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北京百奥莱博科技有限公司
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605
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售"),产品线涵盖浓缩型正常山羊血清品牌在内的细胞生物学试剂产品,还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称:浓缩型正常山羊血清品牌
规格:5ml
编号:ZN1962
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
使用说明:组化实验中的封闭。本品为浓缩试剂,使用需1:10稀释。
我公司的浓缩型正常山羊血清品牌,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销*(代"售")下列产品:
BL1097 DMEM(L)
DAB法显色试剂盒"
PY02-290 麦氏培养基(醋酸*培养基) 250克
酸性固绿染色液 2×50ml
ARB10838 人抗软骨抗体(Anti-cArtIlAge-Ab)酶标法分析 Human anti-cartilage-antibody ELISA KIT
ARB10306 人巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)含量测试 Human macrophage inflammatory protein-3α,mip-3α ELISA KIT
组织胞浆/胞核分离试剂盒 50T|100T
BL1093 DMEM(高)(H)(不含酚红、谷*酰胺、丙*(代"酮")酸*)
PY08-012 M-H血平板 9CM 10皿/盒,用于对营养苛求菌的培养
ARB11398 人神经降压素(NT)含量检测 Human neurotensin,nt ELISA KIT
果胶酶 Succinic acid 9032-75-1
DL-谷*酰胺 1,4-Dihydroxyanthraquinone 6899-04-3
ARB11851 人凝胶原蛋白(gelson)检测服务 Human gelson ELISA KIT
ARB10796 人抗心磷脂抗体IgA(ACA-IgA)ELISA代测服务 Human anti-cardiolipin antibody iga,aca-iga ELISA KIT
ARB12221 大鼠血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)Elisa分析 Rat platelet-derived growth factor-bb,pdgf-bb ELISA KIT
叶绿素A Flurprimidol 479-61-8
BL1404 液相RNase清除剂
浓缩型正常山羊血清品牌关键词:百奥莱博,浓缩型正常山羊血清,ZN1962
ARB13886 猪主要急性期蛋白(MAP)酶免分析 Porcine map ELISA KIT
ARB11013 人补体因子D(CFD)ELISA检测服务 Human complement factor d,cfd ELISA KIT
FMOC-D-*丙*酸 QAE Sephadex A-50 86123-10-6
ARB13881 猪白血病抑制因子受体(LIFR)酶免分析 Porcine leukemia inhibitory factor receptor,lifr ELISA KIT
F030221 HRP标记兔抗山羊IgG抗体 Rabbit Anti-Goat IgG*HRP
ARB13444 鸡白介素1β(IL-1β)免费代测 Chicken interleukin 1β,IL-1β ELISA KIT
ARB14164 小鼠流行性出血热(EHF)代做ELISA实验
ARB13203 小鼠脑红蛋白(NGB)ELISA检测服务 Mouse neuroglobin,ngb ELISA KIT
BTN90313 TBE电泳液,10× TBE Buffer, 10×
HC0110 透析袋MD34(8000-14000)
ARB11795 人碱性成纤维细胞生长因子受体(bFGFR)elisa测定使用说明书 Human bfgfr ELISA KIT
PY01-129 麦芽浸粉 250克
蛋白酶抑制剂混合物片剂(含EDTA) 1片|10片|20片
BL0837 羊抗人IgG纯化抗体
BTN100210 dNTP溶液(标记专用) dNTP Solution
浓缩型正常山羊血清品牌关键词:百奥莱博,浓缩型正常山羊血清,ZN1962
·Gastrin receptor mRNA原位杂交试剂盒
编号:ZN0567
规格:100T
基本信息:
保存条件:4℃保存一年
工作量:100张切片。
有效期:一年。
适用种属:rat
标记方式:3’—尾段标记
试剂盒中内容:
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml;
2.预杂交液 2ml;
3.Gastrin receptor mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂:
原位杂交专用盖玻片;POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一.培养细胞和冰冻切片
准备工作:
固定液:4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6);1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g,柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛"):37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲*透明,封片。
二.石蜡切片
如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。
3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察:
Gastrin的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项:
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。
北京百莱博科技有限公司是免疫检测产品的专业生产供应销*(代"售")商,恭候您的咨询选购浓缩型正常山羊血清品牌。
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文献和实验一、SP 法 1)脱蜡、水化;2)PBS 洗 2~3 次各 5 分钟;3)3% H2O2(80% 甲醇)滴加在 TMA 上,室温静置 10 分钟;4)PBS 洗 2~3 次各 5 分钟;5)抗原修复;6)PBS 洗 2~3 次各5分钟;7)滴加正常山羊血清封闭液,室温 20 分钟。甩去多余液体。8)滴加Ⅰ抗 50μl,室温静置 1 小时或者4℃过夜或者37℃1小时。9)4℃ 过夜后需在37℃复温45分钟。10)PBS 洗 3 次各 5 分钟;11)滴加 Ⅱ 抗 40~50 μl,室温
细胞来说要少很多。 最后,针对细胞上清液的外泌体的提取。这个是老生常谈的问题,这里就不再多讲了。如果实验室有超速离心机的话,那就使用超速离心的方法,按照前文建议的预处理操作后,超离后的沉淀也会增加的,同时外泌体的质量也会提升。如果实验室没有超离的情况下,也可以通过试剂盒的方法来提取,除了进口品牌外,也可以使用一些国产试剂盒,质量也不亚于进口品牌的。 总结一下,为了获得高质量的外泌体:需要在细胞培养时减少正常血清的使用,推荐去外泌体血清或者外泌体专用无血清培养基;收获
缓冲盐水 (10X TBS):在 800 ml 蒸馏水中加入 24.2 g 三羟甲基氨基甲烷(Trizma base, C4 H11NO3)和 80 g 氯化钠(NaCl)。用浓盐酸将 pH 调节到 7.6,定容至 1 L。6. 抗体稀释液a. SignalStain? 抗体稀释液 #8112b. TBST / 5% 正常山羊血清: 5 ml 1 X TBST 中添加 250 ?l 正常山羊血清。c. PBST / 5% 正常山羊血清: 5 ml 1 X PBST 中添加 250 ?l 正常山羊血清
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