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长期
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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")5×TBE厂家,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:5×TBE厂家
规格:500ml|10×500ml
编号:RFT190
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
本品常用于DNA琼脂糖凝胶电泳。
5×TBE厂家正在火爆热销,除此之外,为您推荐下别热销产品:
·即用型丽春红染色液
编号:RFT056
英文名称:Ponceau S Staining Solution
规格:100ml
本染色液为即用型工作液,可以直接使用,不用稀释。丽春红染色液可以用于PVDF膜、硝酸纤维素膜(NC膜)和醋酸纤维素膜上的蛋白的检测。丽春红带负电荷,可以与带正电荷的*基酸残基结合,同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合,从而形成红色的条带。注:丽春红染色液不适用于尼龙膜上的蛋白的检测。丽春红对蛋白的染色是可逆的,染色后可以用蒸馏水,PBS或其它适当溶液洗去。丽春红对蛋白的检测下限是250ng。
使用方法:
1、电泳结束后,将PVDF膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸泡到适量丽春红染色液中,摇动3-5分钟或更长时间,直至出现清晰条带。
2、用蒸馏水漂洗2-3次,每次3-5分钟,直到膜背景干净为止。
3、观察保存结果。
储存条件:室温,有效期12个月。
·2×ligation solution MasterMix
编号:RFT108
英文名称:Ponceau S Staining Solution
规格:150μl
2×ligation solution MasterMix是含有T4 DNA Ligase,ligation buffer的2×MasterMix,实验时,只需加入片段和载体即可进行连接反应。适用于DNA片段和载体DNA的连接以及DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接。按照10μl连接体系计算,每次使用5μl,可以使用30次。
注意事项
1、2×ligation solution MasterMix由于含有T4 DNA ligase,使用前冰浴中彻底融化,混匀后使用。
2、为了提高转化效率,转化时建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。
使用方法:
一、DNA片段和载体DNA的连接
(1)粘性末端的连接
1.反应体系:
| 10μl体系 | 终浓度 | |
| 线性载体DNA | xμl | 10-50 ng |
| 插入DNA片段 | yμl | 插入片段:载体=1:1-5:1* |
| 2×ligation solution MasterMix | 5μl | 1× |
| ddH2O | up to 10μl |
注意:载体与插入片段的摩尔数比需要优化:一般vector:insert在1:1~1:5之间均可得到较好的结果。用以下公式计算片段摩尔数:pmol数= DNA量(ng)/(660×片段bp数)×1000。例如:插入片段2000bp,线性载体为3000bp,如果载体使用量为50ng(0.025pmol),10μl连接体系中vector:insert的摩尔比是1:3,则需要2000bp pmol数为0.075pmol,插入片段2000bp的使用量为100ng。
2、彻底轻柔混匀后,瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件:16℃孵育30分钟。
4、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意:
a.若要提高电转实验效率,推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase后,用DNA产物纯化试剂盒或*仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后进行电击转化。
b.若要提高转化子数目,可将连接时间延长至1小时。
(2)平末端的连接
1、反应体系:
| 10μl体系 | 终浓度 | |
| 线性平末端载体DNA* | xμl | 10-50 ng |
| 插入DNA片段 | yμl | 插入片段:载体=1:1-5:1** |
| 2×ligation solution MasterMix | 5μl | 1× |
| ddH2O | up to 10μl |
注意:
a.平滑末端的载体与 DNA 片段进行连接时,应首先将载体进行去磷酸化处理,以防止其自身环化。
b.载体与插入片段的摩尔数比需要优化:一般vector:insert在1:1~1:5之间均可得到较好的结果。用以下公式计算片段摩尔数:pmol数= DNA量(ng)/(660×片段bp数)×1000。例如:插入片段2000bp,线性载体为3000bp,如果载体使用量为50ng(0.025pmol),10μl连接体系中vector:insert的摩尔比是1:3,则需要2000bp pmol数为0.075pmol,插入片段2000bp的使用量为100ng。
2、彻底轻柔混匀后,瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件:16℃孵育30分钟。
4、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意:
a.若要提高电转实验效率,推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase后,用DNA产物纯化试剂盒或*仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后才能进行电击转化。
b.若要提高转化子数目,可将连接时间延长至1小时。
二、线性DNA的自身环化
1、反应体系:
| 10μl体系 | 终浓度 | |
| 线性载体DNA | xμl | 10-50 ng |
| 2×ligation solution MasterMix | 5μl | 1× |
| ddH2O | up to 10μl |
2、彻底轻柔混匀后,瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件:16℃孵育30分钟。
4、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意:若要提高电转实验效率,推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟灭活T4 DNA Ligase后,用DNA产物纯化试剂盒或*仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后才能进行电击转化。
三、接头连接
1、反应体系:
| 10μl体系 | 终浓度 | |
| 线性DNA | xμl | 100-300 ng |
| 磷酸化接头 | yμl | 0.5-1 μg |
| 2×ligation solution MasterMix | 5μl | 1× |
| ddH2O | up to 10μl |
2、彻底轻柔混匀后,瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件:16℃孵育30分钟。
4、65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟灭活T4 DNA Ligase。连接产物可以直接进行限制性内切酶酶切反应。
储存条件:-20℃
5×TBE厂家关键词:5×TBE,百奥莱博,RFT190
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5×TBE厂家关键词:5×TBE,百奥莱博,RFT190
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盐*(代"酸")丫黄素 Potassium L-Aspartate 8063-24-9
PY01-130 6-糠*基嘌呤 1克
肌酐 L-Histidine HCL 60-27-5
BTN131120 盐*(代"酸")胍溶液 Guanidine?HCl Solution
PY01-161 磷酸*二*(无水) 500克
我公司生产供应销*(代"售")的核酸电泳和回收正全品类优惠促销,十分期待您的咨询选购5×TBE厂家。
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文献和实验(Membrane filters),也可认为是一种有通透性的支架(permeable supports)。更准确地说,Transwell应该是一种实验技术,这项技术的主要材料是Transwell小室(Transwell chamber,Transwell insert),其外形为一个可放置在孔板里的小杯子,不同厂家对Transwell会有不同的命名,而不同型号也可有不同形状,不同大小,根据实验需要,可有不同选择。阅读全文 Transwell 实验用品 我的课题涉及Transwell侵袭
一、实验材料NCI-H1299,购自上海晶莱生物技术有限公司。表 2.1.1 主要试剂试剂与耗材厂家(货号)细胞培养瓶FALCON 中国(353014)Penicillin/streptomycin solution(KGY002)0.25% Tripsin-EDTA(BK-E3076)PBS(BK330-2)胎牛血清GIBCO 美国(10270-106)1640 培养基Hyclone 美国(SH3080901)Annexin V-FITC/PI 凋亡试剂盒 二、实验仪器表 2.2.1 主要
① 5×TBE(5倍体积的TBE贮存液) 配1000ml 5×TBE: Tris 54g 硼酸 27.5g 0.5mol/l EDTA 20ml Ph8.0 ② 凝胶加样缓冲液(6×) 溴酚蓝 0.25% 蔗糖 40% ③溴化乙锭溶液(EB) 0.5μg/ml 2.制备琼脂糖凝胶 按照被分离DNA的大小,决定凝胶中琼脂糖的百分含量。可参照下表: 琼脂
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