BCA蛋白定量试剂盒哪里买

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名称：BCA蛋白定量试剂盒哪里买
编号：WE0276
产地：国产|进口
英文名：BCA Protein Assay Kit
规格：500次微孔板(50管次)
  BCA蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。本产品是基于BCA(Bicin-choninic Acid)法研制而成，实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu2+络合生成络合物，同时将Cu2+还原成Cu+。BCA试剂可敏感特异地与Cu+结合，形成稳定的有颜色的复合物。在562 nm处有高的光吸收值，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量。本试剂盒含有牛血清白蛋白(BSA)溶液作为蛋白质标准品溶液，测定范围为20～2000μg/ml。

试剂盒组成：

 

组成	规格
BCA-A	2×50ml
BCA-B	3ml
BSA Standard Solution(2mg/ml)	2ml

保存条件：BSA Standard Solution：2～8℃，其它组分：室温

注意事项：
1、本产品可以采用分光光度计(试管检测法)或者酶标仪(微孔检测法)测定蛋白浓度。
2、建议每次测定蛋白样品时，绘制标准曲线，以获得准确数据。
3、BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致(可用1×PBS或0.9%生理盐水稀释)。
4、如待测样品中含较多的干扰物质(具体见附表1)，可采用Bradford法蛋白定量试剂盒(WE0275)或其他蛋白定量产品。

使用方法：
1、稀释BSA标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。

管号	稀释液用量(μl)	BSA标准品用量(μl)	BSA标准品最终浓度(μg/μl)
A	0	100	2
B	200	200	1
C	200	200(从B管中取)	0.5
D	200	200(从C管中取)	0.25
E	200	200(从D管中取)	0.125
F	200	200(从E管中取)	0.0625
G	200	0	0(空白)

2、配置BCA工作液：
1)计算BCA工作液总量：
BCA工作液总量=(BSA标准品样本个数+未知样本个数)×复孔数×每个样本BCA工作液体积
举例：BSA标准品样本个数为7个，未知样本个数2个，复孔数3个。
试管检测法：
BCA工作液总量=(7个BSA标准品样本+2个未知样本)×3个复孔×2ml/每个样本工作液体积=54ml
微孔检测法：
BCA工作液总量=(7个BSA标准品样本+2个未知样本)×3个复孔×200μl/每个样本工作液体积=5.4ml
2)根据计算出的BCA工作液需要总量，将BCA-A和BCA-B按照50:1的体积比，配制BCA工作液，充分混匀。
注意：
a. 由于加样可能存在误差，建议配制BCA工作液时，多配制1-2个孔。
b. 新配制的BCA工作液室温密封条件下可稳定保存24小时。

3、定量检测
①试管检测法(蛋白浓度检测范围：20-2000μg/ml)
1)按上表，将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各100μl分别加到作好标记的试管中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。
2)向每个试管中各加入2ml BCA工作液，充分混匀，37℃水浴中孵育30分钟 ，将各管冷却至室温，须在3-5分钟内完成检测。
3)用分光光度计在562 nm处，测定每个样品及BSA标准品的吸光值，同时做好记录。
4)绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
② 微孔检测法(蛋白浓度检测范围：20-2000μg/ml)
1)按上表，将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各25μl分别加到作好标记的96孔板微孔中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。
2)每孔加入200μl BCA工作液，充分混匀，盖上96孔板盖，37℃孵育30分钟，冷却至室温，须在3-5分钟内完成检测。
3)用酶标仪在540-590 nm范围内，测定每个样品及BSA标准品的吸光值，同时做好记录。
4)绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
注意：
a. BCA法测定蛋白浓度时，吸光值会随着时间的延长不断加深。因此所有样品测定需在3-5分钟内完成，否则会影响蛋白定量的准确度。
b. 建议以去除背景值后的吸光值读数绘制标准曲线。
c. 由于操作误差导致标准品读数严重偏离线性曲线的应舍去。
d. 未知样品浓度可以从标准曲线方程中计算得出, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。
e. 如果得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。

4、BCA蛋白定量分析结果举例：
微孔板检测法结果

蛋白浓度(μg/μl)	原始吸光值	去除背景值后的吸光值
0	0.086(背景值)	0.000
0.125	0.123	0.037
0.25	0.280	0.194
0.5	0.551	0.465
1	1.068	0.982
2	2.000	1.913

附表1. 干扰物质表
 

化合物	耐受浓度
缓冲液
乙酸盐	0.2M
甘*酸	1M
HEPES	0.1M
MES	50mM
MOPS	50mM
Na+-柠檬酸	＜1mM
PIPES	50mM
磷酸*	0.1M
乙酸*	0.2M pH 5.5
TES	50mM
Tris	0.1M
盐类
硫*(代"酸")铵	干扰
NaCl	1M
尿素	3M
极性化合物
DMSO	5%
甘油	10%
去垢剂和变性剂
Brij35	1%
CHAPS	1%
盐*(代"酸")胍	4M
NP-40	1%
辛葡糖	1%
SDS	1%
Triton X-100	1%
糖类
葡萄糖	10mM
蔗糖	1M
螯合剂
EDTA	10mM
还原剂
β-巯基乙醇	50μM
DTT	1mM
其他
脂类	干扰
HCl/NaOH	0.1M

储存条件：2～8℃

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·鼠尾基因组DNA提取试剂盒
编号：WE0186
英文名称：Mouse&Rat Tail Genomic DNA Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的小鼠或大鼠鼠尾中提取高纯度的总DNA。该试剂盒提供的方法简单易行，纯化过程无需*酚或*仿抽提，可获得最大为50 kb的DNA片段，同时对100 bp的片段也能有效回收。本试剂盒采用独特的裂解液，有效裂解鼠尾样本，优化的缓冲体系使裂解鼠尾后产生的DNA高效结合到硅基质吸附柱上，而其他污染物可流过膜；PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可得到高纯度的DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer GTT	15ml
Buffer GL	15ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml
Buffer GE	15ml
蛋白酶K	25 mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml
吸附柱DM及收集管	50套

自备试剂：无水乙醇

产品特点
1、专用于从大鼠或小鼠的鼠尾中分离纯化高纯度总DNA。
2、无需有机溶剂提取以及乙醇沉淀，彻底去除污染物及下游反应抑制物，快速提取高品质DNA。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
4、使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GL于56℃水浴重新溶解。

操作步骤：
1、取一段大鼠或两段小鼠长度为0.4-0.6 cm的尾巴，在液氮中研磨成细粉或剪碎放入离心管(自备)中。加入180μl Buffer GTT，振荡混匀。
注意：确保组织的起始量不要超出推荐范围。
2、加入20μl 蛋白酶K ，涡旋振荡，彻底混匀。
3、置于56℃水浴，直至组织溶液完全清澈，一般情况下需要消化6-8小时，孵育过程中涡旋震荡，使样品均匀分散。
注意：1)如果孵育和涡旋震荡后仍然有胶状物质，必要时过夜消化或再加入20μl 蛋白酶K 消化，不会影响后续操作。
2)如需去除RNA，在上述步骤完成后加入4μl 100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置5-10分钟。
4、12000rpm(~～13400×g)离心1分钟，以除掉未消化的类似于鼠毛等组织。将上清转移到一个新的离心管(自备)中。
5、加入200μl Buffer GL，涡旋震荡，充分混匀。加入200μl无水乙醇，涡旋震荡，充分混匀。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)加入Buffer GL和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
2)如果多个样品一起操作，Buffer GL和无水乙醇可以等比例混匀后一起加入样品。
3)加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
6、将步骤5中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤8。
9、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
10、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μlBuffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-200μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤10；若洗脱体积小于200μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。


BCA蛋白定量试剂盒哪里买关键词：WE0276,BCA Protein Assay Kit,BCA蛋白定量试剂盒


·PVDF膜(0.22μM)
编号：WE0300
英文名称：PVDF Membrane(0.22μM)
规格：1 sheet

·无内毒素质粒中提试剂盒
编号：WE0166
英文名称：NoEndo Plasmid Midi Kit
规格：50次
  内毒素是质粒提取中常见的污染物，由于真核细胞对内毒素非常敏感，因此，如果质粒中含有内毒素会大大降低真核细胞转染效率。本试剂盒提供一种简单、快捷、高效提取无内毒素质粒的新方法，提取的质粒最大限度去除内毒素，并能有效去除基因组DNA、RNA、蛋白等污染。

  本试剂盒通过碱裂解法裂解细胞，新型硅基质膜高效专一的结合质粒DNA，同时采用特殊的缓冲液系统和除内毒素过滤柱，有效去除内毒素、蛋白等杂质。由本试剂盒所得质粒纯度高、质量稳定，特别适用于细胞转染，同时也可用于DNA测序，PCR，基于PCR的突变，体外转录，转化细菌，内切酶消化等下游实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer P1	30ml
Buffer P2	30ml
Buffer E3	30ml
Buffer PS	15ml
Buffer PW(浓缩液)	10ml
Endo-Free Buffer EB	10ml
RNase A(10 mg/ml)	600μl
过滤柱FM及收集管	50套
吸附柱DL及收集管	50套

自备试剂：无水乙醇、异丙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，更长时间保存可置于2～8℃，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可稳定保存6个月。
2、第一次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混匀，置于2–8℃保存，使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请先检查Buffer P2 和Buffer E3是否出现结晶或沉淀，如有结晶或沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。
5、注意不要直接接触Buffer P2和Buffer E3，使用后应立即盖紧盖子。
6、提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。

操作步骤：
1、取5-15ml过夜培养的菌液，加入离心管(自备)中，13000rpm(~～～16200×g)离心1分钟收集细菌，尽量吸弃全部上清。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入500μl Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A)，使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮细菌沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，将会影响裂解效果，使提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入500μl Buffer P2，温和地上下颠倒混匀8-10次，使菌体充分裂解，室温放置3-5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。
注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。如果溶液未变得清亮，提示可能菌量过大，裂解不彻底，应减少菌体量。
4、向离心管中加入500μl Buffer E3，立即上下颠倒混匀8-10次，此时出现白色絮状沉淀，室温放置5分钟。13000rpm离心5分钟，吸取上清，将上清加入过滤柱FM中(已装入收集管)，13000rpm离心1分钟过滤，将收集管中的滤液转移到离心管(自备)中。
注意：
1)Buffer E3 加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。
2)吸附柱的最大容积为750μl，所以上清液请分两次过滤，并混合于同一自备离心管中。
5、向滤液中加入450μl异丙醇，上下颠倒混匀。
6、柱平衡：向已装入收集管的吸附柱中加入200μl Buffer PS，13000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、将步骤5中滤液与异丙醇的混合溶液转移到平衡好的吸附柱(已装入收集管)中。
8、13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：吸附柱的最大容积为750μl，所以第5步中所得溶液分多次过柱。
9、向吸附柱中加入750μl Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇)，13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。
10、将吸附柱重新放回收集管中，13000rpm离心1分钟。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
11、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附膜的中间部位加入100-200μl Endo-Free Buffer EB，室温放置2-5分钟，13000rpm离心2分钟。-20℃保存质粒。
注意：
1)为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2-5分钟，13000rpm离心2分钟。Endo-Free Buffer EB在65-70℃水浴预热，适当延长吸附和洗脱的时间，可以增加提取效率。
2)质粒拷贝数较低或>10 kb时，Endo-Free Buffer EB在65-70℃水浴预热，可以增加提取效率。

储存条件：室温(15～30℃)


BCA蛋白定量试剂盒哪里买关键词：WE0276,BCA Protein Assay Kit,BCA蛋白定量试剂盒


·TA快速连接试剂盒(pUC-T Simple)(含载体，连接酶)
编号：WE0247
英文名称：pUC-T Simple TA Cloning Kit
规格：20次
  pUC-T Simple载体是一种高效克隆PCR产物的专用载体，它是由pUC18载体在EcoR V酶切位点处切开，在两侧的3＇端添加T而成。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR产物的3＇端添加一个A，可以与pUC-T 3＇端的T互补连接，同时它消除了pUC18载体上的多克隆酶切位点，克隆后的PCR产物将无法使用载体上的限制酶切下，需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。此时如果使用PCR扩增引物导入的酶切位点进行DNA酶切时，酶切反应将不会受到T载体上其它多克隆酶切位点上的限制酶影响，可以大大提高酶切效率，增加亚克隆成功率。
  试剂盒中配备高效率的T4 DNA Ligase和为快速高效DNA连接优化的2×Quick Ligation Reaction Buffer。连接效率相当于用T4 DNA Ligase 进行常规连接1小时。带有插入片段的重组子可根据α互补原理，进行蓝白斑筛选，判断载体中有无外源基因的插入。克隆后可以用BcaBEST Sequencing Primers和 M13通用引物对PCR产物进行测序。

试剂盒组成：

组份	20次
pUC-T Simple(50 n g/μl)	20μl
Control Insert(50ng/μl)	10μl
Quick T4 DNA Ligase	20μl
2×Quick Ligation Reaction Buffer	120μl

注意事项：

1、Insert DNA 要求
1)连接使用的PCR片段3’末端应带有“A”尾。有些高保真DNA聚合酶，如我公司的Pfu扩增的PCR产物是平滑末端，可使用加A试剂盒加上A尾后，再进行T载体克隆。
2)PCR产物建议进行切胶回收纯化后再进行T载体克隆，以免PCR产物中的非特异片段或残存引物等杂质影响。推荐使用WE0168快速琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒。

2、连接反应要求
1)本试剂盒能使大多数连接反应在25℃条件下5分钟甚至更短时间内达到反应终点，增加反应时间反应效率不会增强。如用快速连接反应1小时后，转化效率会明显降低；如25℃快速连接反应过夜，则转化效率会下降到75%。
2)2×Quick Ligation Reaction Buffer含有ATP，使用前置于冰上使其融化后充分混匀，建议初次使用分装成小管冻存，避免其反复冻融影响DNA连接效率。
3)由于T4 DNA Ligase中含有甘油，比较粘稠容易挂壁，建议使用之前短暂离心将液体收集到管底，取样时枪头尽量不要深入液面太深，以免粘在枪头上造成损失。
4)如快速连接产物用于电转，因快速连接反应体系中的PEG会影响电转效率，建议使用离心柱将连接产物进行DNA纯化(如WE0170快速DNA产物纯化试剂盒)后再进行电转。

3、感受态细胞要求
建议使用高效的热击转化感受态细胞，这样才可能得到比较理想的阳性克隆，如需进行蓝白筛选，宿主细胞必须具有正确的基因型(F´编码的【lacZ ΔM15】)产生ω片段，才能与载体DNA产生的LacZ α 多肽结合，表现出β-半乳糖苷酶活性(α互补)。pUC-T Simple载体以pUC18载体为基础构建而成，因此，适合pUC18载体的感受态细胞都可以使用。推荐使用本公司WE0251 TOP10感受态细胞、WE0252 DH5α感受态细胞。

4、阳性克隆筛选
阳性DNA片段成功插入至pUC-T Simple Vector中后，一般情况下β-半乳糖苷酶的表达将受到破坏，重组克隆体在含有X-Gal、IPTG、Amp的LB固体培养基上培养时将显示白色菌落。但有时比较短的DNA片段插入载体时，基因的读码框有可能正好与LacZ的读码框相吻合，克隆体也会显示蓝色菌落。

5、阳性对照
为了确认实验操作的正确性，以及实验试剂的有效性，我们建议使用本试剂盒中配备的Control Insert(750 bp)进行阳性对照实验。

使用方法：

1、按以下体系配制反应液：

成分	反应体系	对照体系
pUC-T Simple(50ng/μl)	1μl	1μl
DNA 插入片段 *	0.1 -0.3 pmol	--
Control Insert DNA	--	1μl
2×Quick Ligation Reaction Buffer	5μl	5μl
Quick T4 DNA Ligase	1μl	1μl
RNase-Free Water	补足至10μl	补足至10μl

Insert DNA的使用量：在进行克隆时，Vector DNA和 Insert DNA的摩尔比一般为：1:2-1:10，可根据实验情况选择适当的Vector DNA和 Insert DNA的摩尔数比。Insert DNA的使用量=nmol数×660×Insert DNA bp数。本载体1μl(50ng)的摩尔数约为0.03 pmol。

2、轻轻混合，短暂离心。25℃反应5分钟。
注意：反应时间不要超过15分钟，否则会降低连接效率。
3、反应结束后，将DNA连接产物存放于0-4℃，而后进行转化实验；也可将DNA连接产物置于-20℃保存。
注意：勿进行加热失活反应。
4、将连接产物加入50μl感受态细胞中(将感受态细胞置于冰上融化)，冰浴30分钟。
注意：用化学法转化时，连接产物的加入量不要超过感受态细胞体积的10%。
5、42℃热击45秒钟，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
6、加入450μl无菌SOC或LB培养基，混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟，使菌体复苏。
7、根据实验要求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有X-Gal、IPTG和Amp的LB固体培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃，直至液体被吸收后，倒置培养，37℃培养12-16小时。
8、计算白、蓝色菌落，挑选白色菌落，使用PCR法或酶切法鉴定插入片段是否正确。




储存条件：-20℃。

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