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DNATrans Transfection Reagent
长期
北京百奥莱博科技有限公司
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特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括北京DNATrans转染试剂现货在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:北京DNATrans转染试剂现货
规格:500μl
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
DNATrans是一种高效的阳离子脂质体转染试剂,适用于多种细胞的DNA转染。对于大多数细胞系包括原代细胞都有较高的转染效率,并且对细胞毒性极低。本转染试剂可应用于瞬时转染、稳定转染、共转染、高通量DNA转染,基因表达和基因功能研究。
实验前准备及重要注意事项
1、DNATrans Transfection Reagent使用前应先震荡摇匀。
2、转染效率与细胞密度有很大关系, 不同实验间应保持一个基本的传代步骤,确保转染时细胞没有长满或处于静止期。一般贴壁细胞转染的最佳细胞密度是80%-90%,悬浮细胞的最佳细胞密度为3-5×105细胞/ml,用于转染的最佳细胞度应根据不同的细胞类型或用途而异。
3、转染时不要在培养基中加入抗生素,否则会导致细胞死亡。
使用方法:
1、对于大部分的细胞系, DNA与DNATrans Transfection Reagent的比例在1:2至1:3时转染效率较高。为了提高转化效率、表达水平并且减少细胞毒性,实验应在细胞密度较大时进行转染。以下操作以24孔板每孔细胞的DNA转染操作为例。
a. 贴壁细胞:转化前一天,在24孔板的每孔中加入500μl无抗生素的生长培养基,并于每孔中接种0.5-2×105个细胞,待细胞长至80%-90%满时进行转染。
b. 悬浮细胞:在细胞转染之前,在24孔板的每孔中加入500μl无抗生素的生长培养基,并于每孔中接种3-5×105个细胞。
2、转染当天,首先准备转染复合物,对于每孔细胞按照以下用量配制:
a. 取适量DNA,加入25μl无血清培养基,并轻轻的混合均匀。
b. 取适量DNATrans Transfection Reagent,加入25μl无血清培养基,轻轻混匀,并于室温孵育5分钟。
c. 孵育5分钟之后,将稀释的DNA和稀释的DNATrans Transfection Reagent混合(使DNA以及DNATrans Transfection Reagent的终总体积为50μl),轻轻混合均匀,并在室温下孵育20分钟(溶液可能会出现絮状,但不会影响转染效率)。
注意:该混合物在室温下可以稳定保存6小时。
3、将步骤1中24孔板中培养的细胞生长培养基更换成450μl无血清培养基,然后将步骤2中50μl转染复合物加入到24孔板内,轻轻前后推动24孔板以混匀。
4、将细胞置于含5% CO2,37℃条件下培养4-6小时后,更换成500μl生长培养基。
5、18-48小时后进行转染基因表达的检测。
6、对于稳定的细胞系:在转染24小时后,细胞按照1:10的比例传代,第二天可加入筛选培养基进行筛选。
注意:
1)该说明为一个24孔的用量,若同时转几个孔,配制转染复合物的量需加倍;若转染其他类型孔板,DNA和DNATrans Transfection Reagent用量见附表,该附表用量以293T细胞为转染细胞时的标准用量。
2)转染4-6小时后也可以不更换生长培养基,但由于DNATrans Transfection Reagent具有一定的细胞毒性,作用时间过长可能使某些细胞出现大量死亡现象,建议更换生长培养基。
3)优化条件:想要得到更高的转染效率,应优化转染条件:培养物、DNA浓度、细胞数和细胞与DNA复合物的孵育时间等条件都应进行优化。
附表:293T细胞转染参考数据
培养板 | 每孔表面积 | 铺板用培养基体积 | DNA和稀释体积 | DNATrans Transfection Reagent和稀释体积 |
96孔 | 0.3cm2 | 200μl | 0.13μg至10μl | 0.5μl至10μl |
24孔 | 2cm2 | 500μl | 0.8μg至25μl | 2μl 至25μl |
12孔 | 4cm2 | 1ml | 1.6μg至50μl | 4μl至50μl |
35 mm | 10cm2 | 2ml | 4.0μg至100μl | 10μl至100μl |
6孔 | 10cm2 | 2ml | 4.0μg至100μl | 10μl至100μl |
60 mm | 20cm2 | 5ml | 8.0μg至500μl | 20μl至500μl |
10 cm | 60cm2 | 10ml | 24μg至800ml | 60μl至800μl |
组份 | 50次 |
DNase I | 1000 U |
10×Reaction Buffer | 1000μl |
TRIzon Reagent | 60ml |
Buffer RW1 | 40ml |
Buffer RW2(浓缩液) | 11ml |
RNase-Free Water | 10ml |
吸附柱RM及收集管 | 50套 |
RNase-Free离心管(1.5ml) | 50个 |
组份 | 5ml |
2×BaReSYBR Mixture | 5×1ml |
ddH2O | 5×1ml |
试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
2×BaReSYBR Mixture | 25μl | 1× |
Forward Primer,10μM | 1μl | 0.2μM |
Reverse Primer,10μM | 1μl | 0.2μM |
Template DNA | 2μl | |
ddH2O | up to 50μl |
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 95℃ | 5 min | |
变性 | 95℃ | 15 s | 35-40个循环 |
退火/延伸 | 60℃ | 1 min | |
融解曲线分析 | 95℃ | 15 s | |
60℃ | 1 min | ||
95℃ | 15 s | ||
60℃ | 15 s |
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