dGTP溶液(2.5mM)哪里卖

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名称：dGTP溶液(2.5mM)哪里卖
规格：2mL
品牌：百奥莱博
英文名：dGTP Solution(2.5mM)
编号：BTN130914
dGTP分子式为C10H13N5O13P3Na3,分子量是507.2，消光系数为13.7×103 M-1×cm-1(pH7.0)。λmax为253nm。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

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·柱式葡萄球菌RNA提取试剂盒
编号：BTN130844
英文名称：Staphylococcus RNA Column extraction kit
规格：50次

·端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)
编号：BTN111009
英文名称：Telomeric Repeat Amplification Protocol Kit
规格：50次
本品是我司在经典TRAP技术基础上改良而得，专门用于快速测定人类细胞端粒酶的相对活性(需要跟对照样品比较)。端粒酶存在于85-90%的肿瘤组织中，因此通过检测端粒酶活性就能早期诊断大多数肿瘤。目前最常用的检测端粒酶活性的方法就是TRAP，它利用端粒酶能在外加的TS模板DNA的末端添加不同数量的TTAGGG序列这一特点，通过PCR检测延伸产物而高效检测端粒酶活性。原理如下：


产品特点：
1．一站式，提供从细胞裂解到PCR的所有试剂，但不含PAGE和银染试剂。
2．一管式操作，端粒酶延伸和PCR在同一体系中完成，方便快捷。
3．提供改良的、长为150bp的内参和含8个端粒序列的合成端粒，可有效排除PCR假阴性。内参长度远大于TRAP产物，不会干扰结果分析。
4．改良的TS模板和PCR引物，极大降低了引物二聚体的形成。
5．既可用于培养细胞，也可用于实体组织。
6．灵敏度高，最低可以检测到10个肿瘤细胞中的端粒酶活性。

试剂盒组成：

 

成分	规格
TRAP细胞裂解液	10mL
PCR Mix 3.0	1.5mL
合成端粒(PC)	50μL
TS-引物混合物(含内参)	300μL
超纯水	1mL
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、端粒酶的提取
注意：端粒酶是蛋白质和RNA组成的复合体，RNA极容易被降解，因此，提取端粒酶应该跟提取RNA一样，尽量在低温条件下快速操作，并且必须使用RNase-free的耗材，桌面最好用固相RNase清除剂清洁(BTN3090)清洁。
1．对冷冻的实体组织：将50-100mg冷冻组织在液氮中用预冷的研磨器研磨成粉末，再转移到预冷的玻璃匀浆器中，加入200μl预冷的TRAP细胞裂解液，温和手动匀浆数次后冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次，然后直接进入第3步操作。为保证裂解效果，可在显微镜下观察。如果组织样品不足50-100mg，可以按比例降低TRAP细胞裂解液的用量。
2．对新鲜的培养细胞和组织：用自备的预冷PBS洗涤105-106个经过胰酶处理的细胞或50-100mg新鲜组织，3000g 4℃离心5分钟，弃上清；加入200μL预冷的TRAP细胞裂解液悬浮细胞或组织。对细胞：涡旋振荡10秒后置冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次。对组织：在冰上用玻璃匀浆器轻柔匀浆后冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次。如果细胞不足1×106或50-100mg，可按比例降低TRAP裂解液的用量。
3．12000-14000g 4℃离心20分钟。
4．收集160μL上清，先取部分用于测定蛋白质浓度，可通过测定215nm和225nm的光吸收得到，计算公式是蛋白质浓度(μg/μL)=0.144×(A215-A225)×稀释倍数，也可使用BCA法测定蛋白浓度。本试剂盒制备的细胞裂解物的蛋白浓度一般在10-750 ng/μL。知道各样品的蛋白浓度后，可用TRAP细胞裂解液将各样品的蛋白浓度调成一样便于比较，然后按10μL/管分装得到至少15管裂解物，放-80℃冷冻保存(可存放一年)。每个样品可取一管进行热灭活(95℃处理10分钟)后再放-80℃冷冻保存，此管将作为该样品的阴性对照。

二、TRAP反应
5．确定每个TRAP反应的细胞裂解物用量：为便于分析比较，每个TRAP反应所用的蛋白量(或细胞数)必须一样。由于细胞裂解物中一般都有高浓度的不明Taq DNA聚合酶抑制物(TRAP失败最常见的原因)，因此最佳结果往往是用稀释10-1000倍后的细胞裂解物得到。建议用一个样品稀释不同浓度做TRAP预实验。
6．在PCR管中按下表设置TRAP反应(50μL反应体系，以A和B两个样品为例)：

成份	A样品管	A阴性 对照管	B样品管	B阴性 对照管	实验 阴性对照	实验 阳性对照
A样品	2μl	-	-	-	-	-
A阴性对照	-	2μl	-	-	-	-
B样品	-	-	2μl	-	-	-
B阴性对照	-	-	-	2μl	-	-
TRAP细胞裂解液	-	-	-	-	2μl	-
合成端粒	-	-	-	-	-	2μl
TS引物混合物	6μl	6μl	6μl	6μl	6μl	6μl
PCR Mix	25μl	25μl	25μl	25μl	25μl	25μl
超纯水	17μl	17μl	17μl	17μl	17μl	17μl

 注：为避免污染，最好等其他样品加完并盖上盖后再加合成端粒。
7．吹打混匀后进行PCR扩增，扩增条件(仅供参考，用户可优化)如下：

步骤	温度	时间
端粒酶延伸	30℃	30min
端粒酶灭活	95℃	5min
PCR(循环35次)	94℃	30s
	55℃	60s
	72℃	30s

三、PAGE-银染检测及结果解读(本试剂盒不含PAGE-银染检测试剂盒)
8．取5μL PCR反应液进行10%非变性PAGE电泳-银染显色实验(需另购本公司PAGE电泳套装和银染试剂盒)。如果背景高(主要是由反应体系中的蛋白成分引起)，可以先进行PCR产物纯化再进行PAGE电泳和银染。
9．跟预期结果(见下表)比较。如果结果跟下表不一致，则需要按具体情况分析原因。

现象	样品管结果	样品阴性 对照结果	实验阴性 对照结果	实验阳性 对照结果
典型TRAP条带 (条带数不限)	有则有端粒酶活性 无则无端粒酶活性	不出现	不出现	不出现
阳性对照的TRAP 条带(仅8条带)	不出现	不出现	不出现	出现
150bp内参	可出现可不出现	出现	出现	出现

 注：本试剂盒所用引物产生的典型TRAP条带最小条带为59bp。

疑难解答：
1．如果样品管有内参带，但没有TRAP条带，可能是端粒酶活性低或者失活。制备细胞裂解物时可在TRAP细胞裂解液中加入1/100体积的RNase抑制剂以抑制RNase活性，并在端粒延伸反应后增加DNA纯化一步，纯化后的DNA再用于PCR。此两步法TRAP需要用户自备DNA纯化试剂和dNTP。
2．如果样品对照管(端粒酶已经灭活)出现TRAP条带，可能是TRAP产物污染，需要使用洁净的PCR管和PCR试管架。样品制备、PCR设置和电泳需在不同房间进行。也可能是端粒酶没有彻底灭活，建议用RNase酶解法或酶解+热灭活法。
3．实验阴性对照管的实验结果中出现TRAP条带，可能是引物二聚体，可采取两步法TRAP，并且将DNA模板加入到70℃预热的PCR Mix3.0中再进行PCR。
4．实验结果不好时，可以直接采取2步法，先做端粒酶延伸和灭活，然后再纯化DNA，用纯化的DNA做PCR。此法需要用户自备dNTP。


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·K562 DNA
编号：BTN131035
英文名称：Human Culture Cell Genomic DNA
规格：30μg
K562 DNA是从人慢性粒细胞白血病细胞系继代培养的细胞中纯化得到的，作为一个对照用于单位点探针分析方法中的多数步骤。该DNA 也可作为参照用于适当的酶切消化后可变数目串联重复序列(VNTR)等位基因片段大小的确定。由于实验室在操作方案和分析方法上的不同，得到的K562片段大小可能会有细微差别，本产品浓度为0.4–1.0μg/μL。

储存条件：低温运输、4℃保存、避免反复冻融，有效期一年。

·福林酚试剂
编号：BTN100939
英文名称：Folin Phenol Reagent
规格：100mL
福林酚试剂又叫Folin-Ciocalteau酚试剂，其本身并不含酚，而是磷钼酸和磷钨酸混合物，它是由美国科学家Folin和Ciocalteau在1929年发明，主要用于检测含酚成分。后被Lowry用于蛋白定量，现主要作为Lowry蛋白定量法的成分使用。
注：福林酚试剂跟福林试剂不同，后者是1,2-*醌-4-磺酸*。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

·热敏磷酸酶
编号：BTN130655
英文名称：Antarctic Phosphatase
规格：500U
本产品是从南极微生物中克隆并在大肠杆菌中表达的热敏磷酸酶，它能催化除去DNA或RNA末端的5´磷酸基团。由于磷酸酶处理后的DNA片段缺少连接酶所要求的5´磷酸末端，因此它们不能进行自连接。这个特性可以在克隆时降低载体DNA的背景。

产品特点：
1．除去DNA、RNA、rNTPs和dNTPs 5´末端的磷酸基团
2．防止克隆载体的自连接
3．蛋白质丝*酸、苏*酸和酪*酸的去磷酸化
4．为5´末端标记准备模板
5．去除PCR产物中的dNTP和焦磷酸盐
6．65℃加热5分钟可使酶完全失活

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指在37℃条件下，30分钟能使1μg经HindIII(产生5´突出末端)、EcoRV(产生平齐末端)或PstI(产生5´凹陷末端)消化的pUC19 DNA去磷酸化所需的酶量。


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·电泳级耐热型SYBR染料
编号：BTN61201
英文名称：SuperSYBR Green
规格：50μL
本品是改良型的SYBR Green I，它跟常规的SYBR Green I相比检测灵敏度相当，但具有耐热、耐水解的特点，所以十分稳定，使用更加方便。

产品特点：
1. 稳定，本产品浓缩液可以在常温下存放一年以上，方便运输和保存。本产品的1X工作液在常温下的半衰期为120 多天，比常规的SYBR Green I(5天)长20倍以上。
2. 使用方便多样，既可以在制备凝胶时加入到融化的琼脂糖凝胶中，还可以象常规的SYBR Green I、SYBR Gold、SYBR safe、GelStar一样用于电泳后染色。
3. 灵敏，其检测灵敏度跟SYBR Green I相同，比EB 灵敏200-100倍。
4.低毒、环保、健康。
5.可检测各种核酸分子，包括dsDNA、ssDNA、RNA和Oligo。
6. 兼容性好，不但与常用的TAE、TBE和5分钟超快电泳缓冲液SuperBuffer-2等兼容，还与常用的UV 检测系统和可见光激发检测系统兼容。
7. 对 DNA 泳动速度的影响小于常规的SYBR Green I。
8. 半衰期长，自然损耗低，可多次使用，使其相对使用成本比常规的SYBR Green I和其它非对称花青类染料低。

储存条件：常温运输保存(避光)，保存期为一年。

本产品可以在电泳中染色，优点是用量少，但如果与DNA的比例没达到最佳时，带型容易弥散；也可以在电泳后染色，优点是不会对DNA电泳产生干扰，但用量大，还需要额外的染色过程。客户可以根据需要选择使用方法。百奥莱博不建议将本产品用于染色后再上样(即先将其与DNA 混合然后再上样)，也不建议将其用于PAGE(因分子较大,难以进入凝胶)。

使用方法之一：电泳中染色(仅适于琼脂糖凝胶电泳)
1. 按常规方法制备琼脂糖凝胶，胶中不能含任何其他染料。
2. 将按1：10000的比例将SuperSYBR 直接加到熔化的琼脂糖凝胶中并充分摇晃均匀(5μl可以加入到50mL 熔化的琼脂糖凝胶中)，然后倒胶。
3.其余的上样、电泳、UV 观察等步骤按常规操作进行。在254nm 紫外照射透视下，与双链DNA 接合的SuperSYBR 呈现绿色荧光。拍照时最好使用绿色滤光片。如果使用300nm 紫外照射透视*(代"仪")观察也可以，但效果不如254nm。
4. 未用完的胶可以反复融化，如果保存时间在一周以上，最好闭光。
 注意：本方法的灵敏度比在熔化的琼脂糖凝胶中加EB染色的方法高，比电泳后染色经济(后者用量大)。SuperSYBR与DNA 结合同SYBR Green I跟DNA的结合一样，有时会影响DNA样品的相对迁移率。如果出现DNA电泳带弥散的现象，说明SuperSYBR和DNA的比例没达到最佳，可以适当调节DNA的上样量。

使用方法之二：电泳后染色
1. 按照常规方法进行电泳。
2. 用水将10000×SuperSYBR 原液稀释2500倍成4×工作液(如：将5μl SuperSYBR 原液加到10mL 水和2.5mL 5 M NaCl中，加NaCl的目的是促进SuperSYBR与DNA的结合)。由于SuperSYBR 对玻璃和非聚丙*(代"烯")材料具有一定亲和力，故建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙*(代"烯")类容器。
3. 将电泳后染色工作液倒入合适的聚丙*(代"烯")容器中，放入凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30分钟，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。
4.在 254nm紫外照射透视下，与双链DNA 接合的SuperSYBR 呈现绿色荧光。拍照时最好使用绿色滤光片。如果使用300nm 紫外照射透视*(代"仪")观察也可以，但效果不如254nm。
 注意：电泳后染色工作液可以冷冻避光储存，可以在一个星期内重复使用多次。

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