PCR法DNA探针生物素标记试剂盒大量库存促销

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PCR法DNA探针生物素标记试剂盒大量库存促销由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多PCR法DNA探针生物素标记试剂盒等探针标记及检测产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：PCR法DNA探针生物素标记试剂盒
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：BTN90604B
英文名：PCR DNA Labeling Kit(Biotin)
PCR标记的原理是用带标记的dNTP进行PCR，最后得到的PCR产物将带有标记，可以直接用于杂交试验。其原理示意图如下：


产品特点：
1.一站式，本试剂盒提供经过优化的试剂，不需要用户自己摸索。
2. 足够10次50μl体系的常规PCR(用于制备标记反应的模板和设置对照反应)和5次50μl体系的标记反应。
3.一次标记可以得到μg级的双链DNA探针或约700ng的单链DNA探针，足够多次杂交实验用。
4. 既可用于制备双链探针，也可以用于单链探针。
5. 90604A需自备含标记核苷酸的dNTP，90604B和90604C分别含生物素和地高*(代"辛")标记的底物。自备的标记包括fluorescein-dUTP、hydroxycoumarin-dUTP、resorufin-dUTP和aminoallyl-dUTP等。
6. 本产品得到的探针参入率一般为4-5%(每100个核苷酸中有4-5个将带有非同位素标记)，有效降低了空间阻碍，检测效果最佳。
7.可以用于Southern和Northern Blot、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等分析。

试剂盒组成：

 

成分	规格
2×标记专用PCR Mix	500μl
dNTP，2mM each	50μl
含Biotin-11-dUTP的dNTP	25μL(仅B有)
含DIG-11-dUTP的dNTP	25μL(仅C有)
超纯水	1ml
说明书	1份

注：标记专用PCR Mix不含dNTP。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：准备工作
1. 按常规的方法设计PCR引物，使探针长度在400-800bp之间。过短则标记参入少，探针杂交信号强度减弱；过长则非特异杂交增加，背景变强。
2. 根据PCR引物优化PCR条件。
3. 由于标记的dNTP比较珍贵，所以本试剂盒不推荐以基因组DNA或其他复杂DNA为模板直接进行PCR标记，而是建议采取下述的两步法标记来提高成功率，即先制备非标记PCR产物，再以之为模板制备标记的PCR产物。
二：非标记PCR产物的制备
4. 设置50μL PCR的反应体系：

成份	用量
2×标记专用PCR Mix	25μl
dNTP，2mM each	5μl
自备的探针引物一(10pmol/μL)	1μL(10μM)
自备的探针引物二(10pmol/μL)	1μL(10μM)
自备的模板DNA	1μg基因组DNA或1ng质粒DNA
超纯水	补到50μL

5. 按已经优化的PCR参数进行PCR。
6.电泳检测和胶回收所需的PCR产物，并定量。用10 pmol引物一般能得到1μg左右的PCR产物(具体取决于PCR产物的长度)。注意：最好采取胶回收而不是PCR回收以避免残留引物干扰后续的标记PCR。
三：标记PCR反应(最好做一个不加标记的对照用于定量)
说明：在设置下面反应时，如果加一种引物，就得到单链标记的PCR产物；如果加两种引物，则得到双链标记的PCR产物。由于双链PCR探针在杂交前虽然要变性成单链后使用，但杂交时变性的双链彼此还会复性，这种复性会与探针-靶DNA杂交反应相竞争，降低杂交效率，因此强烈推荐使用单链标记的DNA探针。

成份	样品	对照
2×标记专用PCR Mix	25μl	25μl
含Biotin-11-dUTP的dNTP或 含DIG-11-dUTP的dNTP或 自备的含其他标记dUTP的dNTP	5μl	不加
dNTP，2mM	不加	5μl
双链标记：探针引物一和引物二 单链标记：探针引物一或引物二	每种50 pmol 一种50 pmol	每种50 pmol 一种50 pmol
上步胶纯化所得PCR产物 (单链标记可用100ng)	10 ng	10 ng
超纯水	补到50μL	补到50μL

 注意：本试剂盒提供的dNTP混合物中，标记底物与非标记底物的比例已经进过优化，如果自备标记dUTP，其与dTTP的最佳比例需要优化，标记不同，比例不同。对DIG-11-dUTP，最佳比例1：3；对BrdUTP，最佳比例为1：1。
7. 按第5步的PCR参数进行标记PCR，但需要进行下列修改：一是循环数增加到35-55个循环。由于模板为纯化后的PCR产物，探针对扩增长度完整性要求不高(长度不均的探针由于能形成网络结构，效果反而更好)，所以可以增加循环数；二是延伸时间增加15秒，因为标记dUTP参入到DNA的速度比常规的dTTP慢；三是降低复性温度5-7℃，因为标记核苷酸参入到DNA后，新模板的Tm值将降低。
8. 标记探针的定量：取标记反应和对照反应的产物1-5μl，在琼脂糖凝胶上跟浓度已知的DNA marker一起电泳，并判断探针的浓度。由于标记反应的PCR产物中额外带有非同位素的配体(生物素，地高*(代"辛")等)、因此其泳动速度将慢于非标记PCR产物(但同位素标记不能用此法)。
 注意：如果扩增的是单链DNA探针，其结合EB的能力远低于双链DNA(EB是嵌合到双链碱基对之间的，而单链DNA没有碱基对，只有一些局部区域折叠形成的有限双链区，因此能结合的EB很少)，因此EB染色的强弱不能准确反应DNA的浓度，可以采用银染定量(跟marker比较)。一般100ng模板按上述条件经过单链PCR扩增可得到700ng左右探针。
9. 剩余的PCR标记产物可以不经过纯化，直接加入(对单链PCR探针)杂或加热变性并急冷后加入(对双链PCR探针)到杂交液中使用。如果暂时不用请放-20℃长期保存。如果需要纯化，请使用乙酸铵/乙醇沉淀法。
关键词：BTN90604B,PCR法DNA探针生物素标记试剂盒,PCR DNA Labeling Kit(Biotin)


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编号	名称
BTN120690	红霉素溶液
BTN101002	KOD DNA聚合酶
BTN80203	PAGE胶miRNA柱式回收试剂盒
BTN81205	一站式Tricine-SDS-PAGE套装
BTN80814	Bradford法蛋白定量试剂盒
BTN130941	木材DNA提取试剂盒
BTN131211	96孔板PCR片段纯化回收试剂盒(真空法)
BTN120720	柱式冻存血液DNA提取试剂盒
BTN120415	终点显色法内毒素定量试剂盒
BTN60309	RNase A溶液(2mg/mL)
BTN130938	痰液采集器
BTN131212	PCR Mix染料
BTN90502	AMV逆转录酶
BTN120512	即用型蓝白T载体B型(T7-T3，有MCS)
BTN130955	大提柱式Ti质粒DNA提取试剂盒
BTN70701	柱式病毒DNA提取试剂盒
BTN90501	Tth DNA聚合酶
BTN120654E	Southern DNA Marker Oligo(生物素标记)
BTN51210	超快核酸电泳液(干粉)
BTN70503S	DNA marker(200-5000bp)
BTN131122	考马斯亮蓝R-250
BTN160903	可调式易错PCR试剂盒
BTN3090	表面RNase清除剂
BTN70503T	DNA marker(250-15000bp)
BTN131272	Masson三色染色试剂盒
BTN120653B	填入法DNA末端标记试剂盒(生物素标记dUTP)
BTN121004	大肠杆菌Rosetta(DE3)化学感受态细胞
BTN130847	柱式白色念球菌RNA提取试剂盒
BTN3621	微量DNA助沉剂
BTN131232	壮观霉素溶液
BTN60902	Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH7.0)(不含RNase)
BTN120504	柱式藻类RNA大量提取试剂盒
BTN131082	重组蛋白L
BTN131053	DTT(蛋白级)
BTN131081	重组蛋白A/G
BTN130989	白细胞裂解液
BTN101207	1M Tris-HCl(pH8.5)(DNA级)
BTN101121	软骨RNA柱式提取试剂盒
BTN130992	柱式酵母DNA提取试剂盒(玻璃珠法)
BTN100864	电泳级丙*(代"烯")酰胺干粉型
BTN120408	绿豆核酸酶