人胎盘羊膜间充质干细胞

人胎盘羊膜间充质干细胞
不同来源间充质干细胞的应用
干细胞是一类具有自我复制和多向分化能力的细胞，可不断自我更新，是形成机体各种组织器官的始祖细胞。干细胞家族中有一个重要的成员——间充质干细胞，它存在于脐带、脐带血、脂肪等组织中，目前已应用于膝关节软骨修复的临床研究中，也就是说，运动人士可像存钱一样把三种组织中任意一种的间充质干细胞储存在“生命银行”的深低温环境中，在将来膝关节软骨受损时随取随用。
脐带血间充质干细胞
脐带血间充质干细胞(UCB-MSCs)是从新生儿脐带血中分离获得的一种多功能干细胞，近年来，有研究利用UCB-MSCs 和透明质酸复合水凝胶材料修复膝关节软骨全层缺损， 已在大鼠模型中取得显著成果。
脐带间充质干细胞
脐带间充质干细胞(UC-MSCs)是存在于新生儿脐带华通氏胶和血管周围组织中的一种间充质干细胞。因其取材方便，无道德伦理争议，可获取的细胞数量多、增殖能力强、免疫调节作用大，分泌细胞生长因子的总量也非常高，便于扩增和传代，同时又没有配型、排异等问题，极其适合用于临床研究和应用。
脂肪间充质干细胞
脂肪组织是成人获取间充质干细胞的一个重要来源，脂肪干细胞(AD-MSCs) 经分离后能稳定扩增， 并因其多向分化潜能对膝关节软骨临床修复有重要的意义。
如何选择间充质干细胞培养基呢？
随着各种间充质干细胞研究的深入，间充质干细胞培养基已经成为干细胞研究的必备品。间充质干细胞培养基品质的好坏直接影响细胞的状态以及实验的成败。
主要特性：
间充质干细胞(MSCs)是属于中胚层的一类多能干细胞，主要存在于结缔组织和器官间质中，以骨髓组织中含量最为丰富，由于骨髓是其主要来源，因此统称为骨髓间充质干细胞。骨髓间充质干细胞具有以下特性：
一、具有强大的增殖能力和多向分化潜能，在适宜的体内或体外环境下具有分化为肌细胞、肝细胞、成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、基质细胞等多种细胞的能力。
二、具有免疫调节功能，通过细胞间的相互作用及产生细胞因子抑制T细胞的增殖及其免疫反应 ，从而发挥免疫重建的功能。
三、具有来源方便，易于分离、培养、扩增和纯化，多次传代扩增后仍具有干细胞特性，不存在免疫排斥的特性。
四、面目模糊，表面抗原不明显，异体移植排异较轻，配型要求不严格。
正是由于间充质干细胞所具备的这些免疫学特性，使其在血液病治疗方面具有广阔的临床应用前景。通过自体移植可以重建组织器官的结构和功能，并且可避免免疫排斥反应。
人胎盘羊膜间充质干细胞
规格：(1-1.5)×10^6 个细胞/管
冻存代次: P4
保存条件: 液氮
警告：产品冻存液中含有DMSO，具有潜在的生物公害，操作者请谨慎处理。

2. 产品介绍
人胎盘羊膜间充质干细胞来自人胎儿胎盘羊膜，是一类具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞，具有来源广泛、可塑性强、对供者无不利影响，无异体免疫排斥反应、避免伦理争议等诸多优点，因此成为组织工程、细胞治疗等基础研究或应用领域的理想种子细胞，具有广阔的临床应用前景，可用于治疗内分泌系统、神经系统、循环系统、免疫系统、血液系统等疾病，同时可作为细胞模型被广泛应用于体内外的细胞增殖、移植、分化和免疫调控研究。

3. 质量控制
(1) 本产品经过了病毒，细菌，真菌，支原体。
(2) 本产品经过细胞复苏活率，流式鉴定，细胞周期，生长曲线，倍增时间，克隆形成率，分化潜能检测。

4. 产品特性
(1) 本产品复苏细胞活率达至80%以上。
(2) 操作规范的条件下，本产品具有良好的传代能力，至少传至10代。
(3) 本产品具有较强的分化潜能，能分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等。
(4) 流式检测鉴定（CD73+，CD90+，CD105+）≥95%，（HLA-DR+、CD45+、CD34+）≦2%。(5) 该产品仅用于科研，不可应用于临床治疗或其他方面。

5. 处理原则
(1) 在无菌的条件下处理该产品。
(2) 人胎盘羊膜间充质干细胞复苏培养后，建议冻存一部分细胞作为备份。
(3) 建议用于科研的细胞代次不超过10代。
(4) 建议细胞接种密度是(1.0-1.3)×104个活细胞/cm2,具体数量根据细胞生长状态加以调整。

6. 人胎盘羊膜间充质干细胞的复苏
(1) 所需材料 人胎盘羊膜间充质干细胞完全培养基其他选择培养基，配比如下：100ml DMEM/F12培养基 + (10~15) ml FBS +(1~2ml) 非必须氨基酸 + (1~2ml) L-谷氨酰胺 Phosphate-BufferedSaline（1×PBS）
(2) 复苏步骤 从低温容器中取出冻存管，迅速置于37°C水浴中连续晃动，1min内快速解冻； 在无菌条件下，将完全解冻的细胞悬液转移至含有10-15ml细胞培养基的离心管中； 1500 rpm 离心5 min，吸弃离心后上清； 加入适量的新鲜培养基重悬细胞，进行细胞计数及活率检测； 根据细胞数量及活率，用完全培养基调整细胞接种密度为(1.0-1.3)×104个活细胞/cm2，将细胞悬液加入培养器皿中，轻轻摇晃使细胞均匀分布； 在培养器皿上做好标记，转移至5%CO2、37℃、饱和湿度为95%的CO2培养箱中培养。 观察细胞状态，隔天换液；当细胞汇合度达到80-90%时，可进行传代处理。 图1 已贴壁的人胎盘羊膜间充质干细胞(40× )

7. 人胎盘羊膜间充质干细胞的传代
(1) 所需材料 人胎盘羊膜间充质干细胞完全培养基其他可用培养基，配比如下：100ml DMEM/F12培养基 + (10~15) ml FBS + (1~2ml) 非必须氨基酸 + (1~2ml) L-谷氨酰胺 Phosphate-Buffered Saline（1×PBS） 0.25%胰蛋白酶溶液
(2) 传代步骤 提前将完全培养基、PBS、胰蛋白酶溶液放置室温。 在无菌条件下，小心吸弃培养器皿中的培养基。 用1×PBS清洗细胞2次，注意操作轻柔，不要损害贴壁细胞。 加入0.25%胰蛋白酶溶液消化细胞(根据所用培养器皿确定加入量)，室温静置消化2-3min，显微镜下观察消化情况。 当观察至80%以上细胞变圆时，加入完全培养基终止消化。 用移液管吸取溶液，反复吹打培养器皿皿底。吹打时动作轻柔，尽量避免产生气泡。 将细胞悬液转移至离心管中，1500rpm离心5min。 吸弃上清，加入适量完全培养基重悬细胞沉淀，计数。 调整细胞密度为(1.0-1.3)×104个活细胞/cm2，将细胞悬液加入培养器皿中，轻轻摇晃使细胞均匀分布。 在培养器皿上做好标记，转移至5%CO2、37℃、饱和湿度为95%的CO2培养箱中培养。 显微镜下观察细胞状态，当汇合度达到80-90%时，可进行下一次传代处理。

8. 人胎盘羊膜间充质干细胞的冻存
(1) 所需材料 人胎盘羊膜间充质干细胞完全培养基其他可用培养基，配比如下：100ml DMEM/F12培养基 + (10~15) ml FBS + (1~2ml) 非必须氨基酸 + (1~2ml) L-谷氨酰胺 Phosphate-BufferedSaline（1×PBS） 0.25%胰蛋白酶溶液 间充质干细胞冻存液其他可用冻存液配方：90% FBS + 10% DMSO
(2) 冻存步骤 提前将培养基、PBS、胰蛋白酶溶液放置室温。 在无菌条件下，小心吸弃培养器皿中的培养基。 用1×PBS清洗细胞2次，注意操作轻柔，不要损害贴壁细胞。 加入0.25%胰蛋白酶溶液消化细胞(根据所用培养器皿确定加入量)，室温静置消化2-3min，显微镜下观察消化情况。 当观察至80%以上细胞变圆时，加入完全培养基终止消化。 用移液管吸取溶液，反复吹打培养器皿皿底。吹打时动作轻柔，尽量避免产生气泡。 将细胞悬液转移至离心管中，1500rpm离心5min，同时取样进行细胞计数。 弃离心后上清，根据细胞计数结果，使用细胞冻存液重悬细胞，调整细胞密度为105-106个/ml，轻轻吹打混匀后分装至冻存管中，旋紧冻存管盖。 冻存管做好标记，进行程序降温冻存，可选择冻存盒或程序降温仪其中一种方式冻存。1) 冻存盒冻存方法：冻存盒直接放于-80℃，第二天将细胞转移至液氮中长期冻存；2) 程序降温仪冻存方法：按照间充质干细胞预设程序程序降温，降温至-80℃以下后直接将细胞转移至液氮中长期冻存。