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- 人外周血单核细胞
- 美国
- Sci-PH0174
- 2025年07月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
999
- 细胞类型：
原代细胞/细胞系
- 品系：
详询
- 组织来源：
新鲜组织
- 物种来源：
Mammals
- 免疫类型：
血液科
- 细胞形态：
上皮成肌原粒淋巴成纤维等
- 器官来源：
正常组织源性
- 运输方式：
90%完全培养基+1136%DMSO，液氮储存
- 年限：
长久
- 生长状态：
悬浮贴壁
- 规格：
T25
（1）组织来源于正常新鲜组织。
（2）鉴定：Cytokeratin-18, -19和Vimentin免疫荧光染色。
（3）原代细胞培养末期液氮冻存。
（4）每冻存管细胞数：>5×105 cells/1ml。
（5）Cytokeratin-18, -19和Vimentin免疫荧光染色。
（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
圻明生物原代细胞引种于：ATCC,武大细胞库，上海生化细胞所，中国科学院典型培养物保藏委员会等。 我们为全国广大客户提供优质的产品，完善的技术支持，过硬的质量保证。
操作指南及质量保证：
1. 细胞为三代以内，活体。运输过程中细胞出现污染和状态不好，我们免费重新发货。
2. 实验过程中若确定是客户问题，客户需支付物流和耗材费用，我们可重新发货。其他根据情况灵活处理。
3. 产品使用过程中，华拓生物可提供技术上的指导。
人外周血单核细胞细胞培养：细胞请于细胞培养箱中培养，大部分细胞是37℃，5%CO2，湿度100%环境下培养的。有极少部分细胞培养条件不一致，请仔细阅读相应的细胞说明书，使用正确的培养基及培养条件；细胞于培养瓶或培养皿中培养，加入适量说明书上标注的细胞相应完全培养基（一般液面高度2-3㎜即可）。
人外周血单核细胞细胞传代：1.细胞培养至密度80%以上时即可传代，先将细胞培养基取出3ml用15ml离心管装好，其他培养基全部吸干舍弃；2.培养皿加入2-3ml无菌PBS，轻轻晃动，使PBS浸洗到皿底所有部位，PBS吸干舍弃；3.加入1ml胰酶，轻轻晃动，使胰酶浸没到皿底所有部分，将皿盖好放入培养箱中消化；4.3分钟后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞不再贴壁，即可加入第一步收集的培养基混匀，若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至不贴壁为止；5.将细胞悬液均匀分成几份，分别加入不同培养皿中，补加新培养基后放回培养箱培养。
如不能在收到细胞后及时操作细胞，T25或者离心管发货的细胞可以消毒后在培养箱过夜，干冰发货的可以在确认干冰未完全升华时将细胞直接放回液氮或者-80°冰箱，若干冰完全升华，需立即复苏细胞。
T25瓶或者离心管在培养箱平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境，同时使部分因运输导致脱落的细胞贴壁，此步骤非常必要不可忽略。T25瓶如果在显微镜下可以看到部分不贴壁的细胞，可以收集上清后离心（1200rpm,5min），将沉淀用新的培养基重悬后接种至新的培养瓶或皿中。
部分细胞在运输过程中，由于不断震荡及环境不适，可能导致细胞破碎死亡，从而使培养基中漂浮很多细胞碎片及颗粒状物质。这种情况下，平衡后，贴壁细胞用PBS洗两遍在加新的培养基或者传代至新瓶中培养即可；悬浮细胞可以离心（1000rpm,3min）收集细胞，用PBS重悬后再离心一次，再用新的培养基重悬并接种细胞。
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文献和实验人外周血PBMC的制备流程 收集抗凝人外周血，用 1640 无血清培养基或 PBS 按照 1:1 的比例稀释，上下颠倒混匀或者用移液枪吹打混匀。 在 15 mL 离心管中，先加入 3 mL 充分混匀的 Ficoll 液（1.077 g/mL），再沿着管壁缓慢加入2 mL稀释后的血液，血液和 Ficoll 液分层明显为成功。 注：Ficoll 提前半小时从 4℃ 冰箱取出恢复到室温，温度过高会导致分离不明显，温度过低会导致密度过大，同样分离效果不好， 20~25℃ 最佳。。 将样本小心转移
人外周血单细胞悬液制备流程 1.采集人外周血样本于抗凝管中。 离心管内加入100 μL新鲜血和2 mL 1×红细胞裂解液，混匀，4℃裂解10 min。 300 g离心5 min（裂解完立即离心，防止时间过长损伤细胞），弃上清，得到白色细胞沉淀。 PBS洗涤一次。 加入100 μL细胞染色缓冲液重悬细胞，不用计数，即可进行后续流式抗体染色实验。按照100 μL新鲜血样本制备的单细胞悬液，加入1 Test对应的流式抗体混匀进行后续实验。 注意事项： 1. 采血用抗凝管，有肝素和EDTA两种
Purpose Materials10ml 6% dextran + 7ml citrate/citric acidDextran: T500 --> 6g+100ml PBSCitrate solution: 25g Na Citrate + 8g citric acid + 500 ml PBS 43 ml blood 12 ml RT Histopaque 107718 ml cold H2 O2 ml 10x PBSM199 for HUVECs: 1L powder pocket
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
