北京His标记蛋白质微量纯化套装(含核酸酶和溶菌酶)现货供应

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百奥莱博专业生产销*(代"售")北京His标记蛋白质微量纯化套装(含核酸酶和溶菌酶)现货供应，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京His标记蛋白质微量纯化套装(含核酸酶和溶菌酶)现货供应
编号：BTN100102B
规格：2mL
产地：国产|进口
本产品基于His-Ni亲和层析的蛋白质纯化方法是目前分离纯化重组表达蛋白质的重要方法，本产品就是专门用于上述实验的一站式产品。

产品特点：
1.一站式套装，含所需的介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达His蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达95%的His-标记蛋白。
3.变性和非变性条件均可使用，也适用于纯化包涵体中的His标记蛋白。
4. 每次可以处理20mL的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供4mL浓度为50%的Ni-Agarose介质，其最大载量为20-30mg His标记蛋白质/mL介质。
6. 介质为CL-6B琼脂糖，含四个Ni离子螯合基团，比只有四个Ni离子螯合基团的Ni-IDA更有效。
7. 本介质可以反复使用多次。
试剂盒组成：

 

成份	规格
Ni-Agarose介质，50%	4mL
1M咪唑溶液	25mL
1M Tris-HCl pH7.9	25mL
5M NaCl溶液	25mL
溶菌酶(20 KU/mg)	30mg(A型无)
Benzonase(2U/μL)	20μL(A型无)
盐*(代"酸")胍	6g
尿素	20g
PMSF(10mg/mL)	0.5mL
亲和层析柱，6mL	1套
使用手册	1份

储存条件：常温运输和保存，但介质需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF需-20℃保存，有效期一年。

自备试剂：去离子水、20%乙醇、0.45μm滤膜

使用方法：
1．将Ni-Agarose介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据His蛋白产量决定，其最大载量为20-30mg His标记蛋白质/mL介质，请根据实验需要取适量的Ni-Agarose介质加入层析柱)。
2．用5倍柱体积(指填料的体积，下同)自备去离子水洗柱，共三次。
3．用5倍柱体积的新配结合液洗柱(配方如下，以10mL为例)，共三次：

成分	用量	在结合缓冲液中浓度
1M Tri-HCl(pH7.9)	0.2mL	20mM
1M咪唑溶液	0.1mL	10mM
5M NaCl溶液	1mL	500mM
自备去离子水	8.7mL	-

4．室温5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清，沉淀(约100mg)放冰上待用或放-80℃保存。最好用不加诱导物的菌液做对照样。
5．如果用本产品A型：加入1mL冰浴的结合液(1mL菌液需要用50μL结合液)，再加入25μL PMSF(10mg/mL)溶液，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。如果用本产品B型：加入1mL冰浴的含溶菌酶的结合液(先取20mL结合液，加入所有30mg溶菌酶干粉，溶解后分装成1mL/管，剩余的-20℃放置)，再加入25μL PMSF(10mg/mL)溶液和1μL Benzonase，冰上放置30分钟。
6．4℃下13000-15000g离心10分钟，去除残留细胞和细胞碎片以防堵柱，收集上清，留样做SDS-PAGE电泳对照。如果要纯化裂解液中可溶部分的His标记蛋白，则直接进入第7步；如果要纯化裂解液中包涵体(沉淀部分)中的His标记蛋白，则直接进入第12步。

A、纯化细胞裂解液中可溶部分的His标记蛋白
7．将上步得到的上清液上柱，让重力使裂解液自然流出。如要提高His标记蛋白与介质的结合效率，可用试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合30分钟或过夜。
8．用10倍柱体积结合液洗柱(配方见上表)，收集并保存穿透液(含杂质或没被吸附的His标记蛋白，可做SDS-PAGE电泳的对照)。
9．如果用一步式洗脱法(适合已经找到最佳咪唑浓度的情况)，则直接用适量的新鲜配制的洗脱液洗柱，收集并保存穿透液(含His标记蛋白)。洗脱液的配方如下(以1mL体积和最佳咪唑浓度是500mM为例)：

成分	用量	在洗脱液中的浓度
1M Tri-HCl(pH7.9)	20μL	20mM
1M咪唑溶液	500μL	500mM
5M NaCl溶液	100μL	500mM
自备去离子水	380μL	-

10．如果用多步式洗脱(适合不知道最佳咪唑浓度或一步式洗脱杂质多的情况)，则按上表配制一系列咪唑浓度不同(如40、60、100、200、300和500mM)，其他成分浓度不变的洗液，按从低到高的顺序洗涤并收集样品，SDS-PAGE电泳检测His标记蛋白所在的区域。
11．洗脱后，依次使用10倍柱体积的去离子水洗涤柱子，再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没)，最后堵住层析柱下端的漏口，4℃保存待下次使用。

B、纯化包涵体中His标记蛋白
12．将第6步离心得到的包涵体沉淀重悬于1-3mL含盐*(代"酸")胍结合液中或1-3mL含尿素结合液中(建议优先使用尿素做变性剂，因为得到的洗脱液可以直接跑SDS-PAGE，而用盐*(代"酸")胍的洗脱液需先除盐后才能电泳)。冰浴1小时以使包涵体溶解，期间可轻柔摇晃几次。含变性剂的结合液配方如下(以10mL为例)：

成分	含盐*(代"酸")胍结合液	含尿素结合液
1M Tri-HCl(pH7.9)	200μL	200μL
5M NaCl溶液	1mL	1mL
盐*(代"酸")胍(MW=95.6)	5.7g	无
尿素(MW=60.1)	无	4.8g
自备去离子水	加水到10mL	加水到10mL

13．室温10000×g离心20分钟，沉淀为未溶解的包涵体。将上清(含溶解后的His标记蛋白)以自备的0.45μm滤膜过滤。
14．将滤过液上柱，后续纯化步骤同第7-第11步。只是所用结合液和洗脱液均含变性剂，含变性剂的洗脱液配方见下表(以1mL为例)：

成分	含盐*(代"酸")胍洗脱液	含尿素洗脱液
1M Tri-HCl(pH7.9)	20μL	20μL
1M咪唑溶液	500μL	500μL
5M　NaCl溶液	100μL	100μL
盐*(代"酸")胍(MW=95.6)	0.57g	无
尿素(MW=60.1)	无	0.48g
自备去离子水	补水到1mL	补水到1mL

注意事项：整个实验需避免含巯基乙醇、DTT和EDTA等成分。若洗脱液不能将His标记蛋白洗脱下来，可改用pH6.5- 4.5的pH递减的Tris-HCl洗脱。

更多有关北京His标记蛋白质微量纯化套装(含核酸酶和溶菌酶)现货供应的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·一管式琼脂糖凝胶DNA回收试剂
编号：BTN60706
英文名称：One-tube DNA agarose gel recovery reagent
规格：30次
本产品可以直接从溶化的琼脂糖凝胶中沉淀回收单双链DNA的产品，也堪称最快速的胶回收试剂,操作时间只有玻璃奶式和柱式胶回收方法的1/3左右。本产品也可以用于单双链RNA胶回收。

产品特点：
1.超快，整个过程不到15分钟(对一个样品而言)，由溶胶(3分钟)，放置(2分钟)，沉淀(5分钟)和两次洗涤(各1-2分钟)几步组成。
2. 纯度高，回收产物可以直接用于连接、酶切、PCR、测序等各种反应，不影响后续酶反应。
3. 回收率高，一般大于50%。
4.适用范围广，可用于回收普通琼脂糖凝胶能够分离的DNA片段(一般在100bp-50 Kb 之间)，而柱式同类产品几乎都不能回收50 Kb的超大片段。
5.一管式操作，不需要任何样品转移步骤，使大片段DNA 保持完整，同时减少了污染的可能。
6. 既可用于回收单双链DNA，又可用于回收单双链RNA。
7.扩容性好，可以在一个离心管中(包括15mL或50mL离心管)进行大规模回收，没有最大吸附量的限制；而柱式胶回收试剂都受最大吸附量的限制。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	9ml
溶液B	3ml
溶液C	30ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。
  溶液A呈淡黄色，溶液B呈红色，如果颜色发生变化，则表示pH已经改变，请弃之不用。溶液C为无色液体，会在瓶底产生少量晶体状产生沉淀，用前无需溶化，避开沉淀直接取上清液使用)。

使用方法：
1.从琼脂凝胶上切下目的DNA片段，放入1.5mL离心管中。尽可能多地去掉不含DNA的胶。如果方便最好称重以便估计需要的溶胶液(空的1.5mL离心管EP 约0.9 克，一片普通胶片的重量在0.05-0.1 克左右)。
2. 按0.1 克胶加300μL溶液A的比例加入溶液A，65℃保温3分钟使胶融化。其间可用摇晃几次以促进凝胶融化。如果放量使用，溶化胶的时间可能需要延长。
3. 待胶完全溶化后，按0.1 克胶加100μL溶液B的比例加入溶液B，充分混匀。如果回收20 Kb以上的DNA片段，混匀时需要温和震荡；对20 Kb以下的DNA片段，可以剧烈震荡。
4.室温静置至少2分钟，此时管内将出现大量红色颗粒状沉淀。此步十分关键，不能省略而直接离心。
5. 13000 g室温离心5分钟后，小心吸弃上清，管底将有黄豆大小的红色沉淀。
6. 加入0.8mL溶液C，充分震荡混匀。注意：溶液C瓶底有晶体状沉淀，用前无需溶解，但取用溶液C时需要避开沉淀。
7. 13000 g室温离心2分钟，小心吸弃上清，管底将有芝麻大小的白色沉淀。
8. 再用0.2mL溶液C重复第6-7 步一次，管底还有芝麻大小的白色沉淀。
9.小心吸弃上清后即得纯化的DNA沉淀，加入少量TE或水，充分吹打溶解。最后还会有少量白色不溶沉淀，属于正常现象。

疑难解答：
Q：电泳为何不能检测到回收的DNA？
A：最可能原因是各步加入溶液后没有充分震荡混匀，其次是沉淀在各步吸弃上清时候不小心吸走而丢失，三是溶液A和溶液B的pH发生改变。
Q：电泳时为何有残留荧光物在加样孔中？
A：可能是琼脂糖凝胶中的杂质吸附的DNA，吸取DNA样品时最好短暂离心，只取上清液。这些不溶杂质一般不影响后续反应。使用高纯度的琼脂糖可以减少杂杂质的污染。我们一般使用OXOID的琼脂糖，得到的DNA可以用于常见的分子生物学后续反应。


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·CpG甲基转移酶(M.SssI)
编号：BTN120511
英文名称：CpG Methyltransferase(M.SssI)
规格：100U
CpG甲基转移酶(M.Sssl)能识别双链DNA上的二核苷酸序列并甲基化其中的所有胞嘧啶残基(C5)，其甲基化过程如下图所示：


产品用途：
1．阻止限制性内切酶的切割。
2．CpG甲基化依赖性基因表达的研究。
3．研究特异序列与DNA大沟的相互作用。
4．改变DNA的物理特性。
5．对DNA统一进行［3H］ 标记。
6．减少限制性内切酶的酶切位点数目，提高限制性内切酶的特异性。

备注
1．CpG甲基转移酶(M.Sssl)可以特异性地模拟高等真核生物基因组的修饰模式，因而可用于研究高等级真核生物体内胞嘧啶甲基化的功能。与哺乳动物甲基转移酶不同，CpG甲基转移酶对未甲基化和半甲基化的DNA底物的甲基化效率相同，因此该酶是更为有效的DNA修饰工具。
2．只要限制性内切酶的识别位点含有CG序列或此二核苷酸的重叠序列，CpG甲基转移酶均能有效地阻止其发挥切割活性。需要注意的是，CpG甲基转移酶使DNA甲基化，而E.coli中的Mcr和Mrr的限制作用不受甲基化影响，故应使用Mcr-、Mrr-的E.coli菌株作为转化的宿主菌。
3．胞嘧啶残基被甲基化后，可影响DNA的物理特性，如：降低Z-DNA形成的自由能，增加DNA的螺旋程度，改变DNA十字形突出的动力学特性。由于在化学测序过程中联*的反应性降低，5-甲基胞嘧啶的位置易于确定下来。
4．MgCl2并不是必需的辅因子。Mg2+存在时，M.Sssl更倾向于分散甲基化，而不是连续甲基化，同时，M.Sssl还具有拓扑异构酶的活性。

活性定义：1单位指在20μL反应体系中，37℃条件下，1小时能保护1μgλDNA不被BstUl限制性内切酶切割所需要的酶量。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。


北京His标记蛋白质微量纯化套装(含核酸酶和溶菌酶)现货供应关键词：BTN100102B,His标记蛋白质微量纯化套装(含核酸酶和溶菌酶),One-Stop His-Tagged Protein Miniprep Pack(B)

(1S,2S)-1,2-二*基乙二*(代"胺") Digitonin 29841-69-8
77-86-1 TRIS 三羟甲基*基甲*(代"烷")
ARB11573 人基质金属蛋白酶7(MMP-7)定量分析 Human matrix metalloproteinase 7,mmp-7 ELISA KIT
ARB11469 人胰岛素样生长因子1(IGF-1)elisa检测操作说明书 Human insulin-like growth factors 1,igf-1 ELISA KIT
ARB11309 人促卵泡素(FSH)代做ELISA实验 Human follicle-stimulating hormone,fsh ELISA KIT
F050320 大鼠IgG抗体 Rats IgG
PY01-172  甲基红  25克  
紫脲酸铵 Dithiooxamide 3051-09-0
DR0101 琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒
ARB11945 大鼠8-羟基鸟嘌呤DNA糖基化酶(OGG)elisa检测操作说明书 Rat 8-oxoguanine dna glycosylase,ogg ELISA KIT
BTN130506 海藻糖溶液,1.5M,PCR级 Trehalose Solution,PCR Grade
BL0878 兔抗人IgM免疫血清 0.5ml
ARB10947 人谷胱甘肽(GSH)Elisa分析 Human glutathione,gsh ELISA KIT
ARB12107 大鼠可溶性CD30配体(sCD30L)尿液中含量检测 Rat soluble cluster of differentiation 30 ligand,scd30l ELISA KIT
ELISA包被缓冲液(10×)   100ml|500ml
SJ0327 GDP Na2   5"-二磷酸鸟苷二*
铍试剂Ⅰ Lithium citrate 607-96-5
F040303 人IgM抗原 Human IgM
赖*酸琼脂糖凝胶4B VE
ARB12374 大鼠肾损伤分子1(KIm-1)检测服务 Rat kidney injury molecule 1,kim-1 ELISA KIT
BL0826 HRP标记兔抗HRP抗体
PY08-028  一次性血液增菌培养基 10ml  10支/盒，用于从血液中分离病原菌

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