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- 百奥莱博
- 北京
- WE0189-UXJ
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
室温(15～30℃)
- 保质期：
长期
- 英文名：
CWhipro Circulating Nucleic Acid Midi Extraction Kit
- 库存：
401
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括高纯游离DNA中量提取试剂盒(负压法) DNA纯化在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。
名称：高纯游离DNA中量提取试剂盒(负压法)
规格：10次|50次
编号：WE0189
品牌：百奥莱博
英文名：CWhipro Circulating Nucleic Acid Midi Extraction Kit
产地：国产|进口
本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血清、血浆、羊水、尿液等无细胞体液中提取游离DNA。本试剂盒采用可以特异性结合核酸的吸附柱和独特的缓冲液系统，样品裂解后，游离DNA在高盐条件下与硅胶膜结合，在低盐、高pH值时游离DNA从硅胶膜上洗脱下来。本试剂盒使用负压法，同时配备延伸管，可处理多达5ml样本，纯化的DNA产量高、质量好，最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染。纯化得到的游离DNA质量稳定、可靠，可直接用于PCR、荧光定量PCR和二代测序等分子生物学实验。
试剂盒组成：
| 组份 | 10次 | 50次 |
| Buffer CL | 45ml | 220ml |
| Buffer CB(浓缩液) | 60ml | 300ml |
| Buffer GTL | 15ml | 60ml |
| Buffer GW1(浓缩液) | 3ml | 13ml |
| Buffer GW2(浓缩液) | 3ml | 15ml |
| Buffer EBL | 2ml | 10ml |
| 蛋白酶K | 100 mg | 3×180 mg |
| 蛋白酶K 储存液 | 5ml | 30ml |
| 吸附柱DG及收集管 | 10套 | 50套 |
| 延伸管(20ml) | 10个 | 50个 |
| 连接管 | 10个 | 50个 |
| 离心管(L-1.5 m l) | 10个 | 50个 |
保存条件：吸附柱DG置于2～8℃，其他组分室温(15～30℃)
产品特点：
1、适合大体积样本：试剂盒使用负压法，配备延伸管，配套使用负压装置可将样品处理量提高至5ml。
2、提取得率高：使用高效微量吸附柱结合目的片段，有效提升核酸的回收率，洗脱体积可在10-150μl之间灵活变化，可浓缩低浓度核酸。
3、纯度高：经纯化和浓缩的游离DNA不含蛋白、核酸酶和其他杂质，可即用于下游各种应用，包括PCR、荧光定量PCR、二代测序等。
自备试剂：无水乙醇、异丙醇
实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向每管蛋白酶K *(代"粉")末中加入指定用量(10次加5ml/50次每瓶加9ml)的蛋白酶K 储存液，使其完全溶解后-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。其它组分可以在干燥、室温(15～30℃)环境下稳定保存一年。如需保存更长时间，可置于2～8℃。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致DNA提取量下降。
3、本试剂盒最多可以从5ml血清血浆、4ml尿液中提取cfDNA。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer CB中加入异丙醇，混合均匀，并在试剂瓶标签上做好标记。
5、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇，混合均匀，并在试剂瓶标签上做好标记。
6、使用前请检查Buffer CL、Buffer CB是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer CL、Buffer CB于56℃水浴孵育重新溶解，混匀后使用。
7、实验开始前将水浴锅预热至60℃。
8、可将洗脱缓冲液Buffer EBL预热至60℃。
9、负压装置。
操作步骤(血清、血浆样本1-5ml)：
1、样品处理：向离心管(自备)中加入1ml血清/血浆样本，若样本不足1ml，加入PBS溶液补至1ml体积。
注意：当样品量超过1ml时，请等比例增加蛋白酶K 、Buffer CL和Buffer CB试剂用量，具体
2、向以上溶液中加入100μl 蛋白酶K ，混匀。
3、加入800μl Buffer CL，剧烈震荡至少30秒。
4、60℃孵育30分钟，其间颠倒混匀数次。
5、加入1800μl Buffer CB(使用前检查是否加入异丙醇)，颠倒混匀10次或剧烈震荡15-30秒。
6、冰浴5分钟。
7、正确连接负压装置，将连接管插到负压装置的插口上。
8、将吸附柱插入到连接管上。
9、将延伸管插入开盖的吸附柱中。
注意： 确保连接管、吸附柱和延伸管连接稳固，防止发生漏液。
10、将冰浴后的混合溶液全部加入延伸管中，开启并调节负压至-900～-800 mbar，缓慢吸走管中溶液。待溶液完全吸走，关闭负压开关，当压力恢复至0 mbar时，小心移去延伸管。
11、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否加入无水乙醇), 开启并调节负压至-900～-800 mbar，待溶液完全吸走，关闭负压开关。
12、向吸附柱中加入750μl Buffer GW2(使用前检查是否加入无水乙醇)，开启并调节负压至-900～-800 mbar，待溶液完全吸走，关闭负压开关。
13、向吸附柱中加入750μl无水乙醇，开启并调节负压至-800～-900 mbar，待溶液完全吸走，关闭负压开关。
14、当压力恢复至0 mbar时，将吸附柱取下，置于新的收集管中，12000rpm离心3分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应。
15、将吸附柱置于新的1.5ml离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-150μl Buffer EBL，室温放置3分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
附表1：不同血清/血浆样本量推荐加入试剂量
| 加入物 | 加入量(ml) | ||||
| 样本 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 蛋白酶K | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
| Buffer CL | 0.8 | 1.6 | 2.4 | 3.2 | 4 |
| Buffer CB | 1.8 | 3.6 | 5.4 | 7.2 | 9 |
储存条件：室温(15～30℃)。
关键词：CWhipro Circulating Nucleic Acid Midi Extraction K,高纯游离DNA中量提取试剂盒,高纯游离DNA中量提取试剂盒(负压法),WE0189
关于高纯游离DNA中量提取试剂盒(负压法) DNA纯化的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：
| 编号 | 名称 |
| WE0149 | 一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒(低含量ROX校正染料) |
| WE0129 | 一步法RT-PCR试剂盒 |
| WE0323 | DAB显色试剂盒(WB IHC) |
| WE0263 | 酵母蛋白抽提试剂盒 |
| WE0357 | 抗GAPDH多克隆抗体 |
| WE0242 | UltraStain DNA Marker |
| WE0130 | Real-time RT-PCR MasterMix |
| WE0159 | dNTP混合溶液(10 mM) |
| WE0341 | HRP标记抗His标签多克隆抗体 |
| WE0305 | 丽春红染色试剂 |
| WE0368 | FITC标记驴抗大鼠IgG(H+L) |
| WE0138 | 一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(低含量ROX校正染料) |
| WE0301 | X光暗盒(12.7cm×17.8cm) |
| WE0114 | 2×BaHF MasterMix(含染料) |
| WE0374 | 罗丹明山羊抗大鼠IgG(H+L) |
| WE0403 | 尿液DNA样本保存管 |
| WE0254 | BL21(DE3)pLysS感受态细胞 |
| WE0165 | 酵母质粒提取试剂盒 |
| WE0208 | 磁珠法血液DNA提取试剂盒 |
| WE0395 | 口腔拭子DNA样本保存管 |
| WE0212 | 蛋白酶K |
| WE0116 | 2×富含GC PCR MasterMix |
| WE0239 | T4 DNA连接酶 |
| WE0261 | 细菌蛋白抽提试剂盒 |
| WE0106 | 2×BAmp MasterMix(含染料) |
| WE0105 | BAmp DNA Polymerase |
| WE0311 | Tris-甘*酸转膜缓冲液(pH8.3,10×) |
| WE0112 | 2×BaldStar Taq MasterMix(含染料) |
| WE0150 | 一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒(高含量ROX校正染料) |
| WE0256 | 蛋白*(代"磷")酸酶抑制剂混合物 |
| WE0134 | SuperSYBR Mixture(低含量ROX校正染料) |
| WE0304 | 蛋白印迹膜再生液 |
| WE0227 | 人类cDNA |
| WE0160 | 超纯dNTP混合液(10 mM) |
| WE0258 | RIPA裂解液(强) |
| WE0378 | 罗丹明标记山羊抗小鼠IgG(H+L) |
| WE0396 | 游离DNA样本保存管(5ml) |
| WE0253 | BL21(DE3)感受态细胞 |
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文献和实验这周讨论一项常用的技术，即使常用但仍引起部分人核酸分离焦虑症。那就是基因组DNA的纯化去杂质。 场景是这样的：你有一份采自南太平洋中部一个偏僻小岛上首次发现的古老兰花品种根际土壤样品。你使用了非PowerSoil Kit法提取其中的微生物DNA。最终DNA含有太多杂质，无法PCR扩增。因此需要去除腐植酸等PCR抑制因子。你需要所有的核酸分子通过全基因组鸟枪测序……怎么办？ 你致电MO BIO说了你的大概情况，而我们推荐了使用PowerClean Kit
,个人通讯)并达到较高境界, 使用该方法可得到极高纯度的质粒。聚乙二醇分级沉淀法与氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心法有一点不同,那就是不能有效地把带切口的环状分子同闭环质粒DNA分开,因此, 纯化容易带上切口的极大质粒(大于15kb)及用于生物物理学测定的闭环质粒时、平衡离心仍是首选的方法。 然而, 两种纯化方法都可得到足可胜任分子克隆中各种复杂工作的质粒DNA,包括用于哺乳动物细胞的转染以及利用外切核酸酶产生成套的缺失突变体。氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心法纯化闭环DNA连续梯度:1、测量DNA溶液
便可收集到DNA，然后再溶于少量的缓冲溶液中即可。酒精沉淀法另一方面可去除phenol/chloroform，以免抑制选殖实验中限制酶或其它酵素的作用。坊间的分子生物厂商有spin column的方式来快速的(5分钟)浓缩质体DNA，故可依实验的目的及经费的状况而做合适的选择。 最后，有几种方式可以将核算定量，核酸会吸收260及280 nm波长的UV光，而且可与萤光染剂ethidium bromide (EtBr)键结，这些物理特性即一般定量DNA的的基本原理。此外亦可藉由UV光的吸收来评估
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