WE0212型蛋白酶K优惠

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

WE0212型蛋白酶K优惠由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多蛋白酶K等工具酶产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：WE0212型蛋白酶K优惠
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：100mg
  蛋白酶K是一种以丝*酸为活性中心的枯草类蛋白酶，具有广泛的底物特异性，特别优先分解与疏水性*基酸、含硫*基酸、芳香族*基酸C末端邻接的酯键和肽键。可在多种不同盐、变性剂、去污剂、pH值和温度条件下进行分解蛋白作用。在提取DNA和RNA的缓冲液中具有很高的活性，主要用于DNA、RNA制备过程中蛋白的消化。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入5ml的蛋白酶K 储存液使其溶解,溶解后的蛋白酶K 浓度为20mg/ml。
2、孵育温度为25℃～65℃，理想孵育温度为58℃，孵育时间为15分钟至48小时；理想孵育时间为2小时。
3、配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。-20℃长期保存。

储存条件：室温(15～30℃)

关于WE0212型蛋白酶K优惠的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·HRP标记山羊抗小鼠IgG(H+L)
编号：WE0393
英文名称：Goat Anti-Mouse IgG, HRP Conjugated
规格：100μl
本产品为辣根过氧化物酶标记的经亲和纯化的山羊抗体，特异识别小鼠IgG重链和轻链，检测灵敏度高，本底低，对其他种属IgG无明显交叉反应，可用于Western Blot、ELISA和免疫组化检测。酶标记抗体，是一类广泛用于免疫学、分子生物学及临床医学各个分支学科中的免疫化学制剂，具有特异、敏感和安全的特点。

免疫原：小鼠IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：无(叠氮*是HRP抑制剂，抗体稀释液中请避免使用叠氮*作为防腐剂)
应用范围：
WB(1：2000-10000)
ELISA(1：2000-20000)
IHC(1：100-200)

·快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)(高含量ROX校正染料)
编号：WE0153
英文名称：Fast TaqMan Mixture(High ROX)
规格：5ml
  本品是专用于探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×,包含Fast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、Mg2+等，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列检测。本品含有的Fast Taq DNA Polymerase，能有效减少在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活仅需在95℃孵育30s。整个PCR反应过程比普通反应可节省约40分钟，大大缩短了PCR的反应时间。独特的PCR缓冲体系与快速热启动酶的组合，有效抑制了非特异产物的产生，并显著提高了PCR的扩增效率，荧光信号更强，灵敏度更高，线性范围更宽。该产品适用范围广，可用于普通和快速定量PCR程序。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0151)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0152)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0153)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

试剂盒组成：

 

组份	WE0151-5ml	WE0152-5ml	WE0153-5ml
2×Fast TaqMan Mixture	5×1ml	5×1ml	5×1ml
50×Low ROX	-	200μl	-
50×High ROX	-	-	200μl
ddH2O	5×1ml	5×1ml	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×Fast TaqMan Mixture(With ROX)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Probe，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
50×Low ROX or High ROX(可选)	1μl	1×
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)所用探针的终浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50× Low ROX or 50×High ROX。

2、PCR反应程序：
建议采用两步法PCR反应程序，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	30 s
变性	95℃	5 s	35-40 个循环
退火/延伸	60℃	30 s

注意：
1)本产品所采用的酶须在预变性95℃、30s条件下实现酶的活化。在此条件下，大多数模板可良好的进行解链。对GC含量高、二级结构复杂的模板，可将预变性时间延长至1-4分钟，以使起始模板充分解链。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。

储存条件：-20℃，避免反复冻融


WE0212型蛋白酶K优惠关键词：Proteinase K,蛋白酶K,WE0212


·HRP标记兔抗山羊IgG(H+L)
编号：WE0387
英文名称：Rabbit Anti-Goat IgG, HRP Conjugated
规格：100μl
本产品为辣根过氧化物酶标记的经亲和纯化的兔抗体，特异识别山羊IgG，检测灵敏度高，本底低，可用于Western Blot、ELISA和免疫组化检测。HRP(Horseradish Peroxidase)即辣根过氧化物酶，可以催化DAB、TMB等底物显色或催化ECL等化学发光试剂产生化学反应而发光。

免疫原：山羊IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：无
防腐剂：无(叠氮*是HRP抑制剂，抗体稀释液中请避免使用叠氮*作为防腐剂)
应用范围：
WB(1：2000-10000)
ELISA(1：2000-20000)
IHC(1：100-200)

·EDTA缓冲液(IHC抗原修复液，50×)
编号：WE0319
英文名称：EDTA Buffer(50×)
规格：100ml
  福尔马林固定时，组织中的许多*基酸残基形成醛键、羧甲键而封闭了部分抗原决定簇，同时蛋白之间发生交联也使抗原决定簇隐蔽。因此，对于石蜡切片，要求在进行IHC染色前，先进行抗原修复，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，恢复抗原的原有空间形态。EDTA缓冲液是除柠檬酸缓冲液外另一种常用的IHC 抗原修复液。有部分抗原用EDTA缓冲液修复效果好于柠檬酸缓冲液。

注意事项：
1、请使用足量的修复液，修复过程中保证组织切片完全浸没在修复液中。
2、使用沸水浴或高压修复时，操作请务必谨慎，尤其高压修复时，保证锅内有足量的修复液，以防止干烧。
3、推荐的修复时间为达到理想修复效果所需时间，如组织粘片不牢，容易掉片，请酌情减少修复时间。

操作步骤：

1、高压热修复：根据需要量，取适量本品，稀释50倍后即可使用。将稀释好的修复液加入高压锅内，将待修复切片浸于其中，保证修复液没过组织(最好将切片浸入盛修复液的塑料容器内，再置于锅内修复液浴中)，盖上压力锅盖，加热至均匀喷汽，从喷汽开始计时，1~2 分钟后压力锅离开热源，自然冷却至室温，取出切片，蒸馏水冲洗后，再用 PBS(0.01M pH7.4)漂洗 2 次，每次 3分钟。下接免疫组化染色步骤。此方法修复强度最大，是最常用的热修复法。

2、微波热修复：根据需要量，取适量本品，稀释50倍后即可使用。将切片放入盛有修复液的容器中，置微波炉内加热至沸腾，停止加热，使容器内液体温度下降保持在95℃~98℃之间并持续 10~15分钟(注意：请根据具体机型酌情设置条件，务必满足以上步骤中对温度和时间的要求)。取出容器，自然冷却至室温，取出切片，蒸馏水冲洗后，再用 PBS(0.01M pH7.4)漂洗 2 次，每次 3分钟。下接免疫组化染色步骤。此方法修复强度大于沸水浴，但小于高压修复。

3、沸水浴热修复：根据需要量，取适量本品，稀释50倍后即可使用。将待修复切片完全浸入盛有修复液的容器中，并将此容器置于盛去离子水的大器皿水浴中，电炉上加热煮沸，从修复液的温度到达95℃起开始计时15~20分钟。让切片在修复液中自然冷却至室温，蒸馏水冲洗，再用 PBS(0.01M pH7.4)漂洗 2 次，每次 3分钟。下接免疫组化染色步骤。该方法效果较微波和高压修复差。

储存条件：2～8℃


WE0212型蛋白酶K优惠关键词：Proteinase K,蛋白酶K,WE0212


·病毒RNA提取试剂盒
编号：WE0194
英文名称：RNAtiqu Virus RNA Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒采用可以特异性结合病毒RNA的吸附柱和独特的缓冲液系统，适用于从血清、血浆、尿液、脑脊液等无细胞体液及细胞培养上清液中分离病毒RNA。病毒RNA特异性地结合到硅基质膜上，而污染物则流过该膜。通过两次高效洗涤完全去除蛋白质等杂质，然后用无RNase的水或试剂盒提供的RNase-Free Water洗脱高纯度的病毒RNA。由本试剂盒提取的病毒RNA可直接用于RT-PCR、Real-time RT-PCR和印迹分析等实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer GL	15ml
Buffer RW1	40ml
Buffer RW2(浓缩液)	11ml
蛋白酶K	12.5 mg
蛋白酶K 储存液	1.2 5ml
RNase-Free Water	10ml
吸附柱RS及收集管	50套
RNase-Free离心管(1.5ml)	50个

自备试剂：无水乙醇，0.9% NaCl。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5M的NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
3、血清或血浆避免反复冻融导致蛋白变性或产生沉淀，减少病毒滴度进而影响提取病毒核酸的产量。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
5、Buffer GL如果产生沉淀，可在56℃加热使其溶解后室温放置。
6、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

操作步骤：
1、室温下取200μl血清或血浆加到1.5ml离心管(自备)中。
注意：不足200μl可以加入0.9 % NaCl(客户自备)补足。
2、向上步溶液中加入20μl 蛋白酶K ，混匀。
3、加入200μl Buffer GL，涡旋震荡15秒。
注意：不要直接把蛋白酶K 加到Buffer GL中。
4、56℃ 孵育15分钟，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。
5、加入250μl无水乙醇，涡旋震荡15秒，室温孵育5分钟，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。
6、将步骤5得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中，若一次不能将全部溶液加入吸附柱中，请分两次转入，12000rpm(~～13400×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl无水乙醇，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
10、12000rpm 离心3分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：
1)这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
2)推荐步骤：将吸附柱放入一个新的1.5ml离心管(自备)中，打开管盖，56℃烘箱孵育3分钟，使吸附柱的膜彻底干燥。
11、将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-50μl RNase-Free Water，室温放置5分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Water体积不应小于20μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用20-50μl新的RNase-Free Water重复步骤11。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤11。

储存条件：室温(15～30℃)。

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