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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
803
- 英文名:
Universal Genomic DNA Extraction Kit
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
室温(15~30℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产供应通用型柱式DNA提取试剂盒哪里卖,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:通用型柱式DNA提取试剂盒哪里卖
规格:50次|200次
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
英文名:Universal Genomic DNA Extraction Kit
本试剂盒适合于从新鲜或冷冻的动物组织、细胞、血液、细菌等多种样品中提取高纯度总DNA。本品可纯化获得分子量最大为50 kb的DNA片段,纯化过程不需使用*酚或*仿等有毒溶剂,无需乙醇沉淀。本试剂盒采用优化的缓冲体系使裂解液中的DNA高效特异的结合到硅基质离心吸附柱上,PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除,最后使用低盐缓冲液或水洗脱,即可得到高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 | 200次 |
| Buffer GTL | 15ml | 60ml |
| Buffer GL | 15ml | 50ml |
| Buffer GW1(浓缩液) | 13ml | 52ml |
| Buffer GW2(浓缩液) | 15ml | 50ml |
| Buffer GE | 15ml | 60ml |
| 蛋白酶K | 25 mg | 90 mg |
| 蛋白酶K 储存液 | 1.25ml | 5ml |
| 吸附柱DM及收集管 | 50套 | 200套 |
自备试剂:无水乙醇,Enzymatic Lysis Buffer(提取革兰氏阳性菌基因组DNA时须准备)。
Enzymatic Lysis Buffe配方:20 mM Tris,pH8.0;2 mM Na2-EDTA;1.2% Triton X-100;终浓度为20 mg/ml的Lysozyme(溶菌酶)。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1.向蛋白酶K 中加入指定用量(1.25ml|4.5ml)的蛋白酶K 储存液使其溶解,-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置,避免反复冻融,以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
3、如果提取次生代谢产物大量积累或细胞壁厚的细菌培养物的基因组,建议在对数生长期早期收集样品。
4、第一次使用前应按试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer GL和Buffer GTL于56℃水浴重新溶解。
6、如果下游实验对RNA污染比较敏感,可以在加入Buffer GL前加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml),RNase A 本试剂盒并未提供,如需要可单独向本公司订购,货号:WE0225S。
操作步骤:
一、血液及细胞样本基因组提取:
1、材料处理
a. 如果提取材料为哺乳动物抗凝血液(无核红细胞),可直接向50-200μl新鲜或冷冻的抗凝血液样品中加入Buffer GTL补足至200μl;
b. 如果提取材料为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液,其红细胞为有核细胞,取5-10μl新鲜或冷冻的抗凝血液样品,加入Buffer GTL补足至200μl;
c. 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液(最大提取量为5×106个细胞),2000rpm(400×g)离心5分钟,弃尽上清,加200μl GTL,振荡至样品彻底悬浮;注意:如需去除RNA,可在上述步骤完成后,加入4μl浓度为100 mg/ml的RNase A溶液(货号:WE0225S),涡旋15秒,室温放置2分钟。
2、加入20μl 蛋白酶K 。
3、加入200μl Buffer GL,涡旋震荡充分混匀,56℃水浴10分钟。
4、短暂离心以去除管盖内壁的水珠。加入200μl无水乙醇,涡旋震荡充分混匀,短暂离心。
注意:
1)加入Buffer GL和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
2)加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀,不会影响后续实验。一些组织在加入Buffer GL和无水乙醇后可能形成溶胶状产物,此时推荐进行剧烈震荡或涡旋处理。
5、上一个步骤中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm(~~13400 ×g)离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤7。
8、12000rpm离心2分钟,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
9、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μlBuffer GE或灭菌水,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
注意:
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)Buffer GE在65-70℃水浴预热,离心之前室温孵育5分钟可以增加产量;用另外的50-200μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
3)如果要提高DNA的终浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1分钟;若洗脱体积小于200μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg,推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
4)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
二、动物组织基因组提取:
1、材料处理
如果提取材料为动物组织,取25 mg(脾组织用量应少于10 mg);如果材料为鼠尾,取一段长度为0.4-0.6 cm的大鼠鼠尾或两段长度为0.4-0.6 cm的小鼠鼠尾。
a. 样本进行液氮研磨或切成小块后置于1.5ml离心管中,加入180μl Buffer GTL,将不同样品做好标记。
b. 若使用匀浆器处理样本,匀浆前向样本中加入不超过80μl Buffer GTL,匀浆后加入100μl Buffer GTL。
注意:
1)确保各组织的量不要超出推荐范围。
2)组织样本在加入Buffer GTL之前用液氮研磨或加入Buffer GTL用匀浆器匀浆处理,可以增加裂解效率。
2、加入20μl 蛋白酶K ,涡旋震荡使样品彻底混匀。56℃水浴,直至组织完全裂解,孵育过程中可每隔一段时间颠倒或震荡离心管使样品分散。
注意:
1)不同组织消化时间不同,通常1-3小时即可完成,鼠尾需要消化6-8小时,必要时过夜消化,不会影响后续操作。
2)如果孵育和涡旋震荡后仍然有胶状物质,延长56℃孵育时间或再加入20μl 蛋白酶K 消化。
3)如需去除RNA,可在上述步骤完成后,加入4μl的浓度为100 mg/ml的RNase A溶液(货号:WE0225S),涡旋15秒,室温放置5-10分钟。
3、加入200μl Buffer GL,涡旋震荡充分混匀,70℃水浴10分钟。短暂离心后加入200μl无水乙醇,涡旋震荡充分混匀。
注意:
1)加入Buffer GL和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
2)加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀,不会影响后续实验。一些组织(如脾,肺)在加入Buffer GL和无水乙醇后可能形成溶胶状产物,此时推荐进行剧烈震荡或涡旋处理。
4、短暂离心,将步骤3所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm(~~13400×g)离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
5、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤6。
7、12000rpm离心2分钟,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
8、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μlBuffer GE或灭菌水,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
注意:
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)Buffer GE在65-70℃水浴预热,离心之前室温孵育5分钟可以增加产量;用另外的50-200μl BufferGE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
3)如果要提高DNA的终浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1分钟;若洗脱体积小于200μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg,推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
4)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
三、细菌基因组提取:
1、细菌样本预处理
a. 革兰氏阴性菌
①取细菌培养物1-5ml(106-108个细胞,最多不超过2×109个细胞)置于离心管(自备)中,12000rpm(~~13400 ×g)离心1分钟,尽量吸净上清。
②向沉淀中加入180μl Buffer GTL,振荡使菌体重悬。
③加入20μl 蛋白酶K ,涡旋混匀,56℃孵育,直至菌体完全裂解,孵育过程中每隔一段时间颠倒或震荡离心管使样本分散。
注意:如需去除RNA,可在上述步骤完成后,加入4μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号:WE0225S),震荡混匀,室温放置5-10分钟。
④加入200μl Buffer GL,涡旋震荡混匀。
b. 革兰氏阳性菌
①取细菌培养物1-5ml(106-108个细胞,最多不超过2×109个细胞)置于离心管(自备)中,12000rpm离心1分钟,尽量吸净上清。
②加入180μl Enzymatic Lysis Buffer(自备)使菌体重悬。
③37℃孵育30分钟。
④加入20μl 蛋白酶K 涡旋震荡,充分混匀。加入200μl Buffer GL,涡旋震荡混匀。56℃孵育30分钟。
注意:
1)如果需要,95℃孵育15分钟可以使病原体失活,但是95℃孵育会造成一些DNA的降解。
2)如需去除RNA,可在上述步骤完成后,加入4μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号:WE0225S),震荡混匀,室温放置5-10分钟。
2、加入200μl无水乙醇,涡旋震荡充分混匀。
注意:加入无水乙醇后可能会产生白色沉淀,不会影响后续实验。
3、将步骤2所得溶液(包括形成的沉淀)全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
4、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
5、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤5。
6、12000rpm离心2分钟,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
7、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μlBuffer GE或灭菌水,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
注意:
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)Buffer GE在65-70℃水浴预热,离心之前室温孵育5分钟可以增加产量;用另外的50-200μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
3)如果要提高DNA的终浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1分钟;若洗脱体积小于200μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg,推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
4)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
储存条件:室温(15~30℃)。
我公司的通用型柱式DNA提取试剂盒哪里卖,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销*(代"售")下列产品:
·HRP标记链霉亲和素
编号:WE0386
英文名称:Peroxidase-Streptavidin
规格:100μl
HRP标记链霉亲和素可用于微量抗原、抗体及核酸等大分子的定量、定性检测及定位观察研究,与生物化的抗体联合使用,可检测微量抗原的存在及分布。本产品可用于Immunohistochemistry(IHC)、Western Blot、ELISA等检测。
链霉亲和素与生物素具有极高的亲和力,反应呈高度专一性。每个链霉亲和素分子具有4个生物素分子结合位点,因此,它可同时以多价形式结合生物素化的大分子衍生物,通过标记的HRP催化底物显色,具有多级放大作用。与亲和素相比,链霉亲和素不带糖基、等电点低,在使用中表现出更低的背景和更高的检测灵敏性。
缓冲液:0.01M PBS,50%甘油,pH7.6
稳定剂:15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂:无(叠氮*是HRP抑制剂,抗体稀释液中请避免使用叠氮*作为防腐剂)
应用范围:
WB(1:1000-5000)
ELISA(1:1000-5000)
Immunohistochemistry(1:100-400)
·抗V5标签多克隆抗体
编号:WE0344
英文名称:Anti V5 Rabbit Polyclonal Antibody
规格:20μl|100μl
V5标签是从猿病毒5(SV5)副粘病毒P蛋白和V蛋白中分离得到的由14个*基酸残基组成的多肽(GKPIPNPLLGLDST)。该抗体高度特异识别重组蛋白C末端或N末端的V5标签,不受邻近*基酸组成的影响,可用于检测各种表达载体表达的V5-Tag融合蛋白。
抗体类型:亲和纯化兔多克隆抗体IgG
免疫原:人工合成多肽
应用范围:WB(1:1000-5000)、ELISA(1:1000-10000)
通用型柱式DNA提取试剂盒哪里卖关键词:Universal Genomic DNA Extraction Kit,通用型柱式DNA提取试剂盒,WE0190
107-35-7 Taurine 牛磺酸
果胶酶 Succinic acid 9032-75-1
吐温60 Sodium decanoate 9005-67-8
头孢噻呋* 3,4-Benzopyrene 104010-37-9
DP205 大量产物纯化试剂盒
ARB11236 人细菌性阴道病(BV)含量分析 Human bacterial vaginosis,bv ELISA KIT
ARB12890 小鼠甲状腺素抗体(TAb)Elisa分析 Mouse thyroxine antibody,tab ELISA KIT
3-羟基-1,2,3-*并三嗪-4(3H)-酮 D-Galactose 28230-32-2
4-**甲*(代"酸") Ferrous oxalate dihydrate 456-22-4
核酸杂交漂洗液(高张力) 500ml
ARB10067 人B淋巴细胞刺激因子(Blys)受体elisa测定使用说明书 Human b lymphocyte stimulator,blys ELISA KIT
BTN120930 分子杂交炉 Hybridization Oven
PY02-022 乳糖发酵培养基 250克
ARB14188 羊口蹄疫亚1型抗体(FMD1-Ab)免费代测
SJ0691 D2000 plus
ARB11493 人胱抑素C(CysC)含量分析 Human cysc ELISA KIT
LB Lennox培养基粉剂 1L
T3 RNA聚合酶 TTA
琼脂糖凝胶4FF VK4
通用型柱式DNA提取试剂盒哪里卖关键词:Universal Genomic DNA Extraction Kit,通用型柱式DNA提取试剂盒,WE0190
·Y染色体人基因组DNA定量试剂盒
编号:WE0232
英文名称:Y Human Male DNA Quantification Kit
规格:1ml|5ml
本产品是一种检测人类男性Y染色体浓度的实时荧光定量PCR试剂盒,包括精心优化的PCR反应液、引物混合物、标准品,尤其适用于珍贵、微量DNA样本的定量检测。试剂盒采用了全新高效、快速的热启动扩增酶Goldstar Taq DNA Polymerase,有效避免常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增。本品实现对Y染色体的准确定量,后续可应用于各种领域如遗传制图、物种多态性研究、疾病基因定位、亲子鉴定和法医鉴定等研究分析。
ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差,一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同,因 此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器:Roche LightCycler 480,Roche LightCyler 96,Bio-radiCyler iQ,iQ5,CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器:ABI Prism7500/7500 Fast,QuantStudio® 3 System,QuantStudio® 5 System, QuantStudio® 6 Flex System,QuantStudio® 7 Flex System,ViiA 7 system, Stratagene Mx3000/Mx3005P,Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器:ABI Prism7000/7300/7700/7900,Eppendorf,ABI Step One/Step One Plus等。
·高效无内毒素质粒大量提取试剂盒
编号:WE0167
英文名称:NoEndo Plasmid Maxi Kit
规格:2次|10次
本试剂盒提供一种简单快捷高效提取无内毒素质粒的新方法,在碱裂解法裂解细胞的基础上,采用独特的硅基质膜吸附技术,高效专一结合质粒DNA;同时采用特殊的缓冲液系统和除内毒素过滤器,有效去除内毒素、基因组DNA、RNA、蛋白等杂质。本试剂盒所得质粒纯度高、提取量大,特别适用于细胞转染,同时也可用于DNA测序,PCR,体外转录,内切酶消化等实验。
为什么使用本试剂盒?:内毒素是质粒提取中常见的污染物,由于真核细胞对内毒素非常敏感,因此,如果质粒中含有内毒素会大大降低真核细胞转染效率。
试剂盒组成:
| 组份 | 2次 | 10次 |
| Buffer P1 | 30ml | 125ml |
| Buffer P2 | 30ml | 125ml |
| Buffer E3 | 30ml | 125ml |
| Buffer PS | 15ml | 30ml |
| Buffer PW(浓缩液) | 10ml | 50ml |
| Endo-Free Buffer EB | 10ml | 30ml |
| RNase A(10 mg/ml) | 600μl | 2ml |
| 推柄 | 2个 | 10个 |
| 内毒素过滤器FQ | 2个 | 10个 |
| 吸附柱DQ及收集管 | 2套 | 10套 |
| 离心管(50ml) | 2个 | 10个 |
自备试剂:无水乙醇、异丙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、所有组分可在干燥、室温(15~30℃)环境稳定保存1年,将吸附柱置于2~8℃可保存更长时间,加入RNase A的Buffer P1 置于2~8℃可稳定保存6个月。
2、Buffer P1 在使用前先加入RNase A(将试剂盒中提供的RNase A 全部加入),混匀,置于2–8℃保存。使用前需在室温中放置一段时间,恢复至室温后使用。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请先检查Buffer P2 和Buffer E3是否出现结晶或沉淀,如有结晶或沉淀现象,可在37℃水浴几分钟,即可恢复澄清。
5、注意Buffer P2和Buffer E3含有刺激性物质,请戴手套操作,使用后应立即盖紧盖子。
6、使用Buffer PS处理过的吸附柱最好立即使用,避免放置时间过长影响使用效果。
7、提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。
操作步骤:
1、取150ml过夜培养的菌液,加入离心管(自备)中,12000×g离心2-3分钟收集细菌,尽量吸弃全部上清。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入12ml Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A),使用移液器或涡旋振荡器充分混匀,悬浮细菌沉淀。
注意:如果菌块未彻底混匀,将会影响裂解效果,使提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入12ml Buffer P2,温和地上下颠倒混匀8-10次,使菌体充分裂解,室温放置3-5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。
注意:温和混匀,不要剧烈震荡,以免打断基因组DNA,造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。如果溶液未变得清亮,提示可能菌量过大,裂解不彻底,应减少菌体量。
4、向离心管中加入12ml Buffer E3,立即上下颠倒混匀8-10次,此时出现白色絮状沉淀,室温放置5分钟。12000×g离心10分钟,将上清全部倒入除内毒素过滤器中,慢慢推动推柄(Plungers)过滤,滤液收集在干净的50ml离心管(自备)中。
注意:Buffer E3 加入后应立即混匀,避免产生局部沉淀。
5、向滤液中加入0.3倍滤液体积的异丙醇,上下颠倒混匀。
注意:加入异丙醇过多容易导致RNA污染。
6、柱平衡:向已装入收集管中的吸附柱中加入2ml Buffer PS,12000×g离心2分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7、将步骤5中滤液与异丙醇的混合溶液转移到平衡好的吸附柱(已装入收集管)中。
8、6000-12000×g离心2分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:吸附柱的最大容积为15ml,所以第7步中所得溶液分多次过柱。如果离心机转子倾角较大时,建议加入吸附柱的溶液体积不超过10ml,以防发生漏液现象。
9、向吸附柱中加入10ml Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇),6000-12000×g离心2分钟,倒掉收集管中的废液。
10、重复步骤9。
11、将吸附柱重新放回收集管中,12000×g离心5分钟,倒掉废液,将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱置于一个新的离心管中,向吸附膜的中间部位加入1-3ml Endo-Free BufferEB,室温放置2-5分钟,12000×g离心5分钟,将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意:
1)为了增加质粒的回收效率,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2-5分钟,12000×g离心5分钟,将质粒溶液收集到离心管中。
2)质粒拷贝数较低或>10 kb时,Endo-Free Buffer EB在65-70℃水浴预热,可以增加提取效率。
储存条件:室温(15~30℃)
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文献和实验2, 其它稳定剂和增强剂 三DNA提取相关产品 1.柱式小量质粒DNA抽提纯化试剂盒:MTL001-1 50次 79元 2.DNA胶回收试剂盒: MTL002-1 50次 89元 3.动物DNAout(动物DNA提取试剂盒):3670-10 10 ml 90元 4.植物DNAout(植物DNA提取试剂盒):3672-10 10次 90元 5.血液DNAout(血液DNA提取试剂盒): 3671-10 10 次 90元 6.革氏阴性细菌DNAout提取试剂盒: 3673-10 10 次 90元
甲基化是目前的研究热点,就我所做的一点工作并其中一点心得,与大家分享。希望能够对大家有所帮助。第一部分 基因组DNA的提取。这一步没有悬念,完全可以购买供细胞或组织使用的DNA提取试剂盒,如果实验室条件成熟,自己配试剂提取完全可以。DNA比较稳定,只要在操作中不要使用暴力,提出的基因组DNA应该是完整的。此步重点在于DNA的纯度,即减少或避免RNA、蛋白的污染很重要。因此在提取过程中需使用蛋白酶K及RNA酶以去除两者使用两者的细节:1:蛋白酶K可以使用灭菌双蒸水配制成20mg/ml;2:RNA
的,而确认则在相当程度上是“靠天吃饭”,有一部分是凭撞大运。 人们很早就意识到了这一点,也在想办法提高定性的准确性,所以有了加标确定法,双柱法,二极管阵列检测器等的运用,在这几种方法中,加标确认法在概念上就不正确,双柱法也近于隔靴搔痒,二极管阵列法能起有些作用,可惜特异性不高,也容易造成冤案。 在色谱中引入质谱技术法后,大大增强了定性的可靠性。 质谱法针对的是分子结构,信息特征且丰富,甚至在一定程度上可以摆脱标准物质的限制。 下面谈下灵敏度。 通用型
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