pUCm-T载体

pUCm-T载体

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  • ¥253
  • 联迈生物
  • LM2006
  • 中国/上海
  • 2025年07月10日
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    上海联迈生物工程有限公司
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    • 英文名：

      pUCm-T Vector

    • 保质期：

      一年

    • 供应商：

      上海联迈生物工程有限公司

    • 保存条件：

      -20℃保存

    • 规格：

      20次

    pUCm-T载体
    产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
    LM2006 pUCm-T载体 20次 253.00元
          pUCm-T载体(pUCm-T Vector)是用于克隆含有A末端PCR产物的理想载体。可以通过蓝白斑筛选有插入片段的重组克隆。
          很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3'端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经线性化的载体，载体每条链的3'端带有一个突出的T。这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中，形成含有目的片段的重组载体。
    pUCm-T载体的主要信息如下:
    Base pairs 2773
    Lac Z promoter 142-171
    M13/pUC Sequencing Primer 204-221
    Lac Z 222-534
    Multiple cloning region 233-376
    M13/pUC Reverse Primer 378-395
    Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region 972-1832
    ColE1 origin of replication(rep) 1987-2606
          pUCm-T载体的图谱如图1：
    https://img1.dxycdn.com/p/s14/2024/0418/112/6357100705932370871.jpg
    图1. pUCm-T载体图谱示意图
          pUCm-T载体的多克隆位点的详细序列如下(请特别注意其中的Pst I不是单酶切位点)：
          Lac Z  
    201 ACACAGGAAA CAGCTATGAC CATGATTACG CCAAGCTTGC ATGCCTGCAG
      TGTGTCCTTT GTCGATACTG GTACTAATGC GGTTCGAACG TACGGACGTC
     
    Xba I Xho I BamH I Bgl II
    		 
    251 GTCGACTCTA GACTCGAGGG ATCCAGATCT CCAGTCTT GA CCTGGTCTGC  
      CAGCTGAGAT CTGAGCTCCC TAGGTCTAGA GGTCAGA TCT GGACCAGACG  
    Pst I Not I Nco I EcoR V Cla I Nde I T7 promoter
    		 
       
    301 AGGCGGCCGC CCATGGGATA TCATCGATCA
    TATGTCGC CC   TATAGTGAGT
    		 
       
      TCCGCCGGCG GGTACCCTAT AGTAGCTAGT
    ATACAGCG GG   ATATCACTCA
    		 
    Kpn I Sac I EcoR I  
    351 CGTATTACGG TACCGAGCTC GAATTCACTG GCCGTCGTTT TACAACGTCG  
      GCATAATGCC ATGGCTCGAG CTTAAGTGAC CGGCAGCAAA ATGTTGCAGC  
          pUCm-T载体中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pUCm-T)包括：
    Afl II Age I Apa I Asc I Avr II Bbs I Bbv II Bcl I
    Blp I BsaA I BseR I Bsg I BsiC I BsiW I Bsm I BsmF I
    Bsp120 I BspM II BsrG I BssH II Bst1107 I BstB I BstE II BstX I
    Bsu36 I Dra III Eco47 III Eco72 I Esp I Fse I Hpa I Mlu I
    Msc I Mun I Nae I NgoM I Nhe I Nru I Nsi I PflM I
    Pme I Pml I PpuM I PspA I Rsr II Sac II Sfi I Sma I
    SnaB I Spe I Spl I Srf I Stu I Xca I Xma I  
          pUCm-T载体中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pUCm-T once)包括：
    HinD III A`AGCT,T 234 Acc65 I G`GTAC,C 360
    BspM I ACCTGC 10/14 239 Asp718 G`GTAC,C 360
    Sph I G,CATG`C 244 Kpn I G,GTAC`C 364
    Sal I G`TCGA,C 252 Ban II G,RGCY`C 370
    Acc I GT`MK,AC 253 Sac I G,AGCT`C 370
    HinC II GTY|RAC 254 Apo I R`AATT,Y 372
    Hind II GTY|RAC 254 EcoR I G`AATT,C 372
    Xba I T`CTAG,A 258 Kas I G`GCGC,C 533
    Ava I C`YCGR,G 264 Nar I GG`CG,CC 534
    PaeR7 I C`TCGA,G 264 Ehe I GGC|GCC 535
    Xho I C`TCGA,G 264 Bbe I G,GCGC`C 537
    BamH I G`GATC,C 270 EcoO109 I RG`GNC,CY 780
    BsaB I GATNN|NNATC 275 Aat II G,ACGT`C 841
    Bgl II A`GATC,T 276 Ssp I AAT|ATT 955
    Xcm I CCANNNN,N`NNNNTGG 289 Xmn I GAANN|NNTTC 1160
    Tth111 I GACN`N,NGTC 293 Bsp1286 I G,DGCH`C 1177
    Not I GC`GGCC,GC 305 Sca I AGT|ACT 1279
    Eag I C`GGCC,G 305 EcoN I CCTNN`N,NNAGG 1399
    Xma III C`GGCC,G 305 Cfr10 I R`CCGG,Y 1675
    Dsa I C`CRYG,G 312 Bsa I GGTCTC 7/11 1694
               
    Nco I C`CATG,G 312 Ahd I GACNN,N`NNGTC 1760
    Sty I C`CWWG,G 312 AlwN I CAG,NNN`CTG 2239
    EcoR V GAT|ATC 320 Afl III A`CRYG,T 2648
    Cla I AT`CG,AT 325 Sap I GCTCTTC 8/11 2765
          pUCm-T载体的全序列信息： LM2006 pUCm-T vector-seq.txt
          pUCm-T载体是在pUC19载体的基础上改造而成，除多克隆位点外，其余序列同pUC19(GenBank Accession Number
    M77789)。
          少量自连的载体转化得到的克隆由于编码了LacZ基因，而在IPTG/X-Gal平板上呈现蓝色。大部分重组的载体，由于插入片段破坏了LacZ基因，因而在IPTG/X-Gal平板上转化得到白色克隆。这样就可以通过蓝白斑非常容易地筛选出重组克隆，蓝白斑筛选结果示意图如图2。
    https://img1.dxycdn.com/p/s14/2024/0418/642/2179319655932370871.jpg      图2. pUCm-T载体的蓝白斑筛选结果示意图。pUCm-T载体和PCR产物片段进行连接，转化后在IPTG/X-Gal平板的上长出的克隆，其中白色克隆代表PCR产物片段可能插入到pUCm-T载体中，但后续还需要酶切、PCR或者测序确认。
          对于重组的质粒可以使用载体多克隆位点上的两个PstI酶切位点进行PstI单酶切鉴定，也可以使用廉价且高效的EcoRI、
    BamHI、XbaI、HindIII等内切酶进行双酶切鉴定。
          构建完成的质粒可以通过质粒上的正反两个M13引物位点进行测序或通过T7 promoter上的T7引物位点进行测序。
          构建完成的质粒可以利用T7 RNA polymerase promoter进行体外转录，用于探针标记等。
          一个包装的本载体共可以进行20次连接反应。
    包装清单：
    产品编号 产品名称 包装
    LM2006 pUCm-T载体 20μl
    — 说明书 1份
    保存条件：
          -20℃保存。
    注意事项：
          本质粒未经联迈生物书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
          DNA聚合酶是否可以在PCR产物3'端加A需参考该DNA聚合酶的说明。对于PCR产物为平端的情况，不适合用于T载体的连接反应。对于平端的PCR产物可以先进行在3'端加A的反应，再用T载体进行克隆。
          进行PCR产物克隆时需自备连接、转化等相关试剂、试剂盒。
          本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
          为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

     

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