Mn-SOD和Cu/Zn-SOD活性检测试剂盒(WST-8法

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")Mn-SOD和Cu/Zn-SOD活性检测试剂盒(WST-8法)厂家，我公司供应的细胞生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：Mn-SOD和Cu/Zn-SOD活性检测试剂盒(WST-8法)厂家
规格：100次
产地：国产|进口
编号：YT310
英文名：Cu/Zn-SOD and Mn-SOD Assay Kit with WST-8
本试剂盒是一种基于WST-8的显色反应，通过比色来检测细胞、组织或其它样品中Cu/Zn-SOD、Mn-SOD或总SOD活性的试剂盒。本试剂盒可以检测细胞或组织匀浆液上清、全血、红细胞抽提物、血清等生物样品中的SOD活性。一个试剂盒共可以进行100次检测。

试剂盒组分：
SOD检测缓冲液———————70ml
WST-8———————————800μl
酶溶液———————————100μl
反应启动液(40X)——————60μl
Cu/Zn-SOD抑制剂A——————500μl
Cu/Zn-SOD抑制剂B——————500μl

超氧化物岐化酶能催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成过氧化*(H2O2)和氧气(O2)，是生物体内一种重要的抗氧化酶。

目前有多种SOD活性测定法，其中NBT(氮蓝四唑)法由于使用方便而被广泛使用。但NBT法产生的甲臜染料水溶性差，易和被还原的黄嘌呤氧化酶相互作用，抑制百分率达不到100%等，从而使检测的灵敏度和精确度受到影响；细胞色素C法也是一种常用来检测SOD活性的方法，但细胞色素C其氧化活性高，易受样品中的还原剂干扰，另外该方法需要连续测定吸光度值，对于SOD的检测灵敏度比较低，并且不太适合大批量样本的检测。

目前测定SOD比较先进的方法包括WST-1法和WST-8法，其中WST-8法比WST-1法更加稳定、灵敏度更高。本试剂盒采用了目前测定SOD方法中稳定性更好、灵敏度更高的的WST-8法。WST-8法的原理参考下图，WST-8可以和黄嘌呤氧化酶催化产生的超氧化物阴离子反应产生水溶性的甲臜染料(formazan dye)，该反应步骤可以被SOD所抑制。通过对WST-8产物的比色分析即可计算SOD的酶活力。


基于黄嘌呤氧化酶藕联反应体系和WST-8的SOD酶活力检测原理图。XO：xanthine oxidase。

WST-8的反应产物是稳定的水溶性产物，可以通过单个时间点的吸光度检测来测定SOD活力，适合高通量筛选研究。同时WST-8法测定SOD酶活力时，最大抑制百分率可以接近100%，并且可以不受一些常见的干扰因素的干扰，使检测效果比其它的一些常见方法显著改善。

本试剂盒的检测不受样品中过氧化*的干扰。很多细胞和组织样品中含有内源性的过氧化*，会干扰SOD的检测。本试剂盒通过添加适量过氧化*酶等特殊方法，能有效去除常规样品中过氧化*的干扰。例如，对于SOD标准品的检测，标准品中添加高达0.1mM的过氧化*时，对于检测结果仍无显著影响。

哺乳动物编码3种SOD。在大部分组织中，含量最高的是定位在细胞浆中的Cu/Zn-SOD。Mn-SOD主要表达在线粒体中，并且Mn-SOD是可以被诱导表达的。Mn-SOD在某些情况下也可以定位在细胞浆中。有些组织或体液中会含有第三种SOD，extracellular SOD，简称EC-SOD。EC-SOD也是一种Cu/Zn-SOD，和编码细胞浆Cu/Zn-SOD的基因相似性很高，但有所不同。综上所述，细胞或组织内共有两类SOD，即铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)和锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)。这两种SOD酶活性的总量就是总SOD的酶活性。当用Cu/Zn-SOD的抑制剂抑制其酶活性时测定得到的就是Mn-SOD的酶活性。如果此时同时测定总的SOD酶活性，就可以计算出Cu/Zn-SOD的酶活性。

KCN或NaCN可抑制CuZn-SOD酶活性，也被大量用于测定Mn-SOD的酶活性。 但KCN或NaCN都具有剧毒，并且对Cu/Zn-SOD的抑制百分比达不到很接近100%。

本试剂盒采用了一种无毒的两步双重抑制Cu/Zn-SOD的方法，在避免使用有毒药品的情况下同时确保了对于Cu/Zn-SOD的抑制百分比达到高度接近100%，即对于Cu/Zn-SOD的抑制效果显著优于KCN或NaCN。使对于Cu/Zn-SOD或Mn-SOD酶活力的测定更加安全和准确。

注意事项：
1. 待测样品-70℃可保存1个月。需注意反复冻融会导致SOD部分失活。
2. 细胞或组织等样品制备时不能采用含有Triton X-100等去垢剂的溶液，否则会干扰本试剂盒的检测。
3. 抗氧化物会对本试剂盒的检测产生干扰，例如0.1mM ascorbic acid，5mM GSH都会使测定出来的吸光度显著升高。此时尽管样品没有颜色，如果设置了使用说明中的空白对照3，就可以消除样品中的抗氧化物的干扰。
4. Cu/Zn-SOD抑制剂A对人体有刺激性，使用时请注意适当防护。

储存条件：-20℃，有效期6个月。

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·绿色核酸染料(RNA染料)(DNA染料)
编号：YT016
英文名称：Nucleic Acid Green(2000X)
规格：1ml|5ml
本核酸绿色染料是*化乙锭(EB)的升级替代产品，用于凝胶中DNA、RNA等核酸的染色。本品核酸绿染料具有安全(未检测到致突变性和细胞毒性)、灵敏度高、稳定性好等优点，凝胶中的核酸在使用本产品后经约500nm波长蓝光(也可以使用约260nm紫外光)激发呈现绿色荧光，适用于原先使用SYBR Green或SYBR Gold为核酸染料的凝胶成像和检测系统。

由于本品核酸绿染料在500nm左右处有最大的激发波长，可以使用对人体无害的蓝光灯或蓝光成像仪进行核酸检测，从而避免常规的紫外检测对核酸样品的致突变性，以及紫外对人的眼睛和皮肤的伤害。特别在切胶回收时，使用本品核酸绿染料并用蓝光灯具有很大的优势，不仅可以避免核酸样品的突变，也可以避免紫外光对人体的伤害。

本品核酸绿染料比EB或SYBR Green更安全。本品核酸绿染料在远高于其工作浓度范围时均没有细胞毒性及诱变性。艾姆斯氏试验(Ames test)结果表明，即使在S9代谢活化时，也没有检测到致突变性。本品核酸绿染料和百奥莱博另外一种安全型核酸染料核酸红色染料(YT015)，由于它们特殊的化学结构使其难以进入细胞，从而大大降低甚至避免了染料的致突变性和细胞毒性。艾姆斯氏试验结果表明，本品核酸绿染料比核酸红色染料(YT015)更安全，即便在S9代谢活化时，当本品核酸绿染料浓度高达约20微克/毫升时，也没有检测到致突变性。而SYBR Green染料可以穿透细胞膜，进入活细胞并染色DNA。并且有报道SYBR Green可以强烈增强紫外线诱导的基因突变。

本品核酸绿染料检测灵敏度高，对于小分子量核酸的染色效果好。本品核酸绿染料的检测灵敏度比EB高8-10倍，在检测低浓度、微量DNA或RNA方面比EB更佳，尤其对小分子量的DNA检测非常灵敏。在使用浸泡染色法时，本品核酸绿染料和SYBR Gold的灵敏度相近甚至更高；与SYBR Gold不同的是，本品核酸绿染料预先配制在凝胶中也有很高的灵敏度。EB对于小分子量核酸染色效果差，而本品核酸绿染料对于小分子量核酸的染色效果很好，便于观察酶切或PCR获得的小分子量核酸片段。本说明书推荐使用的本品核酸绿染料浓度，其检测效果略优于EB。如果希望获得更高的染色灵敏度，可以适当提高本品核酸绿染料的工作浓度。

本品核酸绿染料的稳定性好，染色重复性高。含SYBR Green的凝胶核酸染色的重复性比较差，这通常是由于SYBR系列染料的稳定性差导致的。而本品核酸绿染料的稳定性很好，可以室温长时间保存及使用微波炉加热。本品核酸绿染料的光稳定性良好，可以在室内正常光线下操作而无需避光。由于其热稳定性和光稳定性，含本品核酸绿染料的凝胶在核酸染色时的重复性非常好。

本品核酸绿染料可以使用和SYBR Green或EB相同的检测体系。本品核酸绿染料具有和SYBR Green或SYBR Gold几乎相同的光学性质，两者的激发光和发射光都非常接近，这样可以直接用本品核酸绿染料替换SYBR Green，以使用SYBR Green的凝胶观察、拍照或成像系统(约500nm激发)。对于原来用于EB染料观察的系统，可以考虑选用百奥莱博的核酸红色染料(YT015)染料来替代EB，但也可以使用没有致突变性的本品核酸绿染料来替代EB。使用本品核酸绿染料来替代EB，并且用EB的紫外检测体系时，检测灵敏度会比使用核酸红色染料(YT015)低约4-5倍。对于既可以观察EB也可以观察SYBR Green的具有紫外和蓝光两种激发光的凝胶成像系统，则推荐直接用本品核酸绿染料来替换EB。本品核酸绿染料的激发光谱和发射光谱请参考下图。


本品核酸红染料的激发光谱和发射光谱

本品核酸绿染料的使用方法和EB一致。本品核酸绿染料可以按适当比例直接加入琼脂糖中配制成凝胶，也可以在电泳完毕后对凝胶进行染色。前者更加方便，而后者灵敏度要更加高一些。但由于本品核酸绿染料本身已经非常灵敏，通常采用把本品核酸绿染料直接配制在凝胶中就可以了。对于一些特殊的情况，如核酸样品量特别少的情况等，则可以考虑电泳后再对凝胶进行染色。本品核酸绿染料对于核酸的迁移率影响非常小，小于SYBR Green对于核酸迁移率的影响。

通过凝胶回收试剂盒(YT010)或酚*仿抽提，可以有效去除与DNA或RNA结合的本品核酸绿染料，从而确保不会影响后续的连接、酶切、PCR、测序等常规的分子生物学用途。

储存条件：室温，避光，有效期一年。

注意事项:
1. 使用蓝光灯来检测本品核酸绿染料染色的核酸胶时，需要注意避免使用一些实为紫外灯的假冒伪劣的蓝光灯，以减少紫外线对于核酸样品和人体的伤害。比较简单的判断方法是，对于EB或核酸红色染料(YT015)染色的核酸胶，蓝光灯照射后是不会出现荧光条带的，而仅对于本品核酸绿染料染色的核酸胶，蓝光灯照射后才会出现荧光条带。如果对于EB或核酸红色染料(YT015)染色的核酸胶照射后也能观察到荧光条带，则说明使用的蓝光灯实际为紫外灯。
2. 本品核酸绿染料和EB一样作为荧光染料均需避光保存，但在使用过程中的常规室内光照不会影响其使用效果。
3. 制备好的本品核酸绿染料琼脂糖凝胶，在4oC避光条件下通常可以保存3-5天。
4. 本品核酸绿染料琼脂糖凝胶再次熔化使用时，为取得更好的观察效果，需要添加适量本品核酸绿染料。
5. 电泳之后的凝胶不建议重复使用。
6. 电泳后再使用本品核酸绿染料染色的凝胶一般不需要脱色，如果发现背景太高，可以使用不含核酸酶的水进行脱色处理。
7. 本品核酸绿染料和核酸红色染料(YT015)除了可以染色双链DNA外，也可染色单链DNA和RNA。核酸红色染料(YT015)对单链核酸的染色灵敏度约为对双链DNA染色灵敏度的一半。核酸红色染料(YT015)对单链核酸的染色灵敏度约为本品核酸绿染料的5倍。
8. 如果使用聚丙*(代"烯")酰胺凝胶，请使用浸泡染色法染胶，并延长染色时间至30分钟-1小时。
9. 如果观察到条带弥散或者分离不理想，建议使用浸泡染色法染色以确认是否与染料有关。如果浸泡染色法染色后仍然出现类似的问题，说明与染料无关，请尝试以下方法：使用新鲜配制的电泳缓冲液、降低核酸的上样量、降低染料的浓度、降低琼脂糖浓度、选用更长的凝胶、降低电泳电压一倍以上并延长凝胶电泳时间以改善电泳效果、使用更薄的梳齿等。
10. 本产品兼容常用的电泳缓冲液，例如TAE和TBE。
11. 本品核酸绿染料适用于约500nm或260nm激发的成像系统，如果使用普通的适用于核酸红色染料(YT015)或EB的紫外灯或成像系统(约300nm激发)，也能较好地观察到荧光，但强度会略弱一些。


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·HDAC4抗体
编号：YT793
英文名称：anti-HDAC4 antibody
规格：>20次
本抗体是用经过适当修饰的人工合成的人HDAC4*基端一段多肽(aa 1-19)作为抗原制备而成的抗HDAC4小鼠单克隆抗体。本抗体如果用于常规的Western检测，至少可以检测20次。

本HDAC4抗体识别的是总HDAC4(total HDAC4)，可以检测内源性的HDAC4，未发现和其它HDAC蛋白有交叉反应。

染色质由重复的核小体(necliosome)构成，而核小体则包含了由Histone H2A，H2B，H3和H4各两个分子组成的八聚体和与该八聚体结合的DNA。组蛋白(histone)上的一些Lys位点，可以被乙酰化修饰，从而影响染色质的空间结构，最终影响该区域的基因转录调控。通常当组蛋白被乙酰化时，染色质处于相对松散的构象，此时转录因子可以结合到该区域促进相关基因的转录。反之，当组蛋白被去乙酰化时，染色质结构会变得相对致密，该区域相关基因的转录就会被抑制。组蛋白可以被多种乙酰化酶乙酰化，包括PCAF，p300/CBP，GCN5，SRC-1，TAFII250，BRCA-2和Patt1等。组蛋白去乙酰化酶包括HDAC(histone deacetylase)家族和Sirtuin家族(Sirt家族)。HDAC家族包括HDAC1，HDAC2，HDAC3，HDAC4，HDAC5，HDAC6，HDAC7，HDAC8，HDAC9，HDAC10和HDAC11。通常HDAC可以去乙酰化染色质中某些特定区域的组蛋白，导致该区域的染色质结构变得相对紧密，从而抑制该区域相关基因的表达。Class I HDAC包括HDAC1，2，3，8；Class II HDAC包括HDAC4，5，6，7，9，10。Sirtuin家族被称为Class III HDAC。Class IV HDAC只包括HDAC11。HDAC1，2，8主要定位在细胞核；而HDAC3则在细胞核和细胞浆都有分布，并且分布在膜结构上。Class II HDAC在特定条件下可以在细胞核和细胞浆之间穿梭(shuttle in and out)。HDAC在命名时被称为组蛋白去乙酰化酶，但事实上它们可以去乙酰化多种多样的蛋白。例如，HDAC6可以和微管(microtuble)结合，可以去乙酰化tubulin，Hsp90和cortactin等。目前发现大量的蛋白可以被乙酰化修饰，因此HDAC等乙酰化修饰酶被认为在基因转录调控、信号转导、生长发育、分化凋亡、代谢性疾病和肿瘤等多种生理病理过程中发挥重要作用。HDAC的抑制剂目前被认为是很有前景的肿瘤治疗药物。

HDAC4有其自身的核定位信号(nuclear localization signal,NLS)和出核信号(nuclear export signal,NES)。HDAC4可以和14-3-3或MEF2相互作用，从而定位到细胞核中发挥作用。HDAC4在TGF信号通路中也有一定作用。HDAC4可以调控骨骼和肌肉的发育。另外，维持适当的HDAC4蛋白水平和保持良好的视力有密切关系。

产品组份：
HDAC4抗体————20μl
Western一抗稀释液————20ml

抗体参数：

免疫原物种：人
免疫原：经过适当修饰的人工合成的人HDAC4*基端一段多肽(aa 1-19)
克隆性：单克隆
宿主：小鼠
用途：WB,IP,IC, ELISA
交叉反应性：人，小鼠，大鼠
同种型：IgG2a
HDAC4分子量：～140kD
推荐稀释比例：WB(1:1000),IP(1:100),IC(1:200),ELISA(1:5000)


注意事项：
1. 在Western实验后，请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，4℃保存。
2. 回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。

储存条件：-20℃，有效期一年。

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