一站式GST标记蛋白质微量纯化套装(含溶菌酶和核酸酶)促销

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百奥莱博专业生产销*(代"售")一站式GST标记蛋白质微量纯化套装(含溶菌酶和核酸酶)促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：一站式GST标记蛋白质微量纯化套装(含溶菌酶和核酸酶)促销
品牌：百奥莱博
编号：BTN111116B
英文名：One-Stop GST-Tagged Protein Miniprep Pack(B)
产地：国产|进口
重组蛋白N端的GST谷胱甘肽S转移酶能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，其原理如下：


产品特点：
1．一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达GST 标记蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可，非常方便。
2．专一性强，一次过柱即可获得纯度高达95%的GST-标记蛋白。
3．只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的GST 标记蛋白。
4．每次可以处理20mL的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5．提供4mL浓度为50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附5-10mg GST 标记蛋白质。
6．本介质可以反复使用多次。

试剂盒组成：

 

成分	20次(A)	20次(B)
谷胱甘肽-Agarose介质,50%	4ml	4ml
10×PBS缓冲液	100ml	100ml
溶液A	1ml	无
GST洗脱缓冲液成分一	25ml	25ml
GST洗脱缓冲液成分二	约80mg	约80mg
溶菌酶(20KU/mg)	无	30mg
Benzonase(2U/μL)	无	20μl
PMSF(10mg/mL)	0.5ml	0.5ml
6mL层析柱(带筛板)	1套	1套
说明书	1份	1份

储存条件：常温运输和保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需低温运输。收到货后，介质需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：
1．每步得到的样品最好都留存少量作为SDS-PAGE分析的对照，在下面描述中就不再提醒。
2．本实验需要用到的1×PBS缓冲液可用自备的超纯水稀释本试剂盒提供的10×PBS缓冲液而得。PBS缓冲液用超纯水稀释后极其容易长细菌，注意防止污染。
3．GST 洗脱液的配制方法是将约80mg GST 洗脱液成分二干粉全部加入到GST 洗脱液成分一溶液中，摇晃直到干粉全部溶解即得GST 洗脱液，分装成小份放-20℃保存，每次用一管。

一、重组蛋白的表达和细菌收集
1．37℃振荡培养20mL含表达质粒的细菌到OD600=0.6-0.8。
2．加IPTG 到终浓度为0.1mM，30℃振荡培养3小时或22℃振荡培养8小时(或过夜)。
3．4℃ 5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清。
4．用1×PBS缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000g离心10分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。

二、细胞裂解
5．如果用本产品A型，用1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(1mL 1×PBS缓冲液+50μl溶液A+ 25μl 10mg/mL的PMSF溶液)重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选1K-10K 频率处理15次，每次20秒，间隔1分钟(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠，否则会堵塞层析柱。
6．如果用本产品B型，在1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(在20mL 1×PBS缓冲液中加入所有30mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成1mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置)中加入25μl 10mg/mL的PMSF溶液和1μl Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置30分钟，得到细菌裂解物。
7．将超声或酶法细胞裂解物在13000 g 4℃离心10分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性GST 标记蛋白。

三、层析柱的制备和GST蛋白纯化
8．摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据GST蛋白产量决定，100mL菌液一般使用200μL介质即可)。下列步骤各溶液的用量均针对200μL介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9．用5mL预冷的1×PBS缓冲液洗柱。
10．将第7 步得到的上清液(含可溶性GST标记蛋白)上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于SDS-PAGE电泳。GST和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在0.2-1mL/分钟即可。如要提高GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合30分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11．用0.5-2mL 1×PBS缓冲液洗柱，收集并保存穿透液(含杂蛋白)。
12．用0.2-1mL GST洗脱液洗柱，收集并保存穿透液(含GST 标记蛋白)。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在4℃放置，需立即用于后续处理(如浓度测定或SDS-PAGE电泳)或-80℃长期放置。
13．对收集的2种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或SDS-PAGE分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用Bradford法或OD 检测法(1 OD280 约等于0.5mg/mL蛋白)测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于GST的分子量为26 KD，所以在SDS-PAGE胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大26 KD。

附：GST柱的恢复(本试剂盒不含所需试剂)
1．用3倍体积的6M盐*(代"酸")胍处理柱子10分钟。
2．用3倍体积的超纯水处理柱子10分钟。
3．用3倍体积的缓冲液一(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH8.5)处理柱子10分钟。
4．用3倍体积的缓冲液二(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH4.5)处理柱子10分钟。
5．再重复3-4 步两次。
6．用3倍体积的超纯水处理柱子3次。
7．用3倍体积的1×PBS缓冲液处理柱子2次。
8．堵上漏口，加3倍体积的1×PBS缓冲液待用。若长时间不用，则第7步和第8步的1×PBS改成20%的乙醇。

我公司的一站式GST标记蛋白质微量纯化套装(含溶菌酶和核酸酶)促销，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·中性亲和素蛋白
编号：BTN131090
英文名称：Nuetral Avidin
规格：10mg
中性亲和素蛋白是一种去糖基化形式的亲和素，因此对外源凝集素的结合降低至检测不出的水平，而对结合生物素的亲和性(Ka=1015M-1)没有任何损失。中性亲和素蛋白等电点为中性，这样可以避免非特异的结合。另外它表面的赖*酸残基让它可以被衍生或者进行蛋白标记。中性亲和素蛋白的分子量为60000，对生物素的特异结合能力大约为14μg/mg蛋白，接近理论最大活性。

产品特点：
➤相比抗组*酸抗体背景更低。
➤可进行抗体剥离和重新检测。
➤ 去糖基化，将外源凝集素结合降低至不可检测水平。
➤可在组织化学中用于生物素封闭试剂。
➤ 结合能力为11-17μg生物素/mg中性亲和素蛋白。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。


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·RNase抑制剂(猪源)
编号：BTN130834
英文名称：RNase Inhibitor From Pig
规格：500U

·硫氧还蛋白
编号：BTN130870
英文名称：Thioredoxin
规格：5mg
硫氧还蛋白是一类广泛存在的热稳定的作为*载体的蛋白质(约12kDa)。在许多还原反应中作为*供体，特别是核苷二磷酸变成相应的脱氧产物和光依赖性的还原反应中。也以结构域的形式出现于二硫键异构酶中，在蛋白折叠过程中，硫氧还蛋白可以催化二硫键的正确形成。

·Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH7.5)(不含RNase)
编号：BTN60903
英文名称：RNase-Free Tris-HCl Solution
规格：250mL
硫氧还蛋白是一类广泛存在的热稳定的作为*载体的蛋白质(约12kDa)。在许多还原反应中作为*供体，特别是核苷二磷酸变成相应的脱氧产物和光依赖性的还原反应中。也以结构域的形式出现于二硫键异构酶中，在蛋白折叠过程中，硫氧还蛋白可以催化二硫键的正确形成。

·cDNA第二链合成试剂盒
编号：BTN131005
英文名称：Second Strand cDNA Synthesis Kit
规格：30次
cDNA第二链合成的原理是用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口，再用DNA Polymerase I通过切口平移(nick translation)反应进行RNA链取代合成cDNA第二链。

产品特点：
1. 即开即用，含有合成cDNA第二链的所有试剂。
2. 所得双链cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交等。

试剂盒组成：

成分	规格
5×cDNA第二链合成缓冲液	480μl
20×cDNA第二链合成酶混合液	120μl
0.2 M EDTA溶液	120μl
超纯水	2ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
一、合成cDNA第一条链
本试剂盒不提供cDNA第一链合成试剂，用户需自备相关试剂合成cDNA第一链。
二、合成cDNA第二链
1.在冰浴上向已经完成合成cDNA第一条链的反应体系中依次加入下表试剂：

成分	用量
cDNA第一链合成反应液	10μl
超纯水	48μl
cDNA第二链合成缓冲液	16μl
cDNA第二链合成酶混合液	4μl
轻柔吹打混匀后，短暂离心，16℃保温2小时
自备的T4 DNA聚合酶	2μl
轻柔吹打混匀后，16℃继续保温30分钟
0.2M EDTA溶液	4μl

注：如果不需要将双链cDNA平末端化，则可以跳过T4 DNA聚合酶处理步骤。
2.电泳5μl检测cDNA质量。如果cDNA在0.5-10Kb的范围内呈模糊一片，则cDNA合格。如果没看见cDNA或有其他异常，需查找原因后再继续。
3. 所得cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交等实验。


一站式GST标记蛋白质微量纯化套装(含溶菌酶和核酸酶)促销关键词：One-Stop GST-Tagged Protein Miniprep Pack(B),一站式GST标记蛋白质微量纯化套装(含溶菌酶和核酸酶),BTN111116B


·虾碱性磷酸酶(SAP)
编号：BTN120403
英文名称：Shrimp Alkaline Phosphatase
规格：300U
虾碱性磷酸酶与大肠杆菌来源的碱性磷酸酶同样，催化所有磷酸单酯的水解，不能催化磷酸二酯以及磷酸三酯的水解，也能催化ATP等焦磷酸键水解。但该酶与大肠杆菌来源的BAP以及小牛肠来源的CIAP 不同，通过65℃，15分钟的热处理，可使酶完全不可逆失活。

产品用途：
1．去除DNA片段的5´-末端的磷酸基。防止线状DNA的自身环化(Self-Ligation)。
2．除去PCR反应后残存的dNTP。PCR产物进行测序时，在反应体系中如果有多余的Primer和dNTP，将影响测序反应的正常进行。使用Exonuclease I分解残存的Primer；用SAP处理可降解多余的dNTP，之后不需要对PCR产物进行精制，立即可以进行测序反应。

产品组成：

成分	规格
虾碱性磷酸酶(1U/μL)	300U
10×Buffer	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：在37℃、pH9.8的条件下，1分钟内水解对硝基*(代"*")磷酸盐生成1μmol的对硝基*(代"*")酚所需要的酶量定义为1个活性单位。

纯度：

1．5U的本酶和1μg的λDNA-Hind III片段在37℃、pH7.5的条件下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
2．5U的本酶和1μg的16S，23S rRNA在37℃、pH7.5的条件下反应1小时，RNA的电泳谱带不发生变化

使用举例：
1．在1.5mL离心管中配制下列反应液，定容至50μL。

成分	用量
DNA Fragment	1～10pmol
SAP(1～5μL)	1～5U
10×Buffer	5μL
dH2O	up to 50μL

2．37℃反应15～30分钟。
3．65℃反应15分钟(加热失活)。
4．加入2.5μL的3M NaCl(终浓度150mM)。
5．乙醇沉淀加入125μL(2.5倍量)的预冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟，离心。
6．加入200μl的70％冷乙醇清洗沉淀后，干燥。
7．TE Buffer(<20μL)溶解沉淀。

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