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345
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长期
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北京百奥莱博科技有限公司
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冷藏
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")1M Tris-HCl(pH7.0)(DNA级)价格厂家,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:1M Tris-HCl(pH7.0)(DNA级)价格厂家
产地:国产|进口
规格:250mL
编号:BTN101204
我公司的1M Tris-HCl(pH7.0)(DNA级)价格厂家,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销*(代"售")下列产品:
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200bp DNA ladder(200-3000bp) 100次
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1M Tris-HCl(pH7.0)(DNA级)价格厂家关键词:百奥莱博,1M Tris-HCl(pH7.0)(DNA级),BTN101204
·非冻型组织DNA保存液
编号:BTN3660
英文名称:DNAhold Tissue RNA non-freezing preservation
规格:250mL
本品是我公司推出的在室温条件下长期保存DNA样品的保存液。它能迅速渗入细胞内,通过高效抑制DNase的活性而长期保证DNA的完整性。
产品特点:
1. 保存时间长,可室温保存动植物组织长达两年,保护DNA不被降解。
2. 安全可靠,本产品无毒无害,从DNA保存液保存的样品中提得的DNA可用于酶切和PCR等分子生物学实验。
3. 使用简单,直接把新鲜的动植物样品浸在DNA保存液中即可。
4.可广泛用于各种动植物标本的野外采集。
储存条件:室温运输及保存,有效期两年。
使用方法:
第一步:准备工作
1.估计完全浸没样品所需要Tissue DNA保存液的体积。
注:1g 组织约需10mL Tissue DNA保存液。
2.标记收集管并加入估计所需量的Tissue DNA保存液。
第二步:样品的处理
1.以最快速度将样品剪切成厚度小于0.5cm的碎块。
注:鼠肝、肾和脾等小器官样品和没有蜡质保护层的植物样品可不需剪切而直接放入本产品中保存,有蜡质保护层的植物样品需要先将蜡表皮破坏。
2.将组织碎块完全浸没于收集管的Tissue DNA保存液中。
第三步:样品的存放
将收集管存放于温度适当的地方,保存温度不要低于4℃。
第四步:样品的使用
1.从存放处取出样品,用消过毒的镊子将组织碎块从保护液中取出。
2.立即开始DNA提取。
·pUCm-T载体
编号:BTN160101
英文名称:pUCm-T vector
规格:1μg
本产品是一种高效克隆PCR产物(TA Cloning)的专用载体。本载体由pUC系列载体改造而成,在pUC载体的多克隆位点处插入特殊的限制性内切酶识别位点,酶切后能在载体的3´端形成悬挂的“T”末端。很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA 每条链的3´端加上一个突出的碱基A。这样,pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT 配对,在连接酶的催化下,就可以把PCR产物连接到,pUCm-T载体中,形成含有目的片断的重组载体。可以通过蓝白斑筛选有插入片断的重组克隆,大大提高了3´末端A 突出PCR产物的连接、克隆效率。本产品应用于进行TA 克隆,克隆PCR产物。对克隆后的PCR产物可以用M13通用引物进行DNA 测序。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
一. 实验准备
1. PCR产物3´末端带有突出的A碱基:Taq、Tth、Ampli Taq、Klen Taq DNA聚合酶扩增的PCR产物3´末端均带有突出的A碱基。建议扩增的PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳进行回收,再进行连接转化实验。
2. PCR产物3´末端没有突出的A碱基:Pfu、Pwo、Tli或DeepVent等DNA聚合酶具有3´5´外切酶活性,其扩增的PCR产物末端可能不带有3´A,要对这种平末端PCR产物进行克隆,应先对其进行3´末端加A,再进行连接转化实验。
二.连接反应
3.在一个标准的10mL连接反应体系中,加入下列成分:
| 反应组分 | 10μl反应体系 |
| 插入的目的片段 | xμL(0.2 pmol) |
| 本产品 | 1μL(50 ng) |
| 10×连接酶缓冲液 | 1μL |
| T4 DNA连接酶 | 3-5 U |
| 补水到 | 10 L |
注意:一般最后加入T4 DNA连接酶。
4. 用移液器吹打反应混合液使之混匀后,16-23℃连接1~12小时(或按T4 DNA连接酶供货商提供的操作手册进行连接)。
三.细菌转化和鉴定
5. 将100μl感受态细胞置于冰上解冻后,完全解冻后轻轻将细胞均匀悬浮。
6. 加入上述5μl连接液,轻轻混匀,冰上放置30分钟。
7. 42℃水浴热激90秒,再冰上放置15~20分钟。
8. 加入400μl自备的SOC培养基,37℃ 200~250rpm振荡培养1小时。
9. 4000rpm离心5分钟,用枪头吸掉400μl上清液,用剩余的培养基将细胞悬浮。
10. 将细菌悬液均匀涂布在含20μl的IPTG(100mM)和100μl的X-gal(20mg/mL)的*苄青霉素抗性的自备的LB平板上。(涂布菌液的用量可以根据连接的效率及感受态细胞的转化效率而进行适当的调整。)
11. 将平板于37℃培养1小时,然后倒置培养过夜。(先将平板正向放置1小时,以吸收过多的液体。)
四.筛选
12.转化子的蓝白筛选:
当外源DNA片段插入到pUCm-T载体中后,由于外源DNA的核酸序列存在改变了LacZ基因的编码,从而影响了其产物β-半乳糖苷酶α-片段的活性,因此重组克隆在-gal/IPTG 平板上呈现为白色,而非重组克隆呈蓝色。选择在IPTG/X-gal 平板上生长的白色菌落,用牙签挑至含*苄青霉素的液体培养基,37℃培养过夜。
13.转化子的鉴定:
1)用上述培养的白色菌落的菌液抽提质粒,用PstI单酶切或用其它合适的酶切,琼脂糖凝胶电泳检查片段大小,确定是否含有目的片段。
2)用M13通用引物或其它合适的引物直接进行测序来确定是否含有目的克隆。
操作提示:
1. PCR产物的纯度:
连接反应前需用琼脂糖凝胶电泳检测PCR反应产物,如果电泳检测PCR产物条带弥散,或出现非特异条带,则需要切下目的条带,用胶回收试剂盒对目的片段进行回收。若PCR产物电泳检测只有预期大小的明显条带,也应使用PCR产物纯化试剂盒直接纯化PCR产物,以除去引物二聚体。不经纯化的PCR产物在某些条件下可直接用于连接,但由于引物二聚体和PCR产物中其它物质的影响,造成含有插入片段的阳性克隆数减少,因而需要筛选很多克隆方可得到含有目的PCR产物的阳性克隆。
2. 平端PCR产物
具有校正活性的热稳定性DNA聚合酶如Pfu、Pwo、Tli在进行PCR扩增时产生平端PCR产物。这种平端PCR产物可以进行3´末端加A 尾后连接到pUCm-T载体中,采用这种方法进行连接,可大大提高克隆的效率。
3.优化插入片段和载体的摩尔比
1)pUCm-T载体优化的插入DNA片段和载体的摩尔比为3:1,采用3-10:1的连接比例也可成功进行连接。如果你的PCR产物开始连接的不理想,则有必要优化连接比例。
2)PCR产物的量可采用以下公式进行换算:
PCR片段的量(ng)= [加入载体的量(ng)×插入片段大小(kb)/载体大小(kb)]×插入片段和载体的摩尔比
4.筛选含插入片段的转化子
插入片段成功克隆到pUCm-T载体中,可阻断β-半乳糖苷酶的编码序列,因而重组克隆可在指示培养基上通过颜色进行筛选。大多数情况下含有PCR产物的克隆菌为白色,如果PCR片段和LacZ基因在同一读码框内,即PCR片段碱基数是3的整数倍(含3´-A),并且读码框无终止密码子,则重组克隆菌可能为蓝色。
质粒图谱:
1M Tris-HCl(pH7.0)(DNA级)价格厂家关键词:百奥莱博,1M Tris-HCl(pH7.0)(DNA级),BTN101204
1M Tris-HCl(pH7.0)(DNA级)怎样保存?
一般试剂可保存在玻璃瓶内; 对玻璃有强烈腐蚀作用的试剂,如**酸、*氧化*应保存在聚乙*(代"烯")塑料瓶内; 易被空气氧化、分化、潮解的试剂应密封保存;易感光分解的试剂应用有色玻璃瓶贮存并藏于暗处; 易受热分解及低沸点溶剂,应存于冷处; 剧毒试剂应存于保险箱; 有放射性的试剂应存于铅罐中。如果化学试剂保管不当,就会失效变质,影响实验的效果,并造成物质的浪费,甚至有时还会发生事故。因此,科学地保管好试剂对于保证实验顺利进行,获得 可靠的实验数据具有非常重要的意义。
·酸酚
编号:BTN100803
英文名称:Acidic Phenol
规格:100mL
本品是将重蒸馏用乙酸*酸性缓冲液充分饱和而得,pH在4-5之间,不会再吸收样品的水分,可以直接用于RNA提取。
储存条件:常温运输和保存、避光。有效期一年。
疑难解答:
Q:离心后为何酚相在下面?
A:*酚的比重是1.071,水饱和*酚的比重更低,只比纯水稍重。如果水溶液中有较高浓度的盐和其他成分(细胞裂解后也会释放出大量的如核酸,糖分等细胞成分),其比重很容易超过*酚,在此情况下离心,*酚将在下层,水相将在上层,取样时需要十分小心。如果要使*酚相在下层,可以使用比重更大的酚-*仿-异戊醇混合液。
·制霉菌素溶液
编号:BTN120694
英文名称:Nystatin Solution
规格:10mL
本产品是浓度为10mg/mL的制霉菌素甲醇溶液。参考浓度为2mg/mL。制霉菌素(制霉素;米可定;Nystatin;Fungicidin ;Mycostatin),分子式:C18H28O2,分子量:276.41,CAS:1400-61-9。微溶于水、甲醇、乙醇。
抗性机制:制霉菌素具有共轭多烯大环内酯结构,能抑制真菌和皮藓菌的活性,对细菌无抑制作用。通过与细胞膜上的固醇类物质结合增加细胞膜对渗透的敏感性,抗霉菌及酵母,可用于高纯细胞培养,防腐。
储存条件:低温运输,-20℃避光保存,有效期6个月。
1M Tris-HCl(pH7.0)(DNA级)由我公司长期专业供应,公司为广大顾客提供 1M Tris-HCl(pH7.0)(DNA级)产品说明,生产厂家,价格,规格,哪里买 。公司遵循高品质的产品,高质量的技术服务,合理的价格,是国内研发与生产,销*(代"售")合为一体的一家大型企业,我们承诺:以最少的经费,最高的效率,得到您最需要的实验结果,同时我们承诺,若有质量问题,无条件退换。
我公司客户遍布大学、研究所、医院、卫生防疫、商品检验检疫、制药公司、生物技术公司和食品工业等单位。公司供应的1M Tris-HCl(pH7.0)(DNA级)获得一致好评。其立足于生命科学领域,全力打造高品质生物科技产品链和技术服务链,也具备丰富的管理经验,同时我们建立了集技术支持、售后服务等多方位的服务体系。我们有激情、有理想,更有责任感,是您科研道路上值得信赖的伙伴。
公司的理念是:以诚信为本,努力打造优质品牌,为您提供全方位的售中、售后服务。
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