北京农杆菌EHA101感受态细胞大量库存促销

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百奥莱博专业生产供应北京农杆菌EHA101感受态细胞大量库存促销，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：北京农杆菌EHA101感受态细胞大量库存促销
品牌：百奥莱博
编号：BTN161205
英文名：E.coli EHA101 Rosetta Competent Cell
规格：10×100μL
 EHA101菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签-利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pEHA101(pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有vir基因，vir基因是T-DNA 插入植物基因组必需的元件。pEHA101(pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移。pEHA101(pTiBo542DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签：kan，赋予EHA101菌株卡那霉素抗性，适用于玉米、水稻、烟草等植物的转基因操作。

 本公司生产的EHA101化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pK7WGF2质粒(壮观霉素抗性)检测转化效率>104cfu/μg DNA。EHA101农杆菌的基因型是：C58(rifR)TipEHA101(pTiBo542 D T-DNA)(kanR)Nopaline。

产品组成：

 

成分	规格
EHA101 农杆菌感受态细胞	0.1ml×10
pKWGF2(10ng/uL)	10μl
说明书	1份

储存条件：干冰运输，-80℃保存，有效期一年。

自备试剂：质粒DNA、液氮等。

使用方法：

转化前准备
1. 冰水浴和37℃水浴。
2.液氮或干冰/乙醇混合物。
3. 将抗性平板在28℃培养箱中平衡至少15分钟。
转化方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2. 每100μL感受态加1μg(体积不大于10μL)质粒DNA，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700μL无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2～3小时。
4. 6000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB 平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有转化所用双元载体抗生素时，28℃培养48小时即可；平板中同时加入双元载体抗生素，20μg/ml rif时，需28℃培养60小时；如果使用的平板含有50μg/ml rif 则需要28℃培养72-90小时)。

注意事项：
1、加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2、混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3、平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。
4、利福平浓度不应高于25μg/mL，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司EHA101感受态计算转化效率时所用平板只含有50μg/mL kan，若所用平板含有20μg/mL rif 则转化效率降低到1/2。
5、培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。

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·柱式RNA纯化试剂盒
编号：BTN80204
英文名称：RNAadsorp RNA Column Purification Kit
规格：50次
本产品用于纯化并回收体外转录得到的RNA分子和从各种材料中提取得到的总RNA，能有效地去除RNA样品中污染的杂质。

产品特点：
1.可以回收20nt以上的RNA。
2. 操作简单快速，只需要5分钟。
3. 回收率高达80%以上。
4.一站式，即开即用，操作简单，用户不需要自备任何试剂。
5. 得到的RNA 纯度一般都在1.9以上，可以用于各种后续实验。

试剂盒组成：

成分	规格成分	规格
溶液A	15ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	5ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在RNA溶液中加入3倍体的溶液A、1倍体积的溶液B和5倍体积的溶液C，颠倒数次充分混匀。注意：最后的1体积最好不要超过1.5mL。
2. 分一次或两次上柱，即将混合液转移到离心吸附柱中。每次转移后12000 g室温离心半分钟并弃穿透液。
3. 加0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000 g室温离心半分钟并弃穿透液。
4. 如果有必要，可以再加0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000 g室温离心半分钟并弃穿透液。一般情况下洗一次足够，此步可以省略。
5.干甩半分钟，即将空离心吸附柱和套管12000 g室温离心半分钟。
6. 加30-100μl RNA 洗脱液到离心吸附柱中，12000 g室温离心半分钟即得回收的RNA。注意：可以使用RNase-free的水代替RNA洗脱液。


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·双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)
编号：BTN91202
英文名称：Two-Enzyme One-Tube RT-PCR Kit
规格：50次
本产品是经过精心优化的、基于MMLV 逆转录酶和Taq DNA聚合酶的双酶一管式RT-PCR试剂盒，它含有除模版RNA和其专一性引物以外的所有RT-PCR试剂，包括MMLV 逆转录酶、Taq DNA聚合酶、RT-PCR缓冲液等，可以在同一反应管内完成RNA→cDNA→PCR反应(RT-PCR反应)。

产品特点：
1.一管式完成RT-PCR反应，避免样品交叉污染。
2. 即开即用，用户不需要单独准备RT-PCR所需的各种试剂。
3. 主要成分只有两个RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix，将加样步骤减少到最低，极大降低了加样误差，增加了可重复性。
4. 使用范围广，适用于从病毒RNA 到人RNA的各种RNA 模板。
5.高灵敏度，每个RT-PCR 体系最低可以检测200拷贝的RNA分子，可扩增的模版RNA的最长达2000nt。
6. 所得RT-PCR产物可以直接用于AT克隆。

试剂盒组成：

成分	规格
双酶一管式RT-PCR Buffer(2×)	750μl
MMLV-Taq Mix	100μl
RNase-free水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：所有离心管用前最好全部短暂离心几秒使管壁上溶液沉淀到管底。下面以一个30μL 体系的RT-PCR 为例，如果体积不同，各成分用量需要适当调节。
1.在一干净的无RNase的PCR管中，先加入下列成分：

成分	阴性对照	样品
RNA模板(自备，分下面三种情况)	无	见下
总RNA	无	100-500ng
或poly(A)mRNA	无	10-500ng
或体外转录得到的专一RNA	无	0.01 pg-500ng
RNA特异性引物一(自备)	终浓度300nM	终浓度300nM
RNA特异性引物二(自备)	终浓度300nM	终浓度300nM
探针(仅对Realtime RT-PCR)	终浓度200nM	终浓度200nM
RNase-free水	补到13μL	补到13μL
双酶一管式RT-PCR Buffer(2×)	15μl	15μl
MMLV-Taq Mix	2μl	2μl

注：通常初次使用本试剂时，可用引物浓度300nM，探针浓度200nM进行实验，根据实验结果具体情况，在200～800nM 范围内调整引物浓度，在50～400nM 范围内调整探针浓度以达到最佳检测效果。引物、探针、待检样品的具体加量用户可以根据实际情况调整，同时增减DEPC 水用量，保证总反应体积不变即可。
2. 轻柔混合均匀后放入PCR 仪中进行RT-PCR。
3. 设定RT-PCR反应条件时，一般将RT的条件设定成42℃，30 钟，后接94℃变性5分钟，然后进入PCR循环(PCR参数将根据自备引物的Tm 值由用户自行决定注)、最后72℃，5分钟。对Realtime PCR，在复性步骤设置荧光检测，检测通道：FAM/HEX/VIC/ROX/CY5
4. RT-PCR结束后取5-10μL电泳检查。

注意事项：
1. 使用已校准的移液器，选用一次性PCR反应管、离心管、tip 头等进行样本处理及配液等操作，所有用具应不含DNA酶和RNA酶。
2.引物、探针设计过程中应尽可能避免发夹结构、二聚体等现象的发生，探针的位置尽可能靠近上游引物，PCR 目标片段最好小于200bp，尽可能在150bp以内。
3. 实验样品尽可能新鲜，提取过程应严防RNA酶污染及操作不当导致的RNA 降解。
4. 使用本产品时建议对RT-PCR扩增条件、引物浓度和样品用量进行调整，选择最适当的引物浓度、样品浓度和PCR扩增条件。
5. 本产品使用前应在室温充分融解，并用漩涡震荡器充分混匀。
6. 统一配液后分装以减少加样误差，每次实验应设置阴性对照。
7. 禁止标记PCR反应管，避免外源性荧光信号干扰。
8. PCR反应管中不能有气泡，否则会产生非特异的荧光信号。若有气泡，可先用手指将气泡弹破，然后再低速离心消除。
9. 实时荧光PCR 仪器连续进行实验时，最好间隔一小时以上再使用。
10. 实时荧光PCR 仪需经常校正和清洁载样板板孔。
11. 若使用Roch LightCyclerTM荧光PCR 仪，应将毛细管放在专门套管中，以便分装反应体系和加入待检样品。前述操作完毕应低速离心数秒再将毛细管垂直缓慢放入样品架，以免折断；若发生折断，应小心取出，用专用小毛刷擦拭干净后方可进行扩增。
12. 实验室应严格分区，避免PCR产物污染。


北京农杆菌EHA101感受态细胞大量库存促销关键词：BTN161205,农杆菌EHA101感受态细胞,E.coli EHA101 Rosetta Competent Cell

亮绿染色液(1%)   100ml
PY08-064  脑心浸出液肉汤(BHI)  5ml  10支/盒，用于链球菌及其他对营养苛求菌的培养
ARB13292 小鼠凝溶胶蛋白(GelsolIn)Elisa分析 Mouse gelsolin ELISA KIT
ARB13107 小鼠骨保护素(OPG)Elisa方法检测 Mouse osteoprotegerin,opg ELISA KIT
ARB12859 小鼠分泌型磷脂酶A2(sPLA2)酶免分析 Mouse secreted phospholipase a2,spla2 ELISA KIT
PY01-038  盐*(代"酸")噻胺(VB1)  5|25克  
C1801 巴比西鼠血清(无菌过滤)
BL0674 SILWETL-77表面活性剂
ARB14081 犬降*素原(PCT)血清中含量检测 
PBST(pH7.5)  1×|10× 500ml
ARB10258 人二*嘧啶酶样3(DPYSL3)代做ELISA实验 Human dihydropyrimidinase-like 3,dpysl3 ELISA KIT
HC0262 Conbitips Plus分液管
9003-98-9 脱氧核糖核酸酶 DNAseⅠ
ARB10381 人本周蛋白(BJP)酶联免疫定量检测 Human bence-jones protein,bjp ELISA KIT

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