SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(FITC荧光/DAB显色

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百奥莱博专业生产销*(代"售")SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(FITC荧光/DAB显色)打折促销，我公司是生物试剂、化学试剂专业供应商，立足北京，服务全国的高校、研究所、医院、企业科研部门，欢迎各位老师来电垂询订购。

名称：SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(FITC荧光/DAB显色)打折促销
品牌：百奥莱博
编号：QN1219
英文名：SABC(Rabbit IgG)-FITC(POD) Kit
本试剂盒适合于一抗为兔IgG来源的免疫组化实验，提供DAB及FITC两种显色方式。

SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10)，经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex，SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶或者FITC和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶与FITC将保证SABC具有很高的敏感性。

试剂盒组分：
封闭液（5% BSA）———————————10ml
生物素标记羊抗兔IgG浓缩液-——————100ul
SABC-FITC浓缩液-———————————100ul
SABC-POD浓缩液————————————100ul
稀释液————————————————30ml
20×DAB显色液A————————————1ml
20×DAB显色液B————————————1ml
抗荧光衰减封片剂———————————10ml

操作步骤:(以石蜡切片热修复为例)
1、切片常规脱蜡至水。3%H2O2室温5-10分钟以灭活内源性酶(如果FITC，可省掉此步)。蒸馏水洗3次。
2、热修复抗原：将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液(PH6.0)，电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。
3、滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 免洗。
4、用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周)，也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗，37℃ 1小时孵育左右或20℃ 2小时左右，也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。
5、根据使用量，用稀释液将bio-羊抗兔IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul bio-羊抗兔IgG浓缩液,混匀即成工作液，此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素化羊抗兔IgG工作液，20-37℃ 处理30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟。如果用荧光观察，请接步骤6、7，如果用DAB显色，请直接转至步骤8。
6、根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液，混匀即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-FITC工作液,20-37℃，30分钟(避光)。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次，每次5分钟。
7、滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。
8、根据使用量,用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-POD浓缩液，混匀即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-POD工作液,20-37℃，30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次，每次5分钟。
9、DAB显色:根据用量，用PBS(pH7.2-7.4)配制，按1ml PBS加入50ul 20×DAB显色液A，加入50ul 20×DAB显色液B ，混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
10、苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。

对于细胞爬片：常规固定后，PBS漂洗两次，再用0.5%Txiton X-100室温20分钟，PBS漂洗两次，3%H2O2(如果用FITC，刚可省掉此步)处理15分钟;PBS漂洗两次，下接上面第4步。
对于冰冻切片：固定后，可用PBS漂洗两次，再接上面第二步。

注意事项：
1、如果用DAB染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前,用加有0.01-0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。
2、如果用FITC观察背景过高，在SABC反应之后，用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次，PBS洗涤2次，然后封片观察。
3、因为免疫组化指标众多，标本不一，此步骤仅作参考。

关于SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(FITC荧光/DAB显色)打折促销的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·DnaseⅠ
编号：QN0501
英文名称：DeoxyribonueleaseⅠ
规格：15ku
脱氧核糖核酸酶Ⅰ本品催化脱氧核糖核酸降解，可用于蛋白或RNA的提取中去除DNA。酶反应如下：
脱氧核糖核酸→二核苷酸-5’-磷酸＋寡聚核苷酸-5’-磷酸。

CAS号：9003-98-9
分子量：约31 kDa
储存条件：-20℃
酶活：3000U/mg
性状：黄色至浅黄色粉末
溶解性：溶于0.15M NaCl溶液后为无色澄清液体，参考浓度为5.0mg/ml。

·甘油明胶封片剂
编号：QN1246
英文名称：Glycerol Gelatin aqueous slide mounting medium
规格：10ml
甘油明胶封片液是一种参考经典的 Kaiser 方法配制的水性封片液，但经过改良，不再含剧毒*酚，可以用于常规的各种切片、涂片等的封片。本甘油明胶封片液中的主要有效成分为明胶和甘油。

·尿苷-5"-二磷酸*盐
编号：QN0540
英文名称：URIDINE 5"-DIPHOSPHORIC ACID DISODIUM SALT
规格：100mg
本品常用在P2Y受体激动剂等科研实验方面。

别名：;5"-二磷酸尿苷*盐
CAS号：21931-53-3
分子式：C9H12N2Na2O12P2
分子量：448.12
储存条件：−20℃

·D-半乳糖醛酸
编号：QN0182
英文名称：D-(+)-Galacturonic acid monohydrate
规格：1g|5g
别名：右旋水解乳糖醛酸
CAS号：91510-62-2
分子式：C6H10O7·H2O
分子量：212.15
储存条件：室温干燥保存
纯度：≥97.0%(T)
性状：白色针状结晶

·普通RIPA裂解液(组织/细胞)
编号：QN1081
英文名称：RIPA buffer
规格：100ml
RIPA组织/细胞裂解液是利用表面活性剂等来裂解细胞膜(包括核膜)。本试剂提取的蛋白为可溶性总蛋白。

使用方法：
如发现RIPA有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。
根据使用量，取每1ml RIPA 加入10ul PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，混匀备用 (PMSF现用现加)。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150～250 ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液，用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 5～10×105细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液
(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

储存条件：RIPA裂解液4℃保存，PMSF-20℃保存，有效期1年


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·脱氧胆酸*
编号：QN0250
英文名称：Deoxycholic acid， sodiu*(代"m") salt
规格：25g
本品可用于配制细菌培养基，代替脑磷脂作胆固醇絮状试验，蛋白质分析等。

别名：去氧胆酸*
CAS号：302-95-4
分子式：C24H39O4Na
分子量：414.56
储存条件：室温干燥保存
纯度：＞99.0%
性状：白色粉末

·酸性蛋白酶(1：50000)
编号：QN0507
英文名称：ACldic Protease
规格：250g|1000g
本品是一种酸性蛋白酶制剂， 在酸性条件下具有较高活性， 由酸性蛋白酶高产菌株——曲霉菌 (Aspergillus)深层发酵而成。具有较强的水解能力能力，能将大分子的蛋白质水解成*基酸等产物。

CAS号：9025-49-4
活性：50000units/g
最适pH：2.0～5.0
最适温度：45～55℃
来源：由黑曲霉经发酵提炼而成而成
性状：固体型为黄褐色粉末
溶解性：易溶于水
储存条件：RT


酶活定义：一个酶活力指1g酶粉或1ml酶液在40℃ PH3.0条件下，1分钟水解酪素产生1ug酪*酸为一个活力单位(u/g或u/ml)。

·ECL化学发光法检测试剂盒(小鼠IgG)
编号：QN1158
英文名称：Western blotting(Mouse IgG)
规格：1盒
本试剂盒主要用于western blotting的化学发光显色，含有HRP标记抗小鼠IgG二抗。

SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带(抗原所在位置)。

试剂盒组分：
封闭试剂———————————30g(可配制400ml)
10倍浓缩抗体稀释液——————50ml
HRP标记小鼠IgG二抗——————0.3ml，效价1:500～1000
ECL显色液-——————————25mlA+25mlB

常规电泳转膜后:
1)清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
2)按5g封闭试剂加100ml双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜放入封闭液内，置摇床孵育，室温封闭30min。用TBS-T缓冲液(PH7.6)洗膜，室温漂洗3次每次5min。
3)将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×(10ml,10×抗体稀释液加入90ml双蒸水，混匀，可4℃保存三个月)。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4)用1×的抗体稀释液稀释一抗。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
5)用TBS-T缓冲液(PH7.6)洗膜，室温漂洗3次每次5min。
6)用1×的抗体稀释液稀释二抗。根据用量，按10ml抗体稀释液加入15ul的HRP标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口，37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
7)用TBS-T缓冲液(PH7.6)洗膜，室温漂洗3次每次10min。
8)根据用量，取ECL发光液A、B等量混匀，加在膜正面，暗室显色1～5分种。倾去显色液，小心用纸吸去显色液，在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片，做好标记，轻轻的放在膜上，显色30秒到1分钟，取出胶片浸入显影液中，观察显色情况，再放入定影液中1分钟。根据条带强弱，再次感光时可减短或者加长感光时间(从5秒到30分钟)以期达到理想结果。
注意事项：
1.请根据一抗来源选择试剂盒。
2.可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与时间。如果
条带过弱，可增加抗体浓度，可延长抗体孵育时间或加长感光时间。
3.TBS-T(0.01M，PH7.6)配制方法：称取NaCl 8.5g，Tris 1.21g，用800ml的双蒸水溶解，用盐*(代"酸")调PH到7.6，再加入0.5ml Tween-20，用双蒸水加至1000ml，混匀即可。(也可按照自己的配制习惯来配制)

储存条件：-20℃避光，有效期一年。


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·甘油三丁酸酯
编号：QN0817
英文名称：Tributyrin
规格：25ml
CAS号：60-01-5

·褪黑素
编号：QN0223
英文名称：Melatonin
规格：1g|25g
褪黑素：科研试剂，广泛应用于分子生物学，药理学等科研方面。本品MT即5-甲氧基-N-乙酰吲哚乙*(代"胺").对睡眠倾向的调节有密切关系，称作生物时相性的生理物质本品能有效地促进生理性睡眠冲动，改善睡眠质量和脑电活动。MT能进入细胞的脂类膜和细胞核，是目最佳的抗自由基剂，长期使用可使体内体表的紫褐斑和某些色素减褪。

别名：N-乙酰-5-甲氧基色胺 松果体素 褪色素 褪黑色素
英文名称：Melatonin
CAS号：73-31-4
分子式：C13H16N2O2
分子量：232.28
储存条件：-15℃
性状：白色或类白色结晶粉末

·SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(POD显色)
编号：QN1229
英文名称：SABC(Rabbit IgG)-POD Kit
规格：100T
本试剂盒适合于一抗为兔IgG的免疫组化实验，DAB显色。

试剂盒组份：
封闭液(5% BSA)——————————10mL
3% H2O2-—————————————10mL
Bio-羊抗兔IgG浓缩液-———————100μL
SABC-POD浓缩液——————————100μL
稀释液——————————————30mL
20×DAB显色液A——————————1mL
20×DAB显色液B——————————1mL

ABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10)，经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin-Biotin Complex，SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物，大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。

操作步骤:(以石蜡切片为例)
1、切片常规脱蜡至水(三次二甲*，三次乙醇)。
2、3% H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性过氧化物酶，蒸馏水洗3次。
3、可选步聚：
a、热修复抗原，将切片浸入0.01M柠檬酸*缓冲液(pH 6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS(pH 7.2-7.6)洗涤1-2次。
b、酶消化，滴加消化液，37℃放置10分钟，PBS(pH7.2-7.4)洗涤2-3次。
c、跳过此步，直接进入下一步。

4、滴加5% BSA封闭液，室温20分钟，甩去多余液体, 免洗。
5、用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周)，也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃ 孵育1小时左右或20℃ 孵育2小时左右，也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。
6、根据用量，用稀释液将Bio-羊抗兔IgG浓缩液按1:50-100稀释成工作液(1mL稀释液加入10-20μL Bio-羊抗小鼠IgG浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。 滴加Bio-羊抗兔IgG工作液， 20-37℃孵育30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟。
7、根据使用量，用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1mL稀释液加入10μL SABC-POD浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-POD工作液，20-37℃孵育30分钟。PBS (pH7.2-7.4)洗涤4次，每次5分钟。
8、DAB显色：根据用量，用PBS(pH7.2-7.4)配制，按1mL PBS加入50μL 20×DAB显色液A，加入50μL 20×DAB显色液B 。充分混匀后滴加到切片上，室温显色，镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9、苏木素轻度复染。脱水，透明，封片。显微镜观察。

对于细胞爬片，固定后，PBS漂洗两次，再用0.5% Triton X-100室温孵育20分钟，PBS漂洗两次，3% H2O2处理15分钟;PBS漂洗两次，接上述第4步。
对于冰冻切片，固定后，PBS漂洗两次，接上述第二步。

注意事项：如果染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前，用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。

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