一站式GST标记蛋白质微量纯化套装(含溶菌酶和核酸酶)打折促

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")一站式GST标记蛋白质微量纯化套装(含溶菌酶和核酸酶)打折促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应一站式GST标记蛋白质微量纯化套装(含溶菌酶和核酸酶)打折促销，产品信息：

类别：蛋白质研究

英文名：One-Stop GST-Tagged Protein Miniprep Pack(B)

产品名	产品编号	包装规格
一站式GST标记蛋白质微量纯化套装(含溶菌酶和核酸酶)	BTN111116B	20次

编号：BTN111116B

规格：20次

英文名：One-Stop GST-Tagged Protein Miniprep Pack(B)

品牌：百奥莱博

产地：北京

重组蛋白N端的GST谷胱甘肽S转移酶能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，其原理如下：

 

产品特点：

1．一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达GST 标记蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可，非常方便。

2．专一性强，一次过柱即可获得纯度高达95%的GST-标记蛋白。

3．只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的GST 标记蛋白。

4．每次可以处理20mL的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。

5．提供4mL浓度为50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附5-10mg GST 标记蛋白质。

6．本介质可以反复使用多次。

 

试剂盒组成：

 

成分	20次(A)	20次(B)
谷胱甘肽-Agarose介质,50%	4ml	4ml
10×PBS缓冲液	100ml	100ml
溶液A	1ml	无
GST洗脱缓冲液成分一	25ml	25ml
GST洗脱缓冲液成分二	约80mg	约80mg
溶菌酶(20KU/mg)	无	30mg
Benzonase(2U/μL)	无	20μl
PMSF(10mg/mL)	0.5ml	0.5ml
6mL层析柱(带筛板)	1套	1套
说明书	1份	1份

 

储存条件：常温运输和保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需低温运输。收到货后，介质需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需-20℃保存，有效期一年。

 

使用方法：

注意：

1．每步得到的样品最好都留存少量作为SDS-PAGE分析的对照，在下面描述中就不再提醒。

2．本实验需要用到的1×PBS缓冲液可用自备的超纯水稀释本试剂盒提供的10×PBS缓冲液而得。PBS缓冲液用超纯水稀释后极其容易长细菌，注意防止污染。

3．GST 洗脱液的配制方法是将约80mg GST 洗脱液成分二干粉全部加入到GST 洗脱液成分一溶液中，摇晃直到干粉全部溶解即得GST 洗脱液，分装成小份放-20℃保存，每次用一管。

 

一、重组蛋白的表达和细菌收集

1．37℃振荡培养20mL含表达质粒的细菌到OD600=0.6-0.8。

2．加IPTG 到终浓度为0.1mM，30℃振荡培养3小时或22℃振荡培养8小时(或过夜)。

3．4℃ 5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清。

4．用1×PBS缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000g离心10分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。

 

二、细胞裂解

5．如果用本产品A型，用1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(1mL 1×PBS缓冲液+50μl溶液A+ 25μl 10mg/mL的PMSF溶液)重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选1K-10K 频率处理15次，每次20秒，间隔1分钟(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠，否则会堵塞层析柱。

6．如果用本产品B型，在1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(在20mL 1×PBS缓冲液中加入所有30mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成1mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置)中加入25μl 10mg/mL的PMSF溶液和1μl Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置30分钟，得到细菌裂解物。

7．将超声或酶法细胞裂解物在13000 g 4℃离心10分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性GST 标记蛋白。

 

三、层析柱的制备和GST蛋白纯化

8．摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据GST蛋白产量决定，100mL菌液一般使用200μL介质即可)。下列步骤各溶液的用量均针对200μL介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。

9．用5mL预冷的1×PBS缓冲液洗柱。

10．将第7 步得到的上清液(含可溶性GST标记蛋白)上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于SDS-PAGE电泳。GST和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在0.2-1mL/分钟即可。如要提高GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合30分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。

11．用0.5-2mL 1×PBS缓冲液洗柱，收集并保存穿透液(含杂蛋白)。

12．用0.2-1mL GST洗脱液洗柱，收集并保存穿透液(含GST 标记蛋白)。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在4℃放置，需立即用于后续处理(如浓度测定或SDS-PAGE电泳)或-80℃长期放置。

13．对收集的2种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或SDS-PAGE分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用Bradford法或OD 检测法(1 OD280 约等于0.5mg/mL蛋白)测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于GST的分子量为26 KD，所以在SDS-PAGE胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大26 KD。

 

附：GST柱的恢复(本试剂盒不含所需试剂)

1．用3倍体积的6M盐*(代"酸")胍处理柱子10分钟。

2．用3倍体积的超纯水处理柱子10分钟。

3．用3倍体积的缓冲液一(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH8.5)处理柱子10分钟。

4．用3倍体积的缓冲液二(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH4.5)处理柱子10分钟。

5．再重复3-4 步两次。

6．用3倍体积的超纯水处理柱子3次。

7．用3倍体积的1×PBS缓冲液处理柱子2次。

8．堵上漏口，加3倍体积的1×PBS缓冲液待用。若长时间不用，则第7步和第8步的1×PBS改成20%的乙醇。

一站式GST标记蛋白质微量纯化套装(含溶菌酶和核酸酶)打折促销专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

关键词：含溶菌酶和核酸酶,一站式GST标记蛋白质微量纯化套装,BTN111116B,One-Stop GST-Tagged Protein Miniprep Pack(B),一站式GST标记蛋白质微量纯化套装(含溶菌酶和核酸酶)

我公司依托国内外技术研发人才的优势，公司的销*(代"售")额保持高速增长，企业规模不断扩大，拥有专业的技术研发团队，长期致力于ELISA试剂盒、生物试剂(包括)的研发，为客户提供引物设计与合成、免疫组化、PCR定量服务等一系列实验代测服务。

更多有关一站式GST标记蛋白质微量纯化套装(含溶菌酶和核酸酶)打折促销的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

编号	类别	名称
BTN130621	工具酶	Taq DNA连接酶
BTN60203	克隆与表达	硫*(代"酸")新霉素干粉
BTN140431	克隆与表达	大肠杆菌XL10-Gold化学感受态细胞
BTN100875	核酸电泳和回收	DNA非变性PAGE上样液
BTN130856	工具酶	T4 RNA连接酶2(截短型)
BTN131279	其他细胞生物学试剂	戊二醛二甲砷*(代"酸")*缓冲固定液
BTN3120	核酸电泳和回收	微量RNA助沉剂
BTN71205	DNA纯化	柱式土壤DNA提取试剂盒
BTN100408	其他生化试剂	8M盐*(代"酸")胍溶液
BTN100103B	克隆与表达	裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂盒
BTN120421	工具酶	T4 RNA连接酶
BTN120420	工具酶	核酸外切酶III
BTN131088	蛋白质研究	荧光素(FITC)标记亲和素
BTN140635	细胞及免疫学	XTT细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒
BTN130640	工具酶	核酸内切酶V
BTN131211	核酸电泳和回收	96孔板PCR片段纯化回收试剂盒(真空法)
BTN100880	核酸电泳和回收	四甲基乙二*(代"胺")(电泳级)
BTN130868	工具酶	人二硫键异构酶
BTN100303	DNA纯化	柱式真菌DNA提取试剂盒(玻璃珠法)
BTN130624	工具酶	9°N DNA连接酶
BTN100809	其他生化试剂	20×SSPE(pH7.4)
BTN140209	蛋白质研究	考马斯亮蓝R-250染色液
BTN130889	蛋白质研究	昆虫细胞裂解液
BTN100940	核酸扩增(PCR)	石蜡包埋组织全基因组扩增试剂盒

 

我公司正在优惠促销蛋白质研究等系列产品，期待您的咨询选购一站式GST标记蛋白质微量纯化套装(含溶菌酶和核酸酶)打折促销。