Tris-甘氨酸转膜缓冲液(pH8.3,10×) 蛋白质研究

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Tris-甘*酸转膜缓冲液(pH8.3,10×) 是高品质的蛋白质研究产品，由北京百奥莱博供应，用于生化科学研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多Tris-甘*酸转膜缓冲液(pH8.3,10×)等蛋白质研究产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：Tris-甘*酸转膜缓冲液(pH8.3,10×) 蛋白质研究
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
英文名：Tris-Glycine Transfer Buffer(pH8.3, 10×)
编号：WE0311
规格：500ml

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·X-gal溶液(20mg/ml)
编号：WE0220
英文名称：X-gal Solution(20mg/ml)
规格：5ml

·50×TAE
编号：WE0216
英文名称：X-gal Solution(20mg/ml)
规格：500ml
本品为50×Tris-乙酸缓冲液，是常用的核酸电泳缓冲液。

·酵母质粒提取试剂盒
编号：WE0165
英文名称：Yeast Plasmid Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒在普通碱裂解法的基础上进行了改进，全新的Lyticase可以有效的破除酵母细胞壁，新型硅基质膜和缓冲液系统能高效专一的结合质粒DNA，同时可以最大限度的去除蛋白及其他杂质，整个过程方便快捷，不需使用有毒有害试剂，可以同时处理多个样品。除适用于酵母细胞外，也可用于大肠杆菌。使用本试剂盒提取的质粒DNA可用于各种分子生物学实验，如连接、转化、测序和文库筛选等。

试剂盒组成：

 

组份	50次
Buffer P1	15ml
Buffer P2	15ml
Buffer N3	20ml
Buffer PS	15ml
Buffer PB	10ml
Buffer PW(浓缩液)	10ml
Buffer EB	10ml
RNase A(10 mg/ml)	150μl
玻璃珠	2g
吸附柱DM及收集管	50套

自备试剂：无水乙醇，异丙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，将吸附柱置于2～8℃可保存更长时间，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可稳定保存6个月。
2、第一次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混匀，置于2–8℃保存。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请检查Buffer P2、Buffer N3是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。
5、注意不要直接接触Buffer P2和Buffer N3，使用后应立即盖紧盖子。
6、提取的质粒量与酵母菌株、质粒拷贝数、培养条件等因素有关，通常酵母质粒拷贝数都很低，通过电泳或分光光度计法都很难检测到。

操作步骤：
1、取1-5ml酵母培养物(最多不超过5×107个酵母细胞，一般对于酿酒酵母OD600=1.0时，相当于1-2×107细胞/ml)加入离心管(自备)中，12000rpm(~～13400×g)离心30秒，收集菌体沉淀，尽量吸弃上清。
2、向菌体中加入250μl Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A)，重悬沉淀。
3、在以上混合物中加入40 mg的玻璃珠(Glass Beads)，涡旋震荡10分钟。
4、向离心管中加入250μl Buffer P2，温和地上下颠倒混匀6-8次，室温放置5-10分钟，此时菌液应变得清亮粘稠。
注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。如果溶液未变得清亮，提示可能菌量过大，裂解不彻底，应减少菌体量。
5、向离心管中加入350μl Buffer N3，立即温和地上下颠倒混匀6-8次，此时出现白色絮状沉淀，12000rpm离心20分钟。
注意：Buffer N3加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。
6、柱平衡: 向已装入收集管的吸附柱DM中加入200μl Buffer PS，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、将步骤5所得上清加入到已装入收集管的吸附柱中，注意不要吸出沉淀。
注意：吸附柱的最大容积为750μl，溶液分2次过柱。
8、12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
9、向吸附柱加入150μl Buffer PB，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
10、向吸附柱中加入750μl Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。
11、将吸附柱重新放回收收集管中，12000rpm离心2分钟，倒掉废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-100μl Buffer EB，室温放置数分钟，13000rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意：
1)为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置数分钟，13000rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。
2)质粒拷贝数较低或>10 kb时，Buffer EB在65-70℃水浴预热，可以增加提取效率。
3)通常酵母质粒拷贝数很低，通过电泳或者分光光度计法都很难检测到。提取的质粒如果用于下一步实验，通常建议使用量为：用作PCR模板可使用1–5μl质粒，用于转化大肠杆菌可使用5–10μl质粒。
4)转化大肠杆菌时应使用商业化高转化效率的感受态细胞。

储存条件：室温(15～30℃)


Tris-甘*酸转膜缓冲液(pH8.3,10×) 蛋白质研究关键词：Tris-甘*酸转膜缓冲液(pH8.3,10×),Tris-Glycine Transfer Buffer(pH8.3, 10×),WE0311


·快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)
编号：WE0151
英文名称：Fast TaqMan Mixture
规格：1ml|5ml
  本品是专用于探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×,包含Fast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、Mg2+等，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列检测。本品含有的Fast Taq DNA Polymerase，能有效减少在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活仅需在95℃孵育30s。整个PCR反应过程比普通反应可节省约40分钟，大大缩短了PCR的反应时间。独特的PCR缓冲体系与快速热启动酶的组合，有效抑制了非特异产物的产生，并显著提高了PCR的扩增效率，荧光信号更强，灵敏度更高，线性范围更宽。该产品适用范围广，可用于普通和快速定量PCR程序。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0151)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0152)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0153)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

试剂盒组成：

组份	WE0151-5ml	WE0152-5ml	WE0153-5ml
2×Fast TaqMan Mixture	5×1ml	5×1ml	5×1ml
50×Low ROX	-	200μl	-
50×High ROX	-	-	200μl
ddH2O	5×1ml	5×1ml	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×Fast TaqMan Mixture(With ROX)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Probe，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
50×Low ROX or High ROX(可选)	1μl	1×
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)所用探针的终浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50× Low ROX or 50×High ROX。

2、PCR反应程序：
建议采用两步法PCR反应程序，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	30 s
变性	95℃	5 s	35-40 个循环
退火/延伸	60℃	30 s

注意：
1)本产品所采用的酶须在预变性95℃、30s条件下实现酶的活化。在此条件下，大多数模板可良好的进行解链。对GC含量高、二级结构复杂的模板，可将预变性时间延长至1-4分钟，以使起始模板充分解链。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。

储存条件：-20℃，避免反复冻融


Tris-甘*酸转膜缓冲液(pH8.3,10×) 蛋白质研究关键词：Tris-甘*酸转膜缓冲液(pH8.3,10×),Tris-Glycine Transfer Buffer(pH8.3, 10×),WE0311

线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)   50T|100T
J0313 兔抗人IgM(H+L)抗血清 1ml/10ml
ARB11741 人雷帕霉素靶蛋白(mTOR)elisa检测 Human mammalian target of rapamyein,mtor ELISA KIT
优球蛋白溶解时间(ELT)检测试剂盒(加*法)   50T
苏丹黑B Evans blue 4197-25-5
ARB12879 小鼠丙*酸转*酶/谷丙转*酶(ALT/GPT)Elisa方法检测 Mouse alanine aminotransferase,alt/gpt ELISA KIT
PY04-013  肝提取液  8ml×10支  每瓶添加于100mlBBL琼脂培养基中，用于食品微生物中双歧杆菌的平板计数及菌种鉴定
EM101 甲基化特异性PCR试剂盒
ARB10259 人二胺氧化酶(DAO)酶标法分析 Human diamine oxidase,dao ELISA KIT
石蕊 ATA 1393-92-6
F030816 BIOTIN标记兔抗人IgM抗体 Rabbit Anti-Human IgM*BIOTIN
中性红-亚甲蓝指示剂   100ml
7114-03-6 Methyl Green  甲基绿
F030224 HRP标记兔抗牛IgG抗体 Rabbit Anti-Bovine IgG*HRP

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