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北京现货口蹄疫单重凝胶PCR检测试剂盒(FMDV)优惠价

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  • ¥4200 - 5800
  • 百奥莱博
  • SYA556-EPB
  • 北京
  • 2025年07月09日
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      北京百奥莱博科技有限公司

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    北京百奥莱博生产销*(代"售")的北京现货口蹄疫单重凝胶PCR检测试剂盒(FMDV)优惠价,是高品质的动物疫病PCR检测试剂盒产品,欢迎的您垂询订购。


    名称:北京现货口蹄疫单重凝胶PCR检测试剂盒(FMDV)优惠价
    规格:10次/盒|48次/盒
    等级:科研试剂
    产地:国产|进口
    编号:SYA556
    品牌:百奥莱博

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    北京现货口蹄疫单重凝胶PCR检测试剂盒(FMDV)优惠价关键词:口蹄疫单重凝胶PCR检测试剂盒(FMDV),百奥莱博,SYA556

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    北京现货口蹄疫单重凝胶PCR检测试剂盒(FMDV)优惠价关键词:口蹄疫单重凝胶PCR检测试剂盒(FMDV),百奥莱博,SYA556


    ·霍乱弧菌毒素共调菌毛亚单位基因(tcpA)单重荧光PCR检测试剂盒
    编号:SYA076
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒

    ·人副流感病毒4型单重荧光PCR检测试剂盒
    编号:SYA177
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒
    人副流感病毒4型单重荧光PCR检测试剂盒说明书
    一、简介:
    人副流感病毒(Parainfluenza viruses,PIVs),是一种常常引起儿童下呼吸道感染的单链的RNA病毒,属于副黏病毒。本试剂盒用一对人副流感病毒4 型特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用一步法荧光RT-PCR 技术对人副流感病毒4 型RNA 进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中人副流感病毒4 型(PIV4)的探针报告基团为FAM。

    二、用途:
    本试剂盒适用于各种咽拭子、鼻拭子等临床样品中人副流感病毒4 型的特异性检测。适用于人副流感病毒4 型感染的辅助诊断、监测及流行病学调查,其检测结果仅供临床参考。

    三、试剂盒组成:(48T)
    组份 数量 规格
    人副流感病毒4型反应液(PIV4-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
    酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
    无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
    阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
    人副流感病毒4 型阳性对照(PIV4-PTC) 1管 50μL/管

    四、储存条件及有效期:
    本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月,反复冻融次数不宜超过5次。

    五、荧光PCR仪器适用范围:
    ABI系列,Stratagene MX系列,Bio-Rad系列等荧光定量PCR检测仪等。

    六、样品的采集与RNA提取
    6.1 样品的采集
    按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-80℃,但不能超过6个月,标本运送应采用0℃冰壶。
    6.1.1 血清:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入无菌的干燥玻璃管,室温(22-25℃)放置30-60min,血标本可自发完成凝集析出血清,或直接使用水平离心机,3000rpm离心5min,吸取上层血清,转移至1.5mL灭菌离心管。
    6.1.2 血浆:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管,立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次,使抗凝剂与静脉血充分混匀,5-10min后即可分离出血浆,转移至1.5mL灭菌离心管。
    6.1.3 拭子、分泌物等样品:在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水,剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中,6000rpm离心20s,取上清备用。
    6.1.4 病灶组织样品:称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮),再加1mL生理盐水研磨至无块状物,然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
    6.2 RNA提取
    可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
     注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5μL 加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

    七、检测步骤:
    7.1 试剂的准备
    从试剂盒中取出荧光qRT-PCR 反应液(PIV4-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm 离心10s。
    设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
    试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
    荧光PCR反应液 14µL N×14µL
    酶混合物 1µL N×1µL
    总量 15µL N×15µL
    计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm 离心10s,向设定的N 个PCR 反应管中分别加入15μL,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照PIV4-PTC)5μL,10000rpm 瞬时离心10 秒。
    7.2 qRT-PCR反应条件
    将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
    推荐循环条件:
    反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
    预变性 1循环 95℃ for 10 min
    PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
    60℃ for 45 sec
    在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。其中FAM基团检测PIV4,淬灭基团为None。

    八、结果分析:
    8.1 结果分析条件设定
    直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
    8.2 试验成立判定
    (1) 阴性对照(NTC):FAM和HEX/VIC/JOE通道全部阴性。
    (2) 阳性对照(PIV4-PTC):FAM和HEX/VIC/JOE通道均有扩增曲线。
    以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效
    8.3 结果判定
    FAM通道:Ct值≤35,人副流感病毒PIV4亚型核酸为阳性;Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明人副流感病毒PIV4亚型核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间,为灰区,需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明人副流感病毒PIV4亚型核酸阳性;否则判为样本阴性。

    九、注意事项:
    (1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
    (2) 所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含RNA 酶。
    (3) PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等),防止实验室污染。
    (4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
    (5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。




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