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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
744
- 英文名:
Biotin-labeled C/EBP Probe For EMSA
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
C/EBP consensus oligo的序列如下:
5"-TGC AGA TTG CGC AAT CTG CA-3"
3"-ACG TCT AAC GCG TTA GAC GT-5"
本生物素标记EMSA探针已经过纯化,可以直接用于EMSA结合反应。本生物素标记EMSA探针可以和百奥莱博的化学发光法EMSA试剂盒(YT190)配套使用。
注意事项:
1. 避免加热到40℃以上,温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
2. 对于基于生物素标记的EMSA检测的详细操作可以参考百奥莱博的化学发光法EMSA试剂盒(YT190)的使用说明。
储存条件:-20℃,有效期一年。
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文献和实验,可以合成核酸后自行添加,部分已知蛋白有商业化的抗体也可以直接购买。现在大多数实验室已经不再使用放射性标记,生物素使用相对较多。2、形成蛋白-探针复合物(1)在0.5ml离心管中按顺序将下列组份混匀:蛋白样本(2-5μg)Xμlpoly d(I-C)1μlBinding Buffer2μlNuclease-Free ddH2OXμl总体积9μl(2)冰浴5min后,加入1μ探针。(对照组加1ul对照探针)(3)PCR仪中室温(20-23℃)温育30min。3、制备凝胶,电泳(1)制备6.5%非变性聚丙
Shift Assay ) 凝胶迁移实验是一种研究DNA与蛋白质或RNA与蛋白质相互作用的常用技术。这项技术是基于DNA/蛋白质或RNA/蛋白质复合体在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)中有不同迁移率的原理。当核转录因子与一条人工合成的特异的DNA或RNA结合后,其在PAGE中的迁移率将小于未结合核蛋白转录因子的DNA,从而检测到活化的与DNA或RNA结合的蛋白转录或调节因子。 发展: 从发展史来看,这项实验技术起初是用32P同位素标记人工合成的寡核苷酸形成探针,但是由于同位素的放射
。 (3)探针制备 根据实验要求设计不同的探针并添加标记,可以合成核酸后自行添加,部分已知蛋白有商业化的抗体也可以直接购买。现在大多数实验室已经不再使用放射性标记,生物素使用相对较多。 2、形成蛋白-探针复合物 (1)在0.5ml离心管中按顺序将下列组份混匀: 蛋白样本(2-5μg) Xμl poly d(I-C) 1μl Binding
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