也会参与此反 应,使硼*(代"酸")对 RNA电泳的影响更复杂,所以TBE 对 RNA电泳的影响 没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行,最好是避免使用。
16. RNA产量产率测定:
将5-10μL RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在 OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL),进而计算出 RNA的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA产量/细菌用量)。注意不要将RNA 稀释在 DEPC 水中检测 OD260和OD280,否则光吸收比在 TE中测得的低 10%-15%。
17. RNA 纯度测定:
无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),OD260/OD230一般在2.0-2.3 之间,如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染,但一般不影响 RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/*仿抽提一次然后酒精沉淀去除,DNA和多糖污染可以分别用我公司的DNA Scavenger和PS Scavenger 去除。测 OD时 RNA 不能过度稀释使 OD 读数低于仪器的有效范围。
疑难解答:
Q:为何从酵母中提取的总 RNA 有 3 条小带?
A:它们分别是70bp左右的tRNA,120bp左右的5S RNA,160bp左右的5.8 S RNA。
Q:上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组 DNA吗?
A:不是。用 TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳 RNA时容易产生此现象,百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用 TBE作电泳液的话)形成的复合物加 RNase处理后,这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象,建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶,也必须在上样前使 RNA变性。使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液 RNAload可以使 RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时,可以使用 TAE或超快电泳液 SuperBuffer-2,最好不要使用 TBE缓冲液,因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物,RNA 很难形成锐利的条带。
Q:如何确认和去处除污染的基因组 DNA?
A:如果怀疑有 DNA污染,可以用 RNase处理 RNA样品,然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失,则表示是基因组 DNA污染。进一步确认可以使用 PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase,由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染,所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。
北京茜素红S染色试剂盒价格厂家关键词:Alizarin Red S Staining Kit,BTN121105,茜素红S染色试剂盒
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