热启动高保真酶现货

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括热启动高保真酶现货在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：热启动高保真酶现货
编号：SY0038
规格：100U
品牌：百奥莱博
HotStart Pfu DNA Polymerase在Pfu DNA Polymerase的基础上添加了在常温下能够抑制5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性的两种单克隆抗体，可进行高特异性的热启动(Hot Start)PCR，扩增产物为平端。Pfu DNA Polymerase是经过基因工程改造的，新一代超保真DNA聚合酶，具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性，可用于几乎所有PCR反应。其行进性 (processivity)得到了大幅度提升，即使是非常复杂的模板，也能准确快速的完成反应。其错配率是普通Taq酶的1/52，是Pfu酶的1/6；且扩增速度可以达到15秒/kb。

本产品中附带的5×HS Pfu buffer对于简单或复杂模板、短片段或长片段PCR扩增都具有良好的适应性。缓冲液中已经含有10 mM Mg2+ (1×终浓度为2 mM)，可以使用产品中提供的DMSO/MgSO4对反应体系进行优化。另外，产品中附带的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的扩增。

产品组份：
5×HS Pfu buffer(with 10 mM MgSO4)：1.25 ml
25 mM MgSO4：1 ml
dNTP Mix(10 mM each)：100 μl
HS Pfu DNA Polymerase(1 U/μl)：100 μl
5×PCR Enhancer：500 μl
DMSO：100 μl
10×Loading buffer：1.25 ml

活性定义：用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃ 30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
储存条件：-20℃

质量控制：
核酸外切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg λ-HindⅢ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，加入2U本品，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测1：50 μl PCR体系中加入1U本品，以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的8.2 kb条带。
功能检测2：50 μl PCR体系中加入1U本品，以10 ng λDNA为模板扩增30个循环，取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的15 kb条带。

使用方法：
1. 所有操作请在冰上进行，各组分解冻后请充分摇匀。为了防止HS Pfu DNA Polymerase的校对活性降解引物，请将聚合酶最后加入反应体系中。各组分使用完毕后及时放回-20℃。5×HS Pfu buffer请勿长时间敞口放置。

 

ddH2O	to 50 μl
d5×HS Pfu buffer (with 10 mM MgSO4)	10 μl
d25 mM MgSO4a	optional
ddNTP Mix(10 mM each)b	1 μl
dDMSOc	optional
d5×PCR Enhancerd	optional
d模板DNAe	optional
dForward Primer(10 μM)	2μl
dReverse Primer(10 μM)	2 μl
HS Pfu DNA Polymerase(1 U/μl)f	1 μl

【注】：
a. 对于大多数PCR反应，Mg2+最佳终浓度为1.5-2 mM。体系中已含有终浓度为2 mM Mg2+，如有需要，可用25 mM MgSO4，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索Mg2+最佳使用浓度。
b. 请勿使用dUTP和带有尿嘧啶的引物或模板。
c. 扩增子GC含量>60%时加入终浓度3%的DMSO有可能会有助于扩增。
d. 推荐仅当扩增子GC含量>60%且优化条件也无法正常扩增时使用；可能会降低保真度。
e. 不同模板最佳反应浓度有所不同，下表为50 μl反应体系推荐模板使用量：

模板种类/扩增长度	＜1 kb	1 kb～10 kb	＞10 kb
基因组DNA	50 ng～250 ng	100 ng～300 ng	150 ng～400 ng
质粒或病毒DNA	10 pg～20 ng	10 pg～20 ng	1 ng～30 ng
cDNA	1～5 μl(不超过PCR反应总体积的1/10)

f. 推荐的酶的终浓度为1U/50 μl反应。然而，根据扩增子的长度和复杂程度不同，可将HS Pfu DNA Polymerase在0.5-2U/50 μl反应之间进行优化。但请勿超过2U/50 μl，尤其当扩增子长度大于5 kb时。HS Pfu DNA Polymerase具有较强的校对活性。如扩增产物需要进行TA克隆，加A之前必须进行DNA纯化。

2. 推荐PCR反应条件：

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性a	95℃	30 sec～3 min	1
变性b	95℃	5～10 sec	25～35循环
退火c	45℃～72℃	10～30 sec
延伸d	72℃	15～30 sec/kb
彻底延伸	72℃	5～10 min	1

【注】：
a. 推荐大多数模板的预变性温度为95℃，时间为：质粒或病毒DNA，30 sec，基因组2 min，cDNA 3 min；对于高GC含量模板，预变性温度需提升至98℃，变性时间为2～4 min；对于超过10 kb的扩增子，预变性温度需降低至92℃，变性时间不超过2 min。
b. 对于大多数模板在95℃变性时间设为5～10 sec即可。对于高GC含量模板，变性温度需提升至98℃；对于超过10 kb的扩增子，变性温度需降低至92℃，并延长变性时间至15 sec。
c. HS Pfu DNA Polymerase能够促进模板和引物高效退火。一般来说，退火温度设置为引物Tm值±3℃范围内之间即可。如果需要，可以建立一个温度梯度反应去寻找引物模板结合的最适温度。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈现弥散状。因此，推荐退火时间设置为10 sec即可。对于一些困难模板，退火时间可在10～30sec之间调整。
d. 对于大多数扩增反应，延伸过程可在72℃进行。对于超过10 kb的扩增片段，需降低延伸温度至68℃。延伸时间取决于扩增片段的长度和模板的复杂性。使用质粒等复杂程度较低的DNA做模板时，可使用15 sec/kb的延伸时间；使用基因组
cDNA等复杂程度较高的DNA做模板时，延伸时间应为30 sec/kb。太长的延伸时间会导致非特异性扩增增加，因此延伸时间请勿超过30 sec/kb。

3. 长片段PCR指南：
*使用高质量的模板；
*使用长引物。将引物加长至Tm值68～72℃，把退火/延伸温度合并为68℃。这样可以显著提高扩增特异性；
*适当提高酶量，但50μl反应体系内不要超过2 U；
*添加DMSO，以1%的浓度递增。调整范围为0%～6%；
*推荐反应条件设置：

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	92℃	2 min	1
变性	92℃	5～10 sec	25～35循环
延伸	68℃	15～30 sec/kb
彻底延伸	68℃	5～10 min	1

4. 高GC含量模板PCR指南：
*使用高质量的模板；
*提高变性温度至98℃；
*添加DMSO，以1%的浓度递增。调整范围为0%～8%；
*添加5×PCR Enhancer；
*推荐反应条件设置：

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	3 min	1
变性	98℃	10 sec	25～35循环
退火	45℃～72℃	10～30sec
延伸	72℃	15～30 sec/kb
彻底延伸	72℃	5～10 min	1

引物设计注意事项:
1）引物3’端最后一个碱基最好为G或者C；
2）引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配；
3）引物3’端尽量避免发夹结构出现；
4）引物的Tm值调整至55℃-65℃之间。
5）引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之间；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。

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·DEPC水(无DNase、RNase )
编号：SY0264
英文名称：DEPC-treated Water (DNase、RNase free)
规格：500ml
DEPC水（DEPC-treated Water ）是用0.1% DEPC（diethypyrocarbonate，焦碳酸二乙酯）处理，再经高温高压消毒的MiliQ纯水。经检测不含RNase、DNase和proteinase。 DEPC水可以用于RNA沉淀的溶解，含有RNA的各种反应体系如反转录、siRNA的退火等。

·红细胞裂解液
编号：SY0539
英文名称：Red Blood Cell Lysis Buffer
规格：100mL
本产品采用了一种简便易行的方式，经配方优化保证既不破坏白细胞又能充分的将红细胞裂解去除，适用于人，大小鼠等哺乳动物新鲜血液。通常情况下，可以获得血液样品中全部白细胞的 80% 以上并充分保证白细胞的生物活性。

本产品主要成分是*化铵，即用型溶液，能快速、有效的裂解红细胞，富集分离白细胞。获得的白细胞生物活性好，可直接应用于流式细胞术，核酸或蛋白的提取，PCR等下游实验。

操作步骤
使用前先将低温保存红细胞裂解液平衡至室温。然后在血液样品中加入3倍体积红细胞裂解液 （例如，300 μl血液加入900 μl红细胞裂解液），颠倒混匀，室温放置5min，期间再颠倒混匀几次 ，10000rpm离心1min （若是离心机最高转速不允许，可以3000rpm离心5min），吸去上清。用适当的缓冲液（如PBS， pH 7.2~7.4）清洗一遍。离心后留下白细胞沉淀进行后续的操作。

注意事项
1)本试剂适用于从 1μl 到 10ml 的血液样品中分离白细胞，获得的白细胞可进行下游实验。
2)为了提取到最佳的核酸或蛋白，请使用新鲜血液或保存时间低于 7 天的血液。如产生血凝块，将其去除。尽量采用抗凝管采集样本。
3)通常情况下，血液样品与红细胞裂解液按 1 ： 3 比例裂解，对一些特殊病例如白血病、红细胞增多症等，建议采用 1 ： 4 或更高比例以保证结果。
4)本品重要成分是*化铵，不能保证有效裂解有核红细胞，如鸟类，爬行动物、鱼类等血液中的红细胞。
5)本品也可用于哺乳动物组织中红细胞的裂解。

储存条件：2-8℃


热启动高保真酶现货关键词：SY0038,热启动高保真酶,HotStart Pfu DNA Polymerase


·DAB显色试剂盒棕黄色(WB)
编号：SY0755
英文名称：DAB Peroxidase Substrate Kit for Western Blot (Brown-Yellow Color)
规格：1KIT
本试剂盒采用液体性滴瓶包装，使用方便，并且减少了接触有潜在毒性的DAB。DAB 即二*基联*(代"*")*(代"胺")（3,3’-diaminobenzidine），辣根过氧化物酶（Peroxidase）最常用的生色底物，显色呈鲜艳的棕黄色，可用于免疫组化及各种印迹显色法。

产品组份：
DAB浓缩液（40×）————3ml
H2O2 浓缩液（40×）————3ml
TBS浓缩缓冲液（40×）————3ml

操作方法
1）DAB 显色：配制完整的DAB 显色工作液，按每2 ml 蒸馏水加显色剂A，B，C 各1滴，混匀。
2）混匀后加至膜上。
3）室温显色。一般显色1-30min。若无背景出现则可继续显色。显色后用蒸馏水洗涤以终止反应。
4）观察，照相。

储存条件：-20℃，有效期一年。


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·Hoechst 33342
编号：SY0552
规格：10mg
Hoechst 33342是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，它在嵌入双链 DNA 后释放强烈的蓝色荧光，对细胞的毒性较低。Hoechst 33342 常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。也可以用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。

本品为粉末状，用于细胞核染色时，推荐的Hoechst 33342工作浓度为0.5-10μg/ml

中文名称：二*甲亚胺, 三*化* 2-(4-乙基*基)-5-(4-甲基-1-哌*(代"嗪")基)-2,5-二-1H-*并咪唑
英文名称：2’-(4-Ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5’-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride
分子式：C27H28N6O·3HCl
分子量：561.93 
CAS：23491-52-3 
储存条件：-20℃干燥避光，有效期一年。
结构式

我公司生产供应销*(代"售")的核酸扩增(PCR)产品正全系列现货促销，满分期待您的垂询选购热启动高保真酶现货。