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- 详细信息
- 技术资料
- 库存:
605
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
阴凉干燥
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品,包括乙型流感病毒分型荧光PCR检测试剂盒(IFVB-YA)库存在内的病毒PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品,欢迎选购。
名称:乙型流感病毒分型荧光PCR检测试剂盒(IFVB-YA)库存
品牌:百奥莱博
等级:科研试剂
编号:SYA195
产地:国产|进口
想要了解更多关于乙型流感病毒分型荧光PCR检测试剂盒(IFVB-YA)库存的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息,请和我们联*(代"系")。此外我公司还销*(代"售")下面的产品:
·登革热病毒Ⅰ型单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA225
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·人细小病毒B19核酸检测试剂盒
编号:SYA774
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
人类细小病毒B19是英国科学家Cossart及其同事于1977年在筛查无症状乙肝患者血清时无意发现的,根据生化及分子生物学特点将其归为细小病毒科。由于其是在B组的第19号样品中发现的,故命名为B19病毒。最初人们认为B19是人群中普遍存在而不致病的一种病毒,但后来发现,B19感染是引起传染性红斑、慢性溶血性贫血患者发生再障危象、免疫抑制患者慢性贫血、孕期流产、死胎的病原体。
本试剂盒适用于检测人全血等标本中的人细小病毒(B19)DNA,适用于人细小病毒(B19)感染的辅助诊断,其检测结果仅供参考。
【检验原理】
本试剂盒用一对人细小病毒B19特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对人细小病毒B19核酸进行体外扩增检测,用于对可疑感染者的病原学诊断。
【试剂组成】
名称 数量 规格
核酸提取液 2管 1.5ml
酶液 1管 50μl
B19反应液 1管 1.0ml
B19阳性质控品 1管 50μl
阴性质控品 1管 250μl
说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。
【储存条件及有效期】
-20℃避光保存、运输、避免反复冻融,有效期12个月。
【适用仪器】
ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。
【标本采集】
1. 适用标本类型:人全血;
2. 标本采集:
血液:无菌注射器抽取外周血1-2ml注入EDTA2Na(或柠檬酸*)抗凝管;
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过6个月,标本运送应采用0℃冰壶。
【使用方法】
1. 样品处理(样本处理区)
1.1 样本前处理
取抗凝血下层(细胞层)50μl,加入200μl ddH2O使其胀破。
1.2 DNA提取
1) 取上述处理好的标本40μl,加入等体积核酸提取液,100℃恒温处理10分钟,13000 rpm离心5分钟,取上清液转移至新的1.5ml EP管,-20℃保存;
2) DNA的提取也可以采用北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(离心柱提取法),请严格按照试剂盒说明书进行操作。
2. 试剂配制(试剂准备区)
根据待检测样本总数,设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1
管阴性对照+1管阳性对照),每测试反应体系配制如下表:
试剂 B19 反应液 酶液
用量 20μl 1μl
3. 加样(样本处理区)
将步骤1提取的DNA、阳性质控品、阴性质控品各取4μl,加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。
4. PCR扩增(核酸扩增区)
4.1 将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内;
4.2 推荐循环参数设置:
步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号
1 1 cycle 94℃ 2min 否
2 40 cycle 94℃ 15sec 否
55℃ 30sec 是
反应体系为25ul;荧光通道检测选择:FAM通道。
5. 结果分析判定
5.1 结果分析条件设定
1) 设置基线(baseline):一般情况下,对ABI 7500、7700等仪器设为6-15cycle,对PE5700设为3-15cycle,对MJ Research Option2设为6-12cycle。特殊情况可对基线适当调整。
2) 设置阈值(threshold):以阈值线刚超过阴性对照扩增曲线(无规则的噪音线)的最高点。
5.2 结果判断
1) 阳性:检测样本Ct值小于等于35.0,且曲线有明显的指数增长期;
2) 可疑:检测样本Ct值大于35.0且小于40.0,重复一次实验,如果Ct值仍小于40.0,且曲线有明显的指数增长期,为阳性,否则为阴性;
3) 阴性:检测不到样本Ct值或Ct值为40。
6. 对检验结果的解析
实验室环境污染,试剂污染,标本交叉污染会出现假阳性结果;试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果。
7. 质控标准
1) 阴性质控品:扩增曲线无对数生长期或无Ct值显示;
2) 阳性质控品:扩增曲线有明显对数生长期,且Ct值≤32;
以上条件应同时满足,否则实验视为无效。
【注意事项】
1. 所有操作严格按照说明书进行;
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,混匀并短暂离心;
3. 反应液应避光保存;
4. 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;
7. 实验完毕后用10%次*酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
乙型流感病毒分型荧光PCR检测试剂盒(IFVB-YA)库存关键词:IFVB-YA,SYA195,乙型流感病毒分型荧光PCR检测试剂盒(IFVB-YA),百奥莱博
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乙型流感病毒分型荧光PCR检测试剂盒(IFVB-YA)库存关键词:IFVB-YA,SYA195,乙型流感病毒分型荧光PCR检测试剂盒(IFVB-YA),百奥莱博
·大肠杆菌致贺毒素(Stx1)/(Stx2)双重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA107
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·炭疽杆菌(BA)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA499
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
一、简介
本试剂盒用一对炭疽杆菌特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对炭疽杆菌核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、用途
该试剂盒适用于检测发病部位新鲜脓液、渗出物,吸入性炭疽的咯痰、呕吐物、肠炭疽的粪便及脑脊液、外周血等样本中炭疽杆菌(BA)DNA,用于炭疽病等疾病的辅助诊断,其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成(50T/Kit)
组份 数量 规格
BA反应液(BA-qPCR MIX) 1管 1mL/管
核酸提取液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合液(Enzymes MIX) 1管 50μL/管
阴性对照(NTC) 1管 250μL/管
BA阳性对照(BA-PTC) 1管 50μL/管
四、荧光PCR仪器适用范围
ABI系列、MJ系列、Roche系列,博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。
五、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为12个月。
六、样品采集、前处理与DNA提取
6.1 样品采集
6.1.1 适用标本类型:新鲜脓液、渗出物、吸入性炭疽的咯痰、呕吐物、肠炭疽的粪便及脑脊液、牛外周血。
6.1.2 标本采集
6.1.2.1 组织:取发病组织约1g,置入1.5mL洁净EP管,立即送检;
6.1.2.2 血液:无菌注射器抽取外周血1-2mL注入EDTA2Na(或柠檬酸*)抗凝管;
6.1.2.3 体液等液体标本:取0.5-1mL左右,置入1.5mL洁净EP管,立即送检;
6.2 样本前处理:
6.2.1 组织:取50mg左右组织用玻璃匀浆器匀浆,匀浆后置于洁净的1.5mL离心管中;
6.2.2 血液样本:直接取200uL抗凝血,转至一洁净的1.5mL离心管中,加入1mL双蒸水,剧烈震荡30s,8000rpm离心5min,弃上清(若沉淀颜色呈红色,请再重复洗涤一次);
6.2.3 粪便等固体标本:挑取米粒大小粪便,放置于0.5mL生理盐水的离心管中,震荡混匀,13000rpm离心2min,弃上清;
6.2.4 液体标本:取适量标本13000rpm离心2min,弃上清。
6.3 DNA提取
6.3.1 对上述处理好的样本加入40uL核酸提取液,100℃恒温处理10min,13000rpm离心5min,取上清液转移至新的1.5mL EP管,-20℃保存;
6.3.2 DNA的提取也可以采用商业化DNA提取试剂盒。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取4µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BA-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 20µL N×20µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 21µL N×21µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入21μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(BA-PTC)4μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
预变性 1循环 94℃ for 2 min
PCR扩增 40循环 94℃ for 15 sec
55℃ for 30 sec
在55℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。
八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照(BA-PTC):均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明炭疽杆菌核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明炭疽杆菌核酸阴性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行炭疽杆菌qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明炭疽杆菌核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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