BTN3071型血液RNA提取试剂盒批发

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应BTN3071型血液RNA提取试剂盒批发，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：BTN3071型血液RNA提取试剂盒批发
产地：国产|进口
英文名：Blood RNA Extraction Kit
规格：50次
品牌：百奥莱博
编号：BTN3071
本试剂盒是专门从全血样品中快速提取总RNA的试剂盒，主要用于提取全血细胞的总RNA(提取血浆病毒RNA 需使用病毒RNA提取试剂盒，提取纯化后的白细胞RNA可使用动物RNA提取试剂盒)。

试剂盒特点：
1. RNA 无明显降解和DNA污染，OD260/280 均在1.9以上。血液RNA的产量与动物种类和动物的状态(如有疾病与否)有很大关系，人全血产量为2-6μg/mL，兔全血产量为5-10μg/mL。
2. 操作简单，直接使用新鲜的或冷冻的抗凝全血样品，不需裂解红细胞等任何预处理步骤，整个提取过程只需要十多分钟，可以全在室温下进行。
3.处理量大，每管的样品处理量可以达到1.5mL，高于进口的同类产品。
4.与常用的抗凝剂(包括肝素，EDTA，柠檬酸*，草酸*)兼容，得到的RNA可以直接用于RT-PCR和Northern杂交等研究。

试剂盒组成：

 

成分	50T
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	25ml
溶液D	25ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，溶液B和溶液C有腐蚀性。4℃保存的溶液A可能会产生白色沉淀，用前需65℃水浴加热直到沉淀溶解。有效期一年。

使用方法：
1. 将0.2-1.5mL 新鲜或解冻后的抗凝全血加入到1.5mL塑料离心管中，15000g室温离心3分钟，弃上清(血浆)。如果此时血液细胞沉淀体积大于0.2mL，则需要减少血液的使用量，具体减少量需根据具体情况决定，因为各个个体(尤其是患者)血液中白细胞数目差别很大。如果提取0.1mL以下的微量血液样品最好加入百奥莱博的微量助沉剂RNApp。
2. 将1mL溶液A加入到血液细胞沉淀中，用移液枪吹打沉淀使细胞裂解。
3. 将0.3mL的溶液B和0.2mL *仿加入离心管，剧烈震荡30秒。
4. 13000-15000g室温离心5分钟，将上清液(为无色或浅红色，约0.5-0.9mL)转移到另一干净离心管中。为防止污染，最好留100μl左右的上清液。下层有机相一般呈深红色，中间层为白色，含有DNA，蛋白质和其他细胞破碎物，避免触及或吸取。
5. 加入0.5mL的溶液C和0.2mL的*仿到上清液中，用手上下剧烈摇晃30秒。
6. 13000-15000g室温离心3分钟，将上清液(无色，约1mL)转移到另一干净离心管中，避免触及或吸取有机相及其上面的白色膜状物(蛋白质)。可以按每次吸取100-200μl的方式分批转移。
7.在上清液中加入1/2 体积的溶液D，用手上下剧烈摇晃30秒，溶液将呈白色浑浊状。
8. 13000-15000g室温离心5-30分钟，小心移弃上清液，避免触及管底大量的白色RNA沉淀。
9.在离心管中加入1mL 75%乙醇，振荡器上振荡混均30秒。室温离心13000-15000g 1分钟，RNA 此时在管底形成细小沉淀。小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
10. 重复第9 步的75%乙醇清洗步骤一次。
11. 短暂快速离心数秒使管壁上残留液体沉到管底(约50μl)，用移液枪小心吸弃，注意不要吸弃沉淀。此步十分重要，因为残留的乙醇会影响后续反应。
12.室温短暂放置2分钟，立即加入适量(一般为10-30μl)溶解液使RNA沉淀溶解。建议使用具有灭活残留RNase 功能的新型RNA 溶解液液相RNase Scavenger 而不要使用经典的DEPC 水。千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥，否则RNA将变得十分难溶。RNA样品可以直接使用，也可以存放于-80℃长期保存。

疑难解答：
1．有的样品在第4 步离心后有很厚的中间层，上清很少。原因是蛋白质变性不充分，可以适当减少血液的用量。白细胞多的血液容易产生这种情况。
2．有的样品在加入溶液D离心后，沉淀上浮在液面，这是由于液体的比重大于沉淀，可以加入少量的超纯水使溶液的比重降低，直到沉淀能下去为止。也可能把下层的有机相取上来了，如果这样需要重做。
3．千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥，否则将变得十分难溶。
4．无论使用甲醛变性胶还是非变性胶电泳时，一定要使用RNA变性/上样液(如百奥莱博的RNAload)以让RNA 充分变性，否则加样孔中会有RNA复合物(人们会误以为是DNA污染)。使用没有变性能力的DNA上样液不能使RNA 复合物分离。
5．测OD时一定要使用pH8.0的缓冲液(如TE)，不要使用微酸性的DEPC水，否则OD 值会比真实的值低15-20%。

我公司的BTN3071型血液RNA提取试剂盒批发，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·RNase A干粉
编号：BTN90205
英文名称：RNase A Powder
规格：100mg
本产品是牛胰RNase A的冻干粉，可以配制成RNase A溶液用于各种分子生物学实验。

储存条件：低温运输，4℃或-20℃保存，有效期两年。

注意：RNase A非常容易吸附到玻璃表面，所以应避免与玻璃接触。

·KOD DNA聚合酶
编号：BTN101002
英文名称：KOD DNA Polymerase
规格：250U
KOD DNA Polymerase是从克隆有Thermococcus Kodakaraensis DNA聚合酶基因的质粒在大肠杆菌中经诱导表达分离纯化而来。该酶所具有的超强3´→ 5´外切酶活性使得其扩增保真性比Pfu DNA Polymerase更高，保真性是Taq的约50倍，同时具有合成速度快的特点，聚合速度约为普通Pfu DNA Polymerase的5倍，Taq DNA Polymerase的2倍，达到100-138bp/秒，可以在短时间内获得高产量的扩增产物，特别适合于高保真地扩增6 kb以内的PCR产物，扩增所得的DNA为平末端，可用于基因克隆、表达及突变分析等分子生物学实验。

产品组成：

成分	规格
KOD DNA聚合酶(5U/μL)	5μl
10×KOD DNA聚合酶缓冲液	1ml
dNTP mix(10mM Each)	0.1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存、有效期一年。

活性定义：1U指75℃条件下，30分钟内使10nmoles的dNTPs掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

使用方法：
一、建议PCR条件(以50μl反应体系为例)

成分	体积	终浓度
模板	-	＜0.5μg
正向引物(10μM)	1μl	0.2μM
反向引物(10μM)	1μl	0.2μM
10×KOD DNA聚合酶缓冲液	5μL	1×
dNTPs(10mM each)	1μL	0.2mM
KOD DNA聚合酶	0.25-0.5μL(1.25-2.5U)	-
超纯水	补足到50μL	-

注：实际操作中计算好需补加水的量后，建议先加水，然后按上述顺序添加其它成分，最后添加KOD DNA聚合酶。最好在冰浴上混合PCR各种成分，防止KOD DNA聚合酶降解引物和模板。待各成分充分混匀后，离心数秒，使反应混合物沉到管底。然后将反应管置于PCR仪中进行扩增。

二、关于
PCR条件的优化
1.质粒或者噬菌体模板(模板量5-20ng，循环参数如下表)

循环参数	目标DNA<1kb	目标DNA<2kb	目标DNA3-4kb	目标DNA5-6kb
Step 1	94℃ 2分钟	94℃ 2分钟	94℃ 2分钟	94℃ 2分钟
Step 2	94℃ 20秒	94℃ 20秒	94℃ 20秒	94℃ 30秒
Step 3	Ta 20秒	Ta 20秒	Ta 20秒	Ta 30秒
Step 4	72℃ 20秒	72℃ 30秒	72℃ 40秒	72℃ 60秒
Step 5	72℃ 5分钟	72℃ 5分钟	72℃ 5分钟	72℃ 5分钟
Repeat step 2-4 for 30-35个循环
Ta=Tm－5℃

2.基因组DNA和cDNA模板(基因组DNA模板量为50-100 ng，1-2μl cDNA(起始转录用的RNA为500 ng)，循环参数如下表)

循环参数	目标DNA<2kb
Step 1	94℃ 2分钟
Step 2	94℃ 20-30秒
Step 3	Ta 15-20秒
Step 4	72℃ 20-60秒
Step 5	72℃ 5分钟
Repeat step 2-4 for 30-35个循环
Ta= Tm - 5℃

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·6mL亲和层析柱
编号：BTN110809
英文名称：Affinity Chromatography Colum(6mL)
规格：6mL
本产品适用范围广泛，可用于纯化分离重组蛋白、抗体和抗原、多肽、糖蛋白、磷酸化蛋白、DNA及DNA结合蛋白等生物大分子；还可以用于去除生物样品中的内毒素等污染。

亲和层析是利用生物分子间所具有的专一亲和力而发明的纯化技术。它是利用生物分子间存在的特异性相互作用(如抗原－抗体、酶－底物或抑制剂、激素－受体等)，通过将具有亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性基质上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。

亲和层析柱常见的使用方法有重力法、手动加压法、蠕动泵法，其示意图如下：


储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

常用亲和标签及纯化方案：


·无内毒素质粒DNA大量提取试剂盒
编号：BTN81107
英文名称：Endotoxin-free plasmid DNA large-scale extraction kit
规格：5次
本试剂盒是整合大提质粒DNA提取试剂盒和菌体内毒素清除剂两产品而成。菌体内毒素清除剂是我司独家推出的产品，在质粒提取前就把细胞壁上的内毒素清除掉，彻底避免了目前通用的先提取DNA+内毒素混合物，再从中纯化质粒DNA的弊端。用本产品提取的质粒DNA，内毒素的污染浓度低，适合于转染等对内毒素的污染敏感的实验。

试剂盒特点：
1. 操作简单，只在经典的柱式质粒DNA提取前，增加菌体内毒素清除一步。
2. 去内毒素效果好，处理一次可以去除99%以上的内毒素。
3.质粒丢失少，产率只比柱式质粒DNA提取试剂盒低5-10%，效果好于先提质粒DNA，再用液相内毒素清除剂处理的方法。
4. DNA可以直接用于转染等实验。

试剂盒组成：

成分	规格
菌体内毒素清除剂	200ml
溶液A	25ml
溶液B	25ml
溶液C	35ml
RNase A溶液(10mg/mL)	300μl
吸附柱活化液	12.5ml
大提离心吸附柱	5套
通用洗柱液	100ml
DNA洗脱液3.0	10ml
说明书	1份

储存条件：RNase A溶液需4℃或-20℃保存，其余成分可室温保存，如有沉淀可加热溶解后再使用。

使用方法：
1. 用50mL塑料离心管收集不超过40mL的E.coli 饱和菌液，5000rpm离心5-10分钟，弃上清，得到细菌沉淀。
2. 加入10mL菌体内毒素清除剂，温和混匀后5000rpm离心5-10分钟，弃上清(含内毒素)。
3. 重复上述操作3次，得到的菌体将丢失了绝大部分细胞表面的内毒素。
4. 往细菌沉淀中加入5mL溶液A(第一次使用时需要将RNase A溶液全部加入并混合均匀，未用完的部分放4℃保存)，充分振荡悬浮。注意：充分重悬细胞沉淀(无块状物)对于获得高的质粒产量十分重要。
5. 加5mL溶液B，温和翻转10 余次至透明。若混合液不透明，应减少细菌的用量或室温放臵5-10分钟直到裂解液变透明。注意: 避免剧烈振荡，否则细菌基因组DNA 将断裂为小片段，与质粒难以分离，污染质粒DNA。
6. 加入冰浴的7mL溶液C，颠倒混匀，冰上放臵10分钟。混合物中将有白色絮状物形成。注意不要过分振荡。
7.在等待期间，活化离心吸附柱。在离心吸附柱中加入2.5mL活化液，套上收集管后室温放臵2分钟，然后5000rpm离心2分钟，倒弃穿透液，再将吸附柱套上收集管后待用。活化后的离心吸附柱必须立即使用。如果不活化，质粒得率将低20-40%左右。
8. 6000rpm离心10分钟。如果离心管承受能力强，离心速度还可以适当提高以充分沉淀絮状物。
9. 将上步得到的上清液移入到大提离心吸附柱中，放入50mL收集管中。室温放臵5分钟左右以便让质粒DNA跟膜结合。
10. 6000rpm离心5分钟，质粒DNA 将与大提离心吸附柱中的膜结合。弃穿透液。
11. 将10mL通用洗柱液加入到离心吸附柱中，室温静臵2分钟后6000rpm离心5分钟，弃穿透液。
12. 重复上步一次。
13.室温6000rpm 空甩5分钟，弃穿透液。注意：此步很重要，不能跳过，否则残留乙醇会影响后续实验。
14. 将大提离心吸附柱放入一个干净的50mL塑料离心管中，加0.5mL DNA洗脱液3.0(洗脱液如加热到50-65℃效果更佳)，室温静臵2分钟后6000rpm离心5分钟，收集液即是质粒DNA溶液。
15. 重复上步3-4次可洗脱更多的质粒DNA。DNA 洗脱液3.0 不够可以用TE或超纯水替代。
16. 合并所得质粒DNA，立即使用或-20℃储存。

注意事项：
1．细菌培养时间一般为12-16小时，但接种量大时应减少时间。过度培养会降低质粒的质量甚至导致质粒DNA突变。
2．注意溶液A：溶液B：溶液C的比例为5：5：7。若细菌量增大，需按比例放大这些溶液的使用量。
3．随菌体增多应延长溶液B的作用时间，直至溶液成粘稠透明状。但时间过长会导致质粒DNA变性。
4．加溶液C后形成的白色沉淀中有变性的蛋白质、细菌基因组DNA和细胞碎片，离心后应避免带入到后续处理中。
5．通用洗柱液洗涤离心柱后必须甩干一次，否则残留通用洗柱液中的乙醇会干扰后续实验。
6．质粒的具体产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。一般1.5mL 过夜培养菌体可收获约10μg高拷贝质粒。
7．纯化的质粒在电泳中表现为2-3 条带有时甚至为4-6 条带均属正常，未分开的环套质粒，易被误判为基因组DNA。


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·自诱导培养基(lac启动子)
编号：BTN100825
英文名称：Auto-induction Medium
规格：200mL
本产品是本产品是在pET 专用生长培养基的基础上开发而成的，它利用E.coli自身对培养基中不同碳源的调控利用机制，实现外源蛋白在细菌达到饱和生长期后的自动诱发。

产品特点：
1．本产品自动诱导表达，不需要添加任何IPTG或相关诱导物，节约成本。
2．免去了密切监控菌液密度的过程，尤其适合大规模筛选。
3．极大将细菌的生长密度OD600从2左右提高20以上。
4．极大提高外源蛋白的表达量，最高可占细菌总蛋白的45%。
5．与各种细胞培养容器(如培养瓶、培养罐、深孔管、发酵罐等)兼容。
6．本产品即开即用，非常方便。
7．适用于T7 RNA聚合酶基因由lac启动子控制的任何表达系统，如pET系列。
8．不适用于lacZ或lacY突变的宿主菌。

产品组成：

成分	规格
成分A	200ml
成分B	1.25ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期两年。

使用方法：

一、培养基的配制
1．配制自诱导培养基：将1.25mL溶液B全部加入到200mL的溶液A中即得自诱导培养基。
 注意：必须严格无菌操作，否则自诱导培养基非常容易长细菌。
2．贴好标签待用。如果长期时间不用，可以冻存在-20℃。

二、培养基的使用
1．将构建好的质粒转化入细菌，如BL21(DE3)，涂于自备的、含有1%葡萄糖的LB培养基中(需要加入适当浓度的抗菌素)，37℃培养过夜。
2．挑取单个细菌接种到自备的、含适当浓度抗菌素的液体LB培养基中，37℃培养直到菌液浑浊但不饱和(一般需要6-8小时)。
3．将所得菌液按千分之一的体积比例加入自诱导培养基中(如果自诱导培养基体积是100mL，则加入100μl菌液)，同时加入适当的抗菌素。注意：在自诱导培养基中，如果使用卡拉霉素，其终浓度比一般的培养基高，需要100μg/mL。由于本方法所得菌液密度大，故需要大量氧气，因此培养基的体积不能超过三角瓶的五分之一。三角瓶底最好是皱褶式的，这样摇晃中氧气供应更充分。
4．37℃培养过夜，或37℃培养到菌液饱和时降低摇床的温度到所需温度(对温度诱导型启动子)。
5．收集菌液开始蛋白纯化步骤。

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