北京WE0289型SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×)

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京WE0289型SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×)厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京WE0289型SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×)厂家
规格：5×2ml
英文名：SDS-PAGE Loading Buffer(non-Reducing，5×)
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
  SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×)是以*酚蓝为染料，5倍浓缩的SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液，应用于非还原型SDS-PAGE的蛋白样品制备和上样。

注意事项：
1、加样前在室温或37-40℃数分钟解冻后轻轻摇匀，以确保溶液混合均匀。
2、本品不含还原剂如巯基乙醇或DTT。
3、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

操作步骤：
1、将SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×)与蛋白样品按照1：4的比例混匀。
2、将蛋白样品置于沸水浴中加热3-5分钟。
3、待蛋白样品充分变性后冷却至室温，以小于3000 rpm的条件离心30秒。
4、离心后，以取适量上清，直接加入SDS-PAGE凝胶加样孔内。进行常规电泳。

储存条件：-20℃

北京WE0289型SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×)厂家极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·一步法快速WB试剂盒(兔源一抗)
编号：WE0298
英文名称：One Step Western Kit HRP(Rabbit)
规格：50次
  本试剂盒是百奥莱博最新研发的Western Blot检测试剂盒，能够在1小时左右得到高质量的Western Blot结果，且操作简便、检测灵敏度高、背景低、不需再加入二抗、系统稳定性强。常规的Western Blot间接法检测过程(封闭、一抗结合和二抗结合)需要较长的时间，实验流程复杂且需要多步条件优化。胶上的蛋白转移到载体膜上后，使用试剂盒中的封闭液孵育5 min，再用抗体反应液处理后的一抗孵育载体膜，经洗涤三次(每次5 min)后，即可进行发光或显色检测。本试剂盒针对目的蛋白一抗为兔来源的实验系统使用。

组份	50次
Blocking Buffer	500ml
Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)	5×1ml
Dilution Buffer	500ml
Wash Buffer(10×)	500ml

注意事项：
1、客户需自己准备兔来源的一抗。
2、使用Blocking Buffer封闭液、Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)抗体反应液(兔)、Wash Buffer(10×)漂洗液之前请充分混匀。
3、漂洗液如在2～8℃保存时出现沉淀，请恢复到室温，把沉淀溶解后正常使用，1×漂洗液可在室温保存一个月。
4、建议转膜完成后用丽春红等试剂染色，并把膜上多余部分剪去以增加试剂的使用效率。
5、一抗和抗体反应液HRP(兔)需要通过预实验来确定最佳的稀释用量。
6、抗体反应液HRP(兔)、抗体稀释液和抗体用量可根据膜的大小按比例放大或减少。
7、加入一抗的抗体稀释液可以回收重复使用一次。特异性及亲和力低的抗体不建议重复使用。回收后抗体如在1-2天内使用放置在2～8℃，长期保存请在-20℃冻存，避免多次反复冻融。
8、如果存在较高背景的情况，请调整抗体的用量，并增加洗膜次数。
9、试剂盒内所有试剂请于2～8℃保存，避免冻融。

操作步骤：
本产品适用于转膜完成后的封闭及抗体孵育步骤，以5cm×8cm 膜为例：

1、漂洗液准备：取10ml Wash Buffer(10×)用蒸馏水稀释至100ml，即为1×Wash Buffer，待用。每次洗膜用8-10ml。
2、封闭：转膜完成后，将膜浸没到10ml Blocking Buffer中，室温封闭5分钟。
3、漂洗：倒掉封闭液，加入8-10ml 1×Wash Buffer，于摇床上用较大速度漂洗1分钟。
4、洗膜的同时可准备抗体孵育液：取Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)100μl到离心管中，加入兔源一抗3-10μg，枪头吸打至充分混匀，室温孵育5分钟。加入至10ml Dilution Buffer中，充分混匀。
注意：
1)一抗的用量也可根据抗体的稀释度来进行调整。以抗体的最终稀释度1:1000为例，取100μl抗体反应液HRP(兔)到EP管中，加入10μl一抗，加入到10ml 抗体稀释液中，充分混匀，室温孵育5分钟。
2)如果膜面积较小，可按比例减少抗体、反应液及稀释液的用量。
5、完成步骤3后，倒掉漂洗液，将一抗、Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)及Dilution Buffer混合而成的抗体孵育液加到膜上(确保孵育液完全浸没膜表面)，在摇床上以60 rpm左右的速度室温孵育40分钟。
6、弃去(回收)抗体孵育液，用配制的1×Wash Buffer漂洗3-5次，每次3分钟。
7、进行后续检测。建议采用ECL或者DAB法进行检测。

应用实例：


实例一 抗原为293T细胞全裂解液
A：普通WB对照：beta-actin兔多抗 3.3ug 室温孵育40min，洗膜后二抗羊抗兔-HRP(WE0394)1：10000稀释，室温40min，ECL(WE0308)曝光


实例二 抗原为293T细胞全裂解液
C：普通WB对照：PAK1，Epitomics兔单抗1：1000 室温孵育40min，洗膜后二抗羊抗兔-HRP(WE0394)1：10000稀释，室温40min，ECL(WE0308)曝光
D：一步法WB： Epitomics兔单抗1：1000 室温孵育40min，ECL(WE0308)曝光。

常见问题及解决方法：

问题	可能原因	解决方案
信号太弱或者 看不到条带	蛋白上样量太少	进行SDS-PAGE电泳时加大上样量。
	蛋白转膜效率太低	优化转膜时间或者电流，确保转膜时膜与胶之间没有气泡。
	一抗亲和力较低	增加膜在溶液中的孵育时间或者增加抗 体浓度可以增加信号
	一抗亲和力较低	对于低亲和力抗体来说，减少洗膜时间可以增加信号。由每次10 分钟，减少到每次5分钟可以增加信号。
背景偏高	一抗使用过量	减少一抗的使用量。
	一抗有非特异性结合或者 与封闭试剂有交叉反应	使用和二抗来源一致的血清或者无IgG的BSA。
	洗膜时间太短	增加洗涤的步骤可以进一步的降低背景。
	曝光显影时间过长	减少曝光时间。如果信号和背景都高，可以等待一段时间 ，等背景信号减弱后，再进行曝光。
	容器或者试剂被污染	每次洗涤的时候使用清洁的容器。带手套，使用清洁的镊子处理膜。

储存条件：2～8℃保存，避免冷冻


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·红细胞裂解液
编号：WE0218
英文名称：RBC Lysis Buffer
规格：100ml
  本产品是利用细胞内外盐离子浓度差可导致细胞膜胀破的原理来裂解红细胞，主要用于实验中红细胞的去除，比如：淋巴细胞的分离纯化，经酶消化分散的组织细胞的分离纯化，以及组织细胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。

使用方法：
1、向1倍体积的新鲜全血中加入3倍体积的红细胞裂解液(如1ml新鲜全血加入3ml红细胞裂解液)轻轻涡旋或颠倒混匀。
注意：如果对新鲜组织细胞进行处理，需经胰酶等消化成单个细胞悬液，离心收集细胞后再进行后续操作。
2、冰上孵育15分钟，其间轻轻涡旋混匀两次。
注意：红细胞裂解后，溶液应该是清亮透明的。
3、4℃，450×g离心10分钟收集白细胞，小心吸弃上清液。
4、向以上沉淀中加入两倍体积的红细胞裂解液，轻轻涡旋充分重悬白细胞(如起始血液为1ml，则加入2ml的红细胞裂解液)。
5、4℃，450×g离心10分钟收集白细胞，小心并彻底吸去上清液。
6、重悬细胞，用于后续实验。
注意：如提取RNA，最好从此步开始使用无RNase的溶液进行。

储存条件：室温(15～30℃)


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PY02-034  胰蛋白胨大豆肉汤  250克  
F020103 兔抗辣根过氧化物酶抗体 Rabbit Anti-HRP
11096-37-0 Transferrin  转铁蛋白
BTN80202 柱式DNA PAGE胶回收试盒 Column PAGE DNABACK
PCR扩增缓冲液(10×,pH8.3)   10ml
ARB10295 人天门冬*酸转*酶/谷草转*酶(GOT/GPT)elisa检测说明书 Human aspartate aminotransferase,got/gpt ELISA KIT
989-38-8 Sundan BlackB 苏丹黑B
间硝基*(代"*")乙酮 Acetosyringone 121-89-1
BL0852 兔抗大鼠IgG纯化抗体
6104-59-2 Coomassie brilliant blue R-250  考马斯亮蓝
BL1273 *仿：异戊醇＝24：1
氧合血红蛋白 VAZO52
ARB13774 豚鼠(NPC1L1)ELISA代测服务 

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