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5-bromo-2-deoxyuridine (BrdU)
59-14-3
2年
北京百奥莱博科技有限公司
-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售"),产品线涵盖5-*脱氧尿嘧啶核苷 细胞凋亡与增殖在内的细胞生物学试剂产品,还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称:5-*脱氧尿嘧啶核苷 细胞凋亡与增殖
英文名:5-bromo-2-deoxyuridine (BrdU)
编号:SY0504
规格:100mg
目前常用的细胞增殖标记物有4种,DNA聚合酶α(DNA polymerase α),增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA),Ki-67和5-*脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)。其中Brdu为组织细胞非内源性表达存在,应用相对较广。Brdu,也称为*化去氧尿苷,一种合成的胸苷类似物,在S期可替代胸腺嘧啶核苷选择性结合到细胞DNA中。从而检测细胞DNA合成和标记细胞分裂,凋亡等行为。在遗传研究中Brdu可通过活体注射或细胞培养加载,然后使用抗Brdu的单克隆抗体进行特异性标记,ICC或IHC法染色法显示增殖细胞。另外,还能同时结合其它细胞标记物,双重染色,来判断增殖细胞的种类,增殖速度等,对研究细胞动力学有着重要意义。
CAS:59-14-3
分子式:C9H11BrN2O5
分子量:307.10
外观:白色或类白色粉末
熔点:187~189℃
纯度(Purity, HPLC):≥99%
溶解性:溶于1M *氧化铵(50 mg/ml),水(高达10 mg/ml);溶于DMF,DMSO,水(加热)(50-100 mg/ml)
储存条件:-20℃,有效期2年
结构式
欲咨询购买5-*脱氧尿嘧啶核苷 细胞凋亡与增殖,请致电北京百奥莱博科技有限公司,为您提供最全面周到的产品服务,除此之外,我公司正在促销以下产品:
·重组人IFN-β1b
编号:SY0613
英文名称:Recombinant Human IFN-β1b
规格:2μg
干扰素可分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型干扰素,其中IFN-β属于I型。IFN-β是由淋巴细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞、成骨细胞等类型的细胞分泌的一类蛋白质,主要参与抗病毒感染的固有免疫应答。它有IFN-β1和IFN-β3两种亚型,因IFN-β1可减少复发率,被用于治疗多发性硬化病。
与IFN-β1a的天然状态不同,IFN-β1b存在一个*基酸残基替换(Cys→Ser)。IFN-β1b主要应用为:
①培养骨髓细胞和淋巴细胞用于研究抗病毒应答反应;
②研究对肿瘤细胞生长的影响和对自身免疫的调制;
③研究细胞内IFNⅠ型受体活化介导的信号转导通路等。
来源:Escherichia coli.
分子量:约20.0kDa,非糖基化多肽单链,含166个*基酸
纯度:经SDS-PAGE及HPLC检测,纯度>97%
生物学活性:抗病毒实验检测比活性不低于3.0×107 IU/mg
外观:无菌,白色冻干粉
成分:本品由溶于PBS,pH7.4的浓缩液(含有2% HBS、3%甘露醇)经0.2μm滤膜后冻干所得
内毒素含量:通过LAL方法检测,内毒素含量低于1EU/μg
注意事项
1)本品冻干之前已经0.22µm滤膜过滤,检测结果细菌、真菌和支原体均为阴性。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1)本品低温取出回温至室温,开瓶前先短暂离心以保证冻干粉皆在瓶底。
2)加入无菌ddH2O或缓冲液(含0.1%BSA)溶解,使母液浓度为0.1-1.0mg/ml。母液分装成单次用量,于≤-20℃保存。
【注】:储存液2-8℃保存一周左右。长期保存需储存在-20℃或-70℃,避免反复冻融。
3)使用前,用适当的缓冲液进一步稀释到工作浓度。工作液需现配现用。
储存条件:-20℃,有效期12个月
5-*脱氧尿嘧啶核苷 细胞凋亡与增殖关键词:59-14-3,5-*脱氧尿嘧啶核苷,5-bromo-2-deoxyuridine (BrdU)
·Hoechst 33342 染液(1mg/ml)
编号:SY0563
规格:1ml
Hoechst 33342 是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料,它在嵌入双链 DNA 后释放强烈的蓝色荧光,对细胞的毒性较低。Hoechst 33342 常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。也可以用于普通的细胞核染色,或常规的DNA染色。
分子式:C27H28N6O·3HCl
分子量:561.93
CAS:23491-52-3
纯度:≥95%(HPLC)
储存条件:4℃避光干燥,有效期半年。
结构式
注意事项
1) Hoechst 33342 对人体有一定刺激性,请注意适当防护。
2) 荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽量当天完成检测。
3) 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
4) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
·Alexa Fluor 594标记驴抗小鼠IgG(H+L)
编号:SY0722
英文名称:Alexa Fluor 594 AffiniPure Donkey Anti-Mouse IgG (H+L)
规格:100μl
本品是由Alexa Fluor 594标记的驴抗小鼠IgG(H+L),使用抗原偶联的琼脂糖微珠从驴抗血清内亲和色谱纯化所得。免疫电泳和/或ELISA法检测显示本品特异性结合完整的小鼠IgG分子,也会与其他小鼠免疫球蛋白的轻链结合。本品预先与相近物种包括牛、鸡、山羊、豚鼠、叙利亚仓鼠、马、人、兔和绵羊的血清蛋白经过亲和吸附处理,ELISA和/或固相免疫吸附检测证实本品与以上物种几乎无交叉反应。但可能会与其他物种免疫球蛋白发生交叉反应。本品不会与非免疫球蛋白类的血清蛋白发生交叉反应。
Alexa Fluor 594的光谱性质类似于Texas Red,Amax(最大激发波长)为591nm,Emax(最大发射波长)为614nm。本品适合做多标实验,广泛应用于多种免疫学实验如免疫细胞化学(ICC),流式细胞术(FC)以及免疫组化(IHC)等。
浓度:0.75mg/ml
缓冲液:0.005M 磷酸*,0.125M *化*, pH 7.6
稳定剂:7.5mg/ml BSA(无IgG,蛋白酶),50% 甘油
荧光素:Alexa Fluor 594, Amax=591, Emax=614
防腐剂:0.025% 叠氮化*
推荐稀释比例:1:50~400(适合多数实验)
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期一年。
5-*脱氧尿嘧啶核苷 细胞凋亡与增殖关键词:59-14-3,5-*脱氧尿嘧啶核苷,5-bromo-2-deoxyuridine (BrdU)
·2×PCR Plus Master Mix(不含染料)
编号:SY0029
英文名称:2×PCR Plus Master Mix (No Dye)
规格:5×1ml
PCR Plus Master Mix (No Dye)包含Taq Plus DNA Polymerase,dNTP以及优化的缓冲体系,只需加入引物和模板即可进行扩增,大大简化实验的操作步骤,提高了高通量操作和实验结果的重现性。Mix中不含有*酚蓝染料,其中的保护剂使得Mix 经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。PCR产物的3’端带A,可轻松克隆至T载体。
质量控制
核酸外切酶残留检测:20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸外内酶残留检测:20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时, DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中,以ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。
功能检测:50 μl体系中,以20 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,观察到单一的1 Kb条带。
·His标签蛋白琼脂糖高速纯化树脂
编号:SY0393
英文名称:Ni-NTA Agarose Resin 6FF
规格:10ml
Ni-NTA Agarose Resin 6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质,通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸(NTA)为配体,螯合镍离子(Ni2+)后,形成非常稳定的八面体结构,镍离子处于八面体的中心,这样的结构可保护镍离子免受小分子的进攻,更加稳定,可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。此外,因其基质的耐压性(可耐受最高0.3 MPa的压力),该产品可以用于工业大规模蛋白的纯化,可在相对较高的流速下,实现对目的蛋白的纯化。
基质(Matrix):高度交联的6%琼脂糖凝胶
孔径(Bead size):45-165µm
载量(Capacity):>40mg 6×His-tagged protein/ml 基质
耐压(Tolerance Pressuremax):0.3MPa, 3bar
储存缓冲液:含20%乙醇的1×PBS
储存条件:4℃保存,有效期2年
使用方法
(一)纯化流程
1 缓冲液的准备
缓冲液使用原理:低咪唑上样,高咪唑洗脱,或者高pH上样,低pH洗脱。Buffer 在使用前最好用0.22µm或0.45µm滤膜过滤除菌。可溶性组*酸标签蛋白纯化所需配方详见附表2。包涵体组*酸标签蛋白纯化所需缓冲液及配方详见附表3。
2 样品准备
2.1 细菌表达的蛋白(本说明以细菌表达的蛋白纯化为例)
1)挑取单菌落到含有适合抗性的LB培养基中,根据载体说明加入相应的诱导剂诱导相应的时间。
2)表达结束后,将培养液转至离心瓶,7000rpm,离心15min,收集菌体,然后加入1/10体积的裂解液(Lysis buffer)和PMSF(PMSF在破碎前加入,其终浓度为1mM),同时也可加入其他蛋白酶抑制剂,但不能影响目的蛋白与树脂的结合。
3)之后加入溶菌酶,使其工作浓度为1mg/ml。【注】:如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE,可以不加入溶菌酶。
4)将菌体沉淀悬浮起来(如果菌液浓度高,可考虑加入10µg/ml RNase A和5µg/ml DNase I),混匀,置于冰上超声破碎细胞,至菌液基本保持澄清。
5)收集上述澄清蛋白液至离心管中,10000rpm,4℃离心20-30min。取上清,置于冰上备用或-20℃保存。
2.2 酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达的可溶性蛋白
将细胞培养液转移至离心瓶,5000rpm离心10min,收集上清。如上清中不含EDTA、组*酸和还原剂等,即可直接上柱纯化;如含有EDTA、组*酸和还原剂等物质,则需用1×PBS 4℃下透析后方可上柱。
【注】:对于大量体积的上清,需加入硫*(代"酸")铵进行沉淀浓缩,之后经1×PBS 4℃下透析后上柱。
2.3 包涵体蛋白纯化(以细菌为例)
1)将培养液转移至离心瓶,7000rpm,离心15min,收集菌体去上清。
2)按照菌体:裂解液=1:10(w/v)的比例将菌体充分悬浮,混匀,冰浴超声破碎。
3)将破碎液转移至离心管,10000rpm,4℃离心20-30min,去上清。可重复步骤2)和3)一次。
4)按照菌体:裂解液(含8M尿素)=1:10(w/v)的比例将包涵体充分悬浮。
5)变性条件下纯化His标签蛋白纯化。
3 装柱
1)用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头,确保柱底筛板上无气泡,关闭柱底出口,并在柱底部留出1-2cm的去离子水。
2)将树脂悬浮,小心地将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
3)如果使用储液器,应立即在层析柱和储液器中加满水,将进样分配器放置于浆液表面,连接至泵上,避免在分配器或进样管中产生气泡。
4)打开层析柱底部出口,开启泵,使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱,然后缓慢增加至最终流速,这样可避免液压对所形成柱床的冲击,也可以避免柱床形成的不均匀。如达不到推荐的压力或流速,可以用所用泵的最大流速,这样也可以达到一个较好的装填效果。当柱床高度稳定后,在最后的装柱流速下至少再上3倍柱体积的去离子水。标上柱床高度。【注】:在随后的色谱程序中,不要超过最大装柱流速的75%。
5)关闭泵,关闭层析柱出口。
6)如使用储液器,去除储液器,将分配器置于层析柱中。
7)将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器,锁紧分配器接头。
8)将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中,开始平衡。如需要可重新调整分配器。
4 样品纯化
装柱后,可用各种常规的中压色谱系统,以AKTA使用为例进行说明:
1)将泵管道注满去离子水。去掉产品上塞,连接至色谱系统中,打开下出口,将纯化柱连接到色谱系统中,注意旋紧。
2)3-5倍柱体积去离子水冲洗纯化柱。
3)至少5倍柱体积的Lysis Buffer 平衡色谱柱。1ml规格预装柱推荐流速为1ml/min,5ml预装柱推荐流速为5ml/min。
4)利用泵或注射器上样,收集流出液,以便SDS-PAGE检测蛋白结合情况。【注】:若样品粘度增加,即使上样体积很少也会导致层析柱很大反压;上样量不要超过柱子的结合能力;大量样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。
5)Wash Buffer 平衡柱子,直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少10-15个柱体积)。
【注】:在样品和结合缓冲液中加入低浓度咪唑可以提高样品纯度。
6)Elution Buffer一步法或梯度法进行洗脱。一步法洗脱中一般5倍柱体积洗脱液即可。梯度洗脱可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多来分离不同结合强度的蛋白质。
7)建议用更高浓度咪唑(如500mM)彻底清洗纯化柱上结合的杂蛋白。随后依次用3倍柱体积的Lysis Buffer和5倍柱体积的去离子水清洗树脂。5倍柱体积的20%乙醇平衡树脂,最后将树脂保存在20%乙醇的1×PBS中,置于4℃保存。
5 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。
(二)在位清洗
当填料使用过程中发现反压过高(>0.5Mpa)或者填料上面出现明显的污染时,需对其进行在位清洗(Cleaning-in-Place,CIP)。在位清洗时,先把Ni2+脱掉,清洗结束后,将填料保存在20%乙醇中,后者重新挂Ni后再保存在20%乙醇中。建议按照下面操作去除填料上残留的污染物,如沉淀蛋白、疏水蛋白和脂蛋白等。
1 去除强疏水结合的蛋白,脂蛋白和脂类
使用30%异丙醇清洗5-10个柱体积,接触时间为15-20min可以去除此类污染物。之后再用去离子水清洗10倍柱体积。也可以选择使用含有去污剂的酸性或者碱性溶液清洗填料2倍柱体积。例如含有0.1-0.5%非离子去污剂的0.1M醋酸溶液,接触时间为1-2h。去污剂处理后,需用70%的乙醇清洗5倍柱体积,彻底去除去污剂。最后利用去离子水清洗10倍柱体积。
2 去除离子作用结合的蛋白
使用1.5M NaCl 溶液接触10-15min,之后用去离子水清洗10倍柱体积。
(三)填料再生
当填料使用过程中发现反压过高(>0.5Mpa),填料上面出现明显的污染,或填料载量明显变低时,需要对其进行镍离子剥离及重新挂镍处理,即填料再生。按照下面操作流程进行:
1)使用0.2M 醋酸溶液(含6M GuHCl)清洗2倍柱体积;
2)去离子水清洗5倍柱体积;
3)2%SDS清洗3倍柱体积;
4)去离子水清洗5倍柱体积;
5)乙醇清洗5倍柱体积;
6)去离子水清洗5倍柱体积;
7)100mM EDTA(pH 8.0)清洗5倍柱体积;
8)去离子水清洗5倍柱体积;
9)100mM NiSO4清洗5倍柱体积;
10)去离子水清洗10倍柱体积。
填料再生后,可立即使用,也可保存在20%乙醇中,置于4℃备用。
北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒,更多试剂产品需求,欢迎来电咨询选购5-*脱氧尿嘧啶核苷 细胞凋亡与增殖。
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