SY0327型细胞膜/细胞浆蛋白抽提试剂盒多少钱

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北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖SY0327型细胞膜/细胞浆蛋白抽提试剂盒多少钱在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：细胞膜/细胞浆蛋白抽提试剂盒
产地：国产|进口
英文名：Membrane and Cytosol Protein Extraction Kit
规格：50T
品牌：百奥莱博
编号：SY0327
细胞膜/细胞浆蛋白抽提试剂盒用于快速便捷分离细胞/组织细胞膜和细胞浆蛋白，抽提的膜蛋白不仅包括质膜上的蛋白，也包括线粒体膜、内质网膜以及高尔基体膜等上的膜蛋白。主要工作原理：通过匀浆适度破碎细胞，经低速离心去除细胞核和少数未破碎的细胞产生的沉淀，随后取上清高速离心获得细胞膜沉淀和含有细胞浆蛋白的上清，然后通过优化的膜蛋白抽提试剂从沉淀中抽提获取膜蛋白。整个过程仅需约90min即可完成，抽提得到的蛋白可以用于SDS-PAGE，Western、酶活性测定等后续实验。

膜蛋白抽提试剂中含有蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂和EDTA等，后续不适合用于蛋白酶、磷酸酯酶等受这些抑制剂影响的酶的活性测定，但抽提获得的膜蛋白或细胞浆蛋白适合用于检测蛋白的磷酸化水平。

按照说明书步骤的用量（细胞2-5×107个；组织约100mg），SY0327可分别进行50个样品的抽提，具体用量可根据不同的样品体积进行调整。

试剂盒组份：
试剂A：50ml
试剂B：15ml

储存条件：-20℃，有效期一年。

注意事项
1）客户需自备PMSF，PMSF需现配现用，建议在抽提试剂加入到样品前2-3min加入，以防失效。
2）利用本试剂盒抽提到的细胞膜/细胞浆蛋白可直接用BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)（Yeasen Cat#20201）测定其浓度，但不适合用Bradford法测定。
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法
室温融解并混匀试剂A和B，融解后立即置于冰上。取适量的试剂A和B备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使其最终浓度为1mM。

1 样品准备
1）细胞样品
① 细胞收集
贴壁细胞：培养细胞约2-5×107个，PBS清洗一遍，用细胞刮子刮下细胞或用含有EDTA但不含胰酶的细胞消化液处理细胞，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。
【注】：尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的膜蛋白。
悬浮细胞：培养细胞约2-5×107个，离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。
② 细胞清洗
用适量冰浴预冷的PBS轻轻重悬细胞沉淀，取少量细胞用于计数，剩余细胞4℃，600g离心5min沉淀细胞。弃上清，随后4℃，600g离心1min，以沉淀离心管管壁上的残留液体并进一步沉淀细胞，尽最大努力吸尽残留液体。
③ 细胞预处理：把1ml试剂A(含PMSF)加入至上述细胞中，轻轻并充分悬浮细胞，冰浴放置10-15min。
2）组织样品
取约100mg组织，用剪刀尽量小心剪切成细小的组织碎片。加入1ml试剂A(含PMSF)，轻轻悬浮组织碎片，冰浴放置10-15min。【注】：如果组织样品比较少，也可以使用更少的组织量，例如30-50mg，后续试剂的用量及操作步骤不变；组织用量较少时，最后获得的膜蛋白也较少。

2 样品的破碎及破碎效果的鉴定
① 样品匀浆：把细胞悬液或组织样品转移到一适当大小的冰浴预冷玻璃匀浆器中，匀浆约30-50下。【匀浆效果与细胞类型和组织类型相关，不同细胞或组织所需的匀浆次数有所不同，需自行优化。】
② 通常在匀浆30次后取约2-3µl匀浆液滴在盖玻片上并在显微镜下观察，如见细胞核周晕环(A shiny ring around the nuclei)或完整的细胞形态，说明细胞仍完整。如果有70-80%的细胞均无核周晕环和完整细胞形态，说明细胞已经充分破碎，则进行下一步实验。否则，重新匀浆10-30次直到细胞至少70%已经破碎。同时记录对于该细胞的匀浆次数，通常在后续实验时不必再摸索匀浆次数。另外需注意特定的匀浆次数和匀浆器也有关，需同时注意记录使用的是哪一个匀浆器。
【注】：如果没有适当的玻璃匀浆器，对于培养的细胞也可以采用反复冻融法来破碎细胞。把样品在液氮和室温依次反复冻融两次，然后取少量样品在显微镜下检测细胞破碎的程度。如果细胞破碎的程度不足70%，可增加冻融次数，直到细胞破碎的程度大于70%。

3 去除细胞核和未破碎的细胞
在4℃，700g离心10min，小心收集上清液至一新的离心管中。【注】：吸取上清时切勿接触沉淀！可以有约30-50µl上清液残留不予吸取，以保证吸取的上清液有较高的纯度。

4 沉淀细胞膜碎片
在4℃，14000g离心30min，以沉淀细胞膜碎片。

5 收集细胞浆蛋白
吸取上清至1新的离心管中，即为细胞浆蛋白，可-70℃保存备用。吸取上清时可以有30-50µl上清残留，以避免接触沉淀导致上清样品被污染。

6 抽提膜蛋白

4℃，14000g离心10sec，尽最大努力吸尽上清。可以轻轻触碰到沉淀，甚至吸走很少量的沉淀。加入试剂B 200µl(如有必要，也可加大到300µl)，最高速剧烈Vortex 5sec重悬沉淀，冰浴5-10min。重复前述步骤的vortex和冰浴孵育1-2次，以充分抽提膜蛋白。随后，4℃，14000g离心5min，收集上清即为细胞膜蛋白溶液。可-70℃保存备用。对于一些有特殊用途的膜蛋白，可自行配制适当的膜蛋白抽提试剂进行膜蛋白抽提。
关键词：SY0327,细胞膜/细胞浆蛋白抽提试剂盒,Membrane and Cytosol Protein Extraction Kit


除SY0327型细胞膜/细胞浆蛋白抽提试剂盒多少钱外，我公司正在打折促销以下产品：

 

编号	名称
SY0374	12%预制胶，12孔
SY0430	X-press Tag多肽
SY0344	30%丙*(代"烯")酰胺/甲叉双丙*(代"烯")酰胺，37.5:1
SY0115	pGMLR-TK海肾荧光素酶报告基因质粒
SY0052	腺苷三磷酸溶液(100 mM)(ATP)
SY0416	36mm透析袋(透析分子量14kDa)
SY0111	AAT-promoter-Luc荧光素酶报告基因质粒
SY0369	大肠杆菌表达重组肠激酶(不带标签)
SY0135	NRSF-Luc荧光素酶报告基因质粒
SY0029	2×PCR Plus Master Mix(不含染料)
SY0574	线粒体深红色荧光探针(Deep Red FM)
SY0485	CCCP(50mM) 细胞凋亡诱导剂
SY0106	ARE-Luc荧光素酶报告基因质粒
SY0035	热启动PCR Master Mix(不含染料)
SY0428	T7 Tag多肽
SY0163	PPARγ-GFP报告基因质粒
SY0107	PU.1-Luc荧光素酶报告基因质粒
SY0077	IRF1-Luc荧光素酶报告基因质粒
SY0009	10×STE Buffer(无菌)
SY0269	总RNA提取试剂(同Trizol)
SY0713	Alexa Fluor 594标记兔抗山羊IgG(H+L)
SY0553	细胞膜可渗透*离子荧光探针
SY0477	TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Alexa Fluor 647)
SY0058	萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒
SY0411	27mm透析袋(透析分子量3.5kDa)
SY0457	牛脱铁转铁蛋白
SY0096	Oct4-Luc荧光素酶报告基因质粒
SY0654	HRP标记小鼠抗HA-Tag单克隆抗体
SY0112	STAT5-Luc荧光素酶报告基因质粒
SY0231	SRE-GFP报告基因质粒
SY0193	GAL4-GFP报告基因质粒
SY0272	固相RNase清除剂(含喷雾瓶)
SY0244	红色核酸染料(10000×)(同DuRed、GelRed)
SY0486	体内巨噬细胞清除剂(中性**松)
SY0567	iFluor 488标记鬼笔环肽(绿色)
SY0268	冰冻动植物组织RNA稳定-过渡溶液
SY0693	Alexa Fluor 680标记山羊抗小鼠IgG(H+L)
SY0483	依托泊甙溶液(100mM)
SY0774	柠檬酸*-EDTA抗原修复液(40×)
SY0040	PCR增强剂
SY0158	SP1-GFP报告基因质粒