超级杂交液(芯片) 探针标记及检测

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超级杂交液(芯片) 探针标记及检测的品牌：百奥莱博，是优质的探针标记及检测产品，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多超级杂交液(芯片)等探针标记及检测产品请联系我司咨询订购。

名称：超级杂交液(芯片)
品牌：百奥莱博
英文名：Super hybrid solution(chip)
规格：10mL
产地：国产|进口
基因芯片是将大量靶基因(DNA片段)有序地、高密度地点在玻璃片或硅片或塑料片上等载体上所形成的矩阵。基因芯片杂交一般情况下是将待测的两种样品(主要是RNA样品)分别用Cy3和Cy5两种荧光染料标记，制备成探针与芯片杂交，杂交信号用激光扫描仪检测，计算机分析检测结果，可获得类似与传统的点杂交的杂交数据，以达到快速、高效、高通量及平行性的分析表达谱的目的。本产品为即用型芯片专用的杂交液，可用于各种标记的探针(主要是Cy3和Cy5标记的RNA探针)跟基因芯片的杂交实验。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
一、预杂交(下面的操作以载玻片为例)
 预杂交的主要作用是在加入标记探针之前从载玻片上洗去未结合的靶基因(靶DNA)，同时封闭载玻片表面可能与标记探针进行非特异性结合的反应性基团(如自由*基)，从而降低非特异的背景。所有的预杂交、杂交、杂交后洗涤都在Coplin染缸或者显微镜载玻片盘等杂交盒中进行。
1.在室温下，将载玻片浸入装有本产品的杂交盒中(本产品的用量根据杂交盒的大小决定，以能够浸埋载玻片为准)。将杂交盒在42℃水浴中放置30～45分钟，无需震动。
2.在室温下用去离子水清洗载玻片数次。
3.(可选)用100%异丙醇(HPLC级)漂洗载玻片。
4.在加入杂交溶液之前，空气晾干或者通过离心(室温下以2000g离心5分钟，有阵列的一面朝外)干燥载玻片，将干燥后的载玻片立即用于杂交。如果载玻片干燥时间超过1小时，杂交效率可能会迅速下降。
二、杂交
1. 将等同于至少1μg polyA RNA或100μg总RNA的Cy3和Cy5标记的探针RNA混合在一起，最终体积约为6μL。如果没有这么多的，则需要进行RNA扩增。
2. 将6μl标记DNA和30μL本产品在塑料离心管中混合，得到杂交液。
3.(可选)将杂交液在微量离心机中10,000 g离心5分钟，然后将上清液转移到新的塑料离心管中。本步骤以去除靶序列纯化过程中带入的微量玻璃纤维和其他高分子质量的颗粒。
4. 将上清液在100℃下加热2分钟，然后在30℃水浴中冷却30秒。加热混合液可以降低背景。不要将溶液放置在冰上，因为可能会有沉淀析出。
5. 将适量的杂交溶液加到DNA微阵列上，再小心的盖上盖玻片，盖玻片和DNA微阵列之间不能有气泡。
6. 将载玻片置于一个空的移液器吸头盒的上层，下层装5mL自备的3×SSC，盖上盖子即得潮湿的环境。由于杂交是在很小的体积下进行的，在密闭的潮湿保持适当的杂交适度非常重要，过分干燥则盖玻片会粘附在DNA微阵列上，背景会很高；过于潮湿则冷凝的液体会进入盖玻片区域，降低杂交信号。
7.在42℃下将载玻片温育14~16小时。
三、杂交后的清洗
 注意在下面的所有操作过程中，一定不要让载玻片干燥。
1.杂交完毕，拆卸杂交盒。如果杂交盒是浸入水浴中的，在松开螺丝之前，仔细擦干水痕，尤其是两个半片盒子之间的水痕。
2.从杂交盒中取出载玻片，浸没于大量的0.5×SSC(含0.01 % SDS)溶液中，直到盖玻片分离。
3. 盖玻片除去后，将载玻片放到玻片夹持器上，然后浸入装有约250mL 0.5×SSC(含0.01 % SDS)溶液的避光容器中。将容器放在轨道振荡器上，并将载玻片振荡2分钟。
4. 将载玻片和夹持器一起浸入到另一个装有约250mL 0.5×SSC溶液的容器中，再次将载玻片振荡3分钟。
5. 将载玻片和夹持器一起浸入到另一个装有约250mL 0.1×SSC溶液的容器中，再次将载玻片振荡3分钟。
6. 重复上一步2次，每次清洗1分钟。
7.快速(<10秒)将载玻片和夹持器一起浸入到另一个装有约250mL 0.01×SSC溶液的容器中，立即将载玻片放到铺有3M Whatman滤纸的离心机微量滴定板夹持器中。低速离心约5分钟迅速干燥玻片。
8. 将载玻片放置在避光的盒子内直到准备扫描。(尽量在当日内进行扫描，因为随着时间的延长信号会降低)

疑难解答：
问题一：高背景(荧光或黑洞)
解决方案：对标记探针进行足够的纯化；清洗过程中操作要迅速，避免载玻片干燥；杂交溶液需要与载玻片基底相匹配。
问题二：没有杂交信号或杂交信号非常弱
解决方案：杂交过程中应该连续振荡，不应该有气泡，避免玻片变干；检查RNA的纯化和标记；更换杂交试剂。
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编号	名称
BTN160684-25A	SuperTOPO-Amp平末端克隆试剂盒
BTN100812	BLOTTO溶液
BTN120653A	填入法DNA末端标记试剂盒
BTN91103	非冻型拭子病毒保存液
BTN101109	粪便RNA柱式提取试剂盒
BTN130818	HRP标记的链霉亲和素
BTN100803	酸酚
BTN140436	非蛋白型Western封堵液
BTN120512	即用型蓝白T载体B型(T7-T3，有MCS)
BTN60704	Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH6.5)(不含RNase)
BTN130649	尿嘧啶-DNA糖基化酶(人单链选择性单功能)(hSMUG1)
BTN140379	大肠杆菌Rosetta感受态细胞
BTN140653	50mL亲和层析柱
BTN60205	柱式质粒DNA提取试剂盒
BTN120406	柱式植物叶绿体DNA提取试剂盒
BTN100917	蜗牛酶干粉
BTN90505	大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞
BTN130559	大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)感受态细胞
BTN130644	甲酰胺嘧啶-DNA糖基化酶(FPG)
BTN130930	百万碱基级血液DNA提取试剂盒
BTN131108	ONPG干粉
BTN130986	即用型热启动PCR试剂盒
BTN3071	血液RNA提取试剂盒
BTN100839	潮霉素B
BTN130971	柱式病毒RNA-DNA共提试剂盒
BTN80812	考马斯亮蓝G-250染液
BTN131079	重组蛋白A
BTN80901	柱式动物RNA大量提取试剂盒
BTN140649	1mL亲和层析柱
BTN130535	APMSF溶液(10mg/mL)
BTN60702	10%SDS溶液(不含RNase)
BTN130967	丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")干粉(19:1)
BTN140648	PCR污染清除剂
BTN131283	多聚甲醛-*氧化*固定液
BTN111208A	植物线粒体纯化试剂盒A(粗提)
BTN131183	链激酶