PCR级绿如蓝DNA染料优惠促销

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PCR级绿如蓝DNA染料优惠促销的品牌：百奥莱博，是优质的核酸扩增(PCR)产品，用于生化科学研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多PCR级绿如蓝DNA染料等核酸扩增(PCR)产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：PCR级绿如蓝DNA染料优惠促销
规格：0.1mL
品牌：百奥莱博
英文名：DNAgreen, PCR Grade
编号：BTN70909
第二代的非饱和型荧光染料(如SYBR Green I)在高浓度下会抑制荧光PCR，所以反应重复性很不稳定，并且不能用于要求严格的Tm分析。本产品跟SYTO9、LC Green、EvaGreen一样，是第三代饱和型荧光染料，在饱和浓度下也不抑制荧光PCR反应。

产品特点：
1. 饱和浓度不抑制PCR反应，因此得到的荧光信号更强。
2. 抗水解、抗热解和抗光解的能力强于目前最常用的SYBR Green I。
3. 饱和浓度下染料分子没有机会在DNA分子间发生移位，因此荧光强度跟DNA变性程度呈线性关系，可以用于精细的Tm 测定实验，如High-resolution melting curve analysis等。
4.跟目前常用的PCR 仪器(包括iCycler、LightCycler、ABI 测序仪)兼容。激发和发射光谱跟FAM和SYBR Green I 接近，可以使用SYBR Green I的光学设置参数。
5. 不能渗透进入细胞内，毒性和致突变性远低于SYBR Green I。
6.可以用于qPCR、高分辨DNA 溶解曲线分析(HRM、high-resolution DNA melt curve analysis)、毛细管电泳等研究。

储存条件：常温运输、-20℃避光保存，有效期一年。

使用方法：
先将本产品放置在室温融化，然后震荡10秒钟，短暂离心后待用。下面以50μL的标准PCR反应体系为例说明其使用：

1.在一干净的PCR 管中，加入下列成分：

 

试剂	加入量
10×PCR Buffer(No Mg2+)	5μl
MgCl2 50mM	2.5μl
dNTP 10mM	1μl
本产品(PCR级绿如蓝染料)	2.5μl
Taq DNA聚合酶	1-5U
DNA模板	适量
PCR引物	5-50 pmol each
补水到	50μl

2. 放入荧光PCR 仪中进行qPCR，并在退火或延长反应时记录荧光信号。使用的光学参数可以跟FAM或SYBR Green I 完全一样。

注意事项：
1. 如果使用iCycler，可以不加FAM；如果使用ABI系统，需要在Well Inspector选项下的非特异参照中选择“无”；使用LightCycler时，最好在PCR 体系中再加入终浓度为0.5mg/mL的BSA以降低仪器对染料和模板的非特异吸附。
2. 如果使用化学修饰过的Taq DNA聚合酶，可能需要减低KCl的浓度并提高Tris的浓度。

更多有关PCR级绿如蓝DNA染料优惠促销的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)
编号：BTN111009
英文名称：Telomeric Repeat Amplification Protocol Kit
规格：50次
本品是我司在经典TRAP技术基础上改良而得，专门用于快速测定人类细胞端粒酶的相对活性(需要跟对照样品比较)。端粒酶存在于85-90%的肿瘤组织中，因此通过检测端粒酶活性就能早期诊断大多数肿瘤。目前最常用的检测端粒酶活性的方法就是TRAP，它利用端粒酶能在外加的TS模板DNA的末端添加不同数量的TTAGGG序列这一特点，通过PCR检测延伸产物而高效检测端粒酶活性。原理如下：


产品特点：
1．一站式，提供从细胞裂解到PCR的所有试剂，但不含PAGE和银染试剂。
2．一管式操作，端粒酶延伸和PCR在同一体系中完成，方便快捷。
3．提供改良的、长为150bp的内参和含8个端粒序列的合成端粒，可有效排除PCR假阴性。内参长度远大于TRAP产物，不会干扰结果分析。
4．改良的TS模板和PCR引物，极大降低了引物二聚体的形成。
5．既可用于培养细胞，也可用于实体组织。
6．灵敏度高，最低可以检测到10个肿瘤细胞中的端粒酶活性。

试剂盒组成：

成分	规格
TRAP细胞裂解液	10mL
PCR Mix 3.0	1.5mL
合成端粒(PC)	50μL
TS-引物混合物(含内参)	300μL
超纯水	1mL
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、端粒酶的提取
注意：端粒酶是蛋白质和RNA组成的复合体，RNA极容易被降解，因此，提取端粒酶应该跟提取RNA一样，尽量在低温条件下快速操作，并且必须使用RNase-free的耗材，桌面最好用固相RNase清除剂清洁(BTN3090)清洁。
1．对冷冻的实体组织：将50-100mg冷冻组织在液氮中用预冷的研磨器研磨成粉末，再转移到预冷的玻璃匀浆器中，加入200μl预冷的TRAP细胞裂解液，温和手动匀浆数次后冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次，然后直接进入第3步操作。为保证裂解效果，可在显微镜下观察。如果组织样品不足50-100mg，可以按比例降低TRAP细胞裂解液的用量。
2．对新鲜的培养细胞和组织：用自备的预冷PBS洗涤105-106个经过胰酶处理的细胞或50-100mg新鲜组织，3000g 4℃离心5分钟，弃上清；加入200μL预冷的TRAP细胞裂解液悬浮细胞或组织。对细胞：涡旋振荡10秒后置冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次。对组织：在冰上用玻璃匀浆器轻柔匀浆后冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次。如果细胞不足1×106或50-100mg，可按比例降低TRAP裂解液的用量。
3．12000-14000g 4℃离心20分钟。
4．收集160μL上清，先取部分用于测定蛋白质浓度，可通过测定215nm和225nm的光吸收得到，计算公式是蛋白质浓度(μg/μL)=0.144×(A215-A225)×稀释倍数，也可使用BCA法测定蛋白浓度。本试剂盒制备的细胞裂解物的蛋白浓度一般在10-750 ng/μL。知道各样品的蛋白浓度后，可用TRAP细胞裂解液将各样品的蛋白浓度调成一样便于比较，然后按10μL/管分装得到至少15管裂解物，放-80℃冷冻保存(可存放一年)。每个样品可取一管进行热灭活(95℃处理10分钟)后再放-80℃冷冻保存，此管将作为该样品的阴性对照。

二、TRAP反应
5．确定每个TRAP反应的细胞裂解物用量：为便于分析比较，每个TRAP反应所用的蛋白量(或细胞数)必须一样。由于细胞裂解物中一般都有高浓度的不明Taq DNA聚合酶抑制物(TRAP失败最常见的原因)，因此最佳结果往往是用稀释10-1000倍后的细胞裂解物得到。建议用一个样品稀释不同浓度做TRAP预实验。
6．在PCR管中按下表设置TRAP反应(50μL反应体系，以A和B两个样品为例)：

成份	A样品管	A阴性 对照管	B样品管	B阴性 对照管	实验 阴性对照	实验 阳性对照
A样品	2μl	-	-	-	-	-
A阴性对照	-	2μl	-	-	-	-
B样品	-	-	2μl	-	-	-
B阴性对照	-	-	-	2μl	-	-
TRAP细胞裂解液	-	-	-	-	2μl	-
合成端粒	-	-	-	-	-	2μl
TS引物混合物	6μl	6μl	6μl	6μl	6μl	6μl
PCR Mix	25μl	25μl	25μl	25μl	25μl	25μl
超纯水	17μl	17μl	17μl	17μl	17μl	17μl

 注：为避免污染，最好等其他样品加完并盖上盖后再加合成端粒。
7．吹打混匀后进行PCR扩增，扩增条件(仅供参考，用户可优化)如下：

步骤	温度	时间
端粒酶延伸	30℃	30min
端粒酶灭活	95℃	5min
PCR(循环35次)	94℃	30s
	55℃	60s
	72℃	30s

三、PAGE-银染检测及结果解读(本试剂盒不含PAGE-银染检测试剂盒)
8．取5μL PCR反应液进行10%非变性PAGE电泳-银染显色实验(需另购本公司PAGE电泳套装和银染试剂盒)。如果背景高(主要是由反应体系中的蛋白成分引起)，可以先进行PCR产物纯化再进行PAGE电泳和银染。
9．跟预期结果(见下表)比较。如果结果跟下表不一致，则需要按具体情况分析原因。

现象	样品管结果	样品阴性 对照结果	实验阴性 对照结果	实验阳性 对照结果
典型TRAP条带 (条带数不限)	有则有端粒酶活性 无则无端粒酶活性	不出现	不出现	不出现
阳性对照的TRAP 条带(仅8条带)	不出现	不出现	不出现	出现
150bp内参	可出现可不出现	出现	出现	出现

 注：本试剂盒所用引物产生的典型TRAP条带最小条带为59bp。

疑难解答：
1．如果样品管有内参带，但没有TRAP条带，可能是端粒酶活性低或者失活。制备细胞裂解物时可在TRAP细胞裂解液中加入1/100体积的RNase抑制剂以抑制RNase活性，并在端粒延伸反应后增加DNA纯化一步，纯化后的DNA再用于PCR。此两步法TRAP需要用户自备DNA纯化试剂和dNTP。
2．如果样品对照管(端粒酶已经灭活)出现TRAP条带，可能是TRAP产物污染，需要使用洁净的PCR管和PCR试管架。样品制备、PCR设置和电泳需在不同房间进行。也可能是端粒酶没有彻底灭活，建议用RNase酶解法或酶解+热灭活法。
3．实验阴性对照管的实验结果中出现TRAP条带，可能是引物二聚体，可采取两步法TRAP，并且将DNA模板加入到70℃预热的PCR Mix3.0中再进行PCR。
4．实验结果不好时，可以直接采取2步法，先做端粒酶延伸和灭活，然后再纯化DNA，用纯化的DNA做PCR。此法需要用户自备dNTP。


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·K562 DNA
编号：BTN131035
英文名称：Human Culture Cell Genomic DNA
规格：30μg
K562 DNA是从人慢性粒细胞白血病细胞系继代培养的细胞中纯化得到的，作为一个对照用于单位点探针分析方法中的多数步骤。该DNA 也可作为参照用于适当的酶切消化后可变数目串联重复序列(VNTR)等位基因片段大小的确定。由于实验室在操作方案和分析方法上的不同，得到的K562片段大小可能会有细微差别，本产品浓度为0.4–1.0μg/μL。

储存条件：低温运输、4℃保存、避免反复冻融，有效期一年。

·福林酚试剂
编号：BTN100939
英文名称：Folin Phenol Reagent
规格：100mL
福林酚试剂又叫Folin-Ciocalteau酚试剂，其本身并不含酚，而是磷钼酸和磷钨酸混合物，它是由美国科学家Folin和Ciocalteau在1929年发明，主要用于检测含酚成分。后被Lowry用于蛋白定量，现主要作为Lowry蛋白定量法的成分使用。
注：福林酚试剂跟福林试剂不同，后者是1,2-*醌-4-磺酸*。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

·MMLV逆转录酶(无RNase H活性)
编号：BTN131209
英文名称：MMLV Reverse Transcriptase (RNase H-)
规格：1000U
M-MLV逆转录酶(RNase H缺失)，是RNA依赖的DNA聚合酶，可用于长mRNA(＞5kb)为模板的cDNA合成。它是M-MLV 逆转录酶的一种类型，已经经过基因改造，去除了RNase H的活性。虽然许多研究者已经成功使用M-MLV RT(H+)进行了一些cDNA制备应用及分析，但是缺失了RNase H活性的逆转录酶为长cDNA的制备及包含高比例全长cDNA的文库制备提供了更好的选择。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·超级电泳液
编号：BTN151103
英文名称：Superbuffer
规格：100mL
本品是我司开发的超级核酸电泳液套装，其中的溶液A含抗水解的核酸染料，用于配制琼脂糖凝胶(溶液A也可用于电泳，但不经济)；溶液B为不含染料的电泳液。

产品特点：
1.高浓度，溶液A和溶液B用去离子水稀释100倍后可以直接用作配胶工作液和电泳工作液，100mL的产品可以配制10 L工作液。
2.低产热，用溶液A配制的胶在溶液B配制的电泳液中电泳时可用30 V/cm的中等电压(cm是指电泳槽两电级之间的距离)，一般的mini胶电泳(如检查PCR扩增)只需要5-10分钟即可完成，比TAE和TBE快4-5倍(TAE和TBE电泳一般需要40分钟)。当然，也可以按常规的电泳参数电泳，所需时间约为40分钟左右。
3. 用本产品溶液A 配制的琼脂糖凝胶可以在TBE和TAE缓冲液中低压电泳。用TBE 配制的琼脂糖凝胶也可以在本产品溶液B配制的电泳液中电泳(低压中压均可)。但用TAE 配制的胶不能在溶液B中电泳。
4. 用本产品电泳得到的DNA片段的胶回收率高于使用TAE和TBE电泳的胶回收，不影响后续的DNA胶回收和DNA连接等反应。
5.溶液A(配胶用)和溶液B(电泳用)均可以单独购买。

产品组成：

成分	A型	B型
溶液A(配胶液，含染料)	100ml	-
溶液B(电泳液，不含染料)	-	100ml
说明书	1份	1份

储存条件：常温保存和运输，有效期两年。如果本产品有沉淀析出现象，请65℃水浴溶解后使用。

使用方法：
将本品溶液A用去离子水稀释100倍(1mL溶液A加99mL去离子水)，混匀后直接用于配琼脂糖胶，溶液B用去离子水稀释100倍(1mL本产品加99mL去离子水)后直接用于做电泳液，其余操作跟TAE，TBE缓冲液一样。需注意的地方是：

1.电压：对一般minigel，一般可以用250-350V 跑5-10分钟；对大的电泳槽，可用400-450V 跑5-10分钟。若在电泳时发生电流或电压逐渐下降的现象，请检查电泳仪是否设置了电流上限或功率上限。若继续存在，可能需要更换新的缓冲液。
2. DNA条带扭曲：DNA样品中所含SDS量过高时(SDS 主要来于上样液)，DNA条带将出现扭曲，影响实验效果。建议使用不含SDS的上样液，最好使用跟我公司超级电泳液兼容的上样液。
3. 反复使用：本溶液A配制的电泳液至少可以重复使用2-3次，如果使用大电泳槽，可以重复使用的次数会更多。
4. TBE胶：已经用TBE电泳液配置好的琼脂糖凝胶，如果不含EB，SYBR Green等染料，则可以直接放入本产品溶液A配制的电泳液中按上述电泳条件电泳(因为溶液A含染料，故不需要额外再加染料)。如果用TBE电泳液配置好的琼脂糖凝胶含EB、SYBR Green或绿如蓝等核酸染料，则可以直接在本产品溶液B配制的电泳液中进行电泳。
5.溶液A配制的胶在TAE或TBE电泳液中电泳：已经用本产品溶液A配置好的琼脂糖凝胶，也可以直接在TBE或TAE电泳液中电泳，电压跟常规TAE或TBE电泳一样。


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ET105 Taq Plus DNA Polymerase
碳酸*洗液(10%)   500ml
ARB13307 小鼠髓过氧化物酶(MPO)检测服务 Mouse myeloperoxidase,mpo ELISA KIT
ARB13064 小鼠金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)免费代测 Mouse tissue inhibitors of metalloproteinase 1,timp-1 ELISA KIT
ARB13618 兔子促甲状腺素(TSH)血清中含量检测 Rabbit thyroid stimulating hormone,tsh ELISA KIT
BL1199 结晶紫染色液(0.1%)
PY04-076  庆大霉素溶液  2mg/支×10支  每支添加于100ml哥伦比亚琼脂培养基基础中，用于药品中梭菌的分离与鉴别
F030634 FITC标记山羊抗人IgG抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG*FITC
2-*三*甲基*树脂 α-Methyl-L-DOPA
ARB13481 鸡单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体(HSVⅡ-Ab)含量测试 Chicken herpes simplexvirus Ⅱ antibody,hsvⅡ-ab ELISA KIT
BL0976 猪外周血淋巴细胞分离液
Hoechst33258染色液   10ml
PY02-221  改良酵母浸汁-孟加拉红肉汤  250克  
BTN130519 巯基磁珠 Magnetic beads,Sulfydryl
7647-14-5 Sodium Chloride  *化*
PY02-191  尿素酶琼脂基础  250克  
ARB14105 大鼠尿素氮(BUN)ELISA检测服务 
一水肌酸 L-Glutamine 6020-87-7

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