大肠杆菌HB101化学感受态细胞北京厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博供应的大肠杆菌HB101化学感受态细胞北京厂家用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多大肠杆菌HB101化学感受态细胞等克隆与表达产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：大肠杆菌HB101化学感受态细胞北京厂家
英文名：E.coli HB101 Chemical Competent Cell
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
规格：0.1mL*10
 HB101菌株是E.coli K12菌株与E.coli B菌株的杂合产物(同时也是Stbl3的原始菌株)。recA13突变可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率；但不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。hsdS20 背景使HB101缺失内切酶系统，增强了外源DNA的稳定性和提取质量。本产品是采用大肠杆菌HB101特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。

产品特点：
1. 具有链霉素抗性。
2.基因型：F- mcrB mrr hsdS20(rB- mB-)recA13 leuB6 ara-14 proA2 lacY1galK2 xyl-5 mtl-1rpsL20((strR)glnV44λ-。
3. 不存在 lacIqZΔM15，不可用于蓝、白斑筛选。
4. 该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞处于冰水混合状态时，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μL感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴25分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟，晃动会降低转化效率。
4. 每个离心管中加入450μL 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，200rpm 振荡培养60分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃倒置培养12-16小时。

注意事项：
1. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
2. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(5000rpm，1分钟)收菌后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
3. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
4. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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·柱式探针纯化试剂盒
编号：BTN121122
英文名称：Column Probe Purification Kit
规格：10次
本试剂盒是基于分子排阻层析原理的、专门用于纯化同位素和非同位素标记的核酸探针的试剂盒。在分子排阻层析过程中，大分子(标记的核酸探针或Oligo探针)将绕过层析介质，快速穿透出层析柱，小分子(未参入的核苷酸)将进入层析介质中，缓慢穿透出层析柱。根据这一时间差而将两者分开。此过程的示意图如下：


产品特点：
1. 即开即用，提供纯化所需要的所有溶液和介质，不需要单独准备每种试剂，免去用户自己摸索条件。
2.适用于PCR 标记、随机引物标记、切口平移和填入法标记。
3. 能去掉绝大部分的未标记物、盐离子等小分子。
4. 足够10次纯化使用，每次可以纯化50μl的标记反应液。
5.可用于DIG、生物素、Cy3、Cy5等非同位素标记的DNA和RNA探针(由于标记分子带非极性基团，容易进入有机相，因此这些探针不能用传统的酚*仿抽提-乙醇沉淀法纯化)。

试剂盒组成：

 

成分	规格
Sephadex G50 介质	15ml
0.7mL离心柱及管套	10套
TE溶液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
注意：由于非同位素标记的探针浓度一般都比较低，非常容易吸附到枪头或离心管的表面，造成探针的损失，因此最好使用硅化的离心管和枪头。

1. 摇晃Sephadex G50介质至均匀，迅速转移0.5mL 到离心柱中，套上套管(又叫收集管)。
2. 2000rpm室温离心1分钟，Sephadex G50介质将压紧在柱子里面。
3. 倒掉套管中的穿透液，再加0.5mL的摇晃后得到的Sephadex G50 介质，2000rpm室温离心1分钟。
4. 经上述步骤会得到体积约为0.5mL 压紧后的Sephadex G50介质。如不足，再加入少量的G50介质离心，直到体积达到0.5mL左右。倒掉套管中的穿透液。
5.在柱子中Sephadex G50 界面的上面加入50μl TE缓冲液，套上套管，2000rpm室温离心1分钟，测量收集管中穿透液的体积。
6. 重复上步3-5次，直到收集管中穿透液的体积跟加入的体积一样(50μL)。
7. 将50μl的标记探针(必须使用50μl样品。如果没有50μl，需要用TE缓冲液或水补足到50μl)加到柱子中Sephadex G50 界面的上面，套上一个自备的(最好是硅化的)离心管。
8. 2000rpm室温离心1分钟，离心管中的穿透液将含标记探针，未参入的标记物将滞留在介质中。
9.电泳或点杂交检测探针回收效率后直接使用或放-20℃长期保存。


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·单细胞全基因组扩增试剂盒
编号：BTN100938
英文名称：Single Cell Whole Genome Amplification Kit
规格：30次
本产品是用于从单细胞(或数个细胞)中制备和扩增全基因组的试剂盒，它是整合单细胞裂解液和全基因组扩增试剂盒而成。

产品特点：
1． 即开即用，不需要单独准备所需试剂。
2．可以扩增单个细胞的基因组达上万倍。
3． 具有全基因组扩增的所有特点，包括高产量和高保真性。
4．可使用各种来源的样品，包括培养细胞和胚胎细胞等。
5．产物可用于多种后续试验，包括多重PCR、长片端PCR、定量PCR、克隆、文库构建、单倍型分析、测序、基因芯片分析、各种遗传分析(片段差异，微卫星差异、SNP、STR)等。

试剂盒组成：

成分	规格
单细胞裂解液A	100μl
单细胞裂解液B	100μl
单细胞专用WGA Mix	0.3ml
Phi 29 DNA聚合酶(10U/μL)	15μl
说明书	1份

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将细胞悬浮在自备的PBS缓冲液或其他合适的缓冲液中，在显微镜下用毛细管转移单个细胞(或数个细胞，总体积不超过2.5μL)到含有2.5μl单细胞裂解液A的0.2mL PCR管中，室温放置2分钟。如果使用纯化好的DNA溶液，则直接将2.5μl的DNA溶液和2.5μl的单细胞裂解液A混合，室温放置2分钟。
2. 加入5μl 单细胞裂解液B，95℃保温5分钟，室温短暂离心半分钟。
3. 然后冰上放置5-10分钟。
4. 加入10μl 单细胞专用WGA Mix，轻柔吹打混合均匀。
5. 加入0.5μl Phi 29 DNA聚合酶(10U/μL)，轻柔吹打混合均匀。
6. 30℃保温3-12小时。最好使用PCR仪进行30℃保温并打开热盖保温。如果采用30℃水浴，最好在样品管中加入30-50μl石蜡油以防水分蒸发，因为30℃长时间的水浴也能使水分蒸发到管壁，从而改变反应体系中各成分的浓度、降低WGA反应效率。如果模板DNA量比较高，WGA三小时即可检测到DNA扩增。
7. 65℃保温10分钟使phi29 DNA聚合酶灭活。注：由于phi29 DNA聚合酶有DNA外切活性，所以最好将其灭活以免干扰后续反应。
8. 立即取3-5μl WGA反应液进行电泳检测扩增效果。
 注意：WGA缓冲液中不含有甘油和电泳染料，所以需要先加上样缓冲液。
9.扩增的DNA可以用于后续试验或冰箱长期保存。


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·平末端DNA加A试剂盒
编号：BTN60105
英文名称：dA Tailing Kit
规格：50次
本产品利用Taq DNA polymerase的不依赖于模板的末端转移酶活性，在只有dATP 存在的情况下，在平末端的DNA片段加上一个dA 尾巴，使平末端片段也能被T载体克隆。其流程图如下：


产品特点：
1. 简单，2×Tailing Buffer中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。
2.适用于任何平末端的DNA片段，包括Pfu DNA polymerase等酶合成的DNA片段。
3.产物可以直接用于与T载体的连接。

试剂盒组成：

成分	规格
Taq DNA polymerase(5U/μL)	50μl
2×Tailing Buffer	1.25ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：反应前纯化处理：
用Vent，Deep Vent，Pfu，Pwo等具有3 到5外切活性的DNA聚合酶扩增得到的DNA片段，必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程(如酚/*仿抽提或Proteinase K处理)，否则它们将在加A反应时，切除掉加上的A尾巴，干扰反应。可以采取胶回收和酚/*仿抽提法等常规方法纯化，最后溶解在水或TE中，终浓度以0.1μg/μL为宜。
二：加A反应
在干净的0.5mL或1.5mL离心管中，分别加入下列成分：

回收的DNA片段	0.2-2ug
2×dA Tailing Buffer	25μL
Taq DNA polymerase(5U/μL)	1μL
补水到	50μL
72℃保温2小时

三：反应后处理
加A反应后，Taq DNA pol

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