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508
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,一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
4℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")蛋白质银染检测试剂厂家现货,我公司供应的细胞生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:蛋白质银染检测试剂厂家现货
编号:ZN1894
规格:40次
产地:国产|进口
产品规格:
可使用 30次
增敏液 30ml(100×)银染液 30ml(100×)
显色液 A 1.5ml 显色液 B 120ml×5(5×)
产品保存:4℃保存,一年有效。银染液和显色液 A 需避光保存。
使用方法:
1.电泳结束后,取凝胶放入约 100ml 固定液中,在摇床上室温摇动 20分钟,摇动速度为60-70rpm。
固定液的配制(自备):加入 50ml 乙醇、10ml 冰乙酸和 40ml 去离子水,混匀。
2.弃固定液,加入 100ml 30%乙醇,在摇床上室温摇动 10min,摇动速度为60-70rpm。
30%乙醇的配制(自备):70ml 去离子水中加入 30ml 乙醇,混匀。
3.弃 30%乙醇,加入 200ml 去离子水,在摇床上室温摇动 10分钟,摇动速度为60-70rpm。
4.弃水,加入 100ml 增敏液(1×),在摇床上室温摇动 2分钟,摇动速度为60-70rpm。
增敏液(1×)的配制:99ml 去离子水中加入 1ml 增敏液(100×),混匀。增敏液(1×)配制后需在2小时内使用。
5.弃原有溶液,加入 200ml 去离子水,在摇床上室温摇动 1min×2,摇动速度为60-70rpm。
6.弃水,加入 100ml 银染液(1×),在摇床上室温摇动 20分钟,摇动速度为60-70rpm。
银染液(1×)的配制:99ml 去离子水中加入 1ml 银染液(100×),混匀。银染液(1×)配制后需在2小时内使用。
7.弃原有溶液,加入 100ml 去离子水,在摇床上室温摇动 0.5min×2,摇动速度为60-70rpm。
8.弃水,加入 100ml 显色液,在摇床上室温摇动 3-10分钟,直至出现比较理想的预期蛋白条带,摇动速度为60-70rpm。
显色液的配制:80ml 去离子水中加入 20ml 显色液 B(5×),再加入 0.05ml 显色液 A,混匀后即为显色液。显色液配制后需在 20分钟内使用。
9.弃显色液,加入 100ml 终止液,在摇床上室温摇动 10分钟,摇动速度为60-70rpm。
终止液的配制(自备):95ml 去离子水中加入 5ml 冰乙酸,混匀。
10.弃终止液,加入去离子水,在摇床上室温摇动 2-5分钟,摇动速度为60-70rpm。
11.保存显色出的蛋白质条带并记录。
注意事项:
1.需自备乙醇和冰乙酸(分析纯)。
2.请严格按照产品使用说明书进行操作。
3.显色过程很快,要注意把握时间,避免染色过度。
4.所用器皿要很洁净,不用手直接接触,以免杂蛋白污染。
5.尽量用高纯度去离子水,蒸馏水更佳,可以减少背景着色。
6.本试剂盒也可以用于2D凝胶的银染,并且染色后和后续的质谱检测兼容。
7.使用说明中的使用次数及各种溶液的使用量适用于大小为8×10cm厚度为0.75-1mm的凝胶。
对于更大的凝胶,各种溶液的使用量需按凝胶面积的比例放大,对于更厚的凝胶,作用时间需按照厚度的比例适当延长。
8.对于 BSA 蛋白,检测灵敏度可以达到 0.5ng
9.使用本试剂盒只需 90分钟即可完成银染实验。
蛋白质银染检测试剂厂家现货正在火爆热销,除此之外,为您推荐下别热销产品:
·Tau mRNA原位杂交试剂盒
编号:ZN1356
规格:100T
基本信息:
保存条件:4℃保存一年
工作量:100张切片。
有效期:一年。
适用种属:hμman,rabbit,rat,mouse
标记方式:3’—尾段标记
试剂盒中内容:
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml;
2.预杂交液 2ml;
3.Tau mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂:
原位杂交专用盖玻片;POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一.培养细胞和冰冻切片
准备工作:
固定液:4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6);1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g,柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛"):37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲*透明,封片。
二.石蜡切片
如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。
3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察:
Tau的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项:
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。
蛋白质银染检测试剂厂家现货关键词:蛋白质银染检测试剂,百奥莱博,ZN1894
·Casein Kinase Iα mRNA原位杂交试剂盒
编号:ZN0187
规格:100T
基本信息:
保存条件:4℃保存一年
工作量:100张切片。
有效期:一年。
适用种属:hμman,rat,mouse
标记方式:3’—尾段标记
试剂盒中内容:
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml;
2.预杂交液 2ml;
3.Casein Kinase Iα mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂:
原位杂交专用盖玻片;POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一.培养细胞和冰冻切片
准备工作:
固定液:4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6);1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g,柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛"):37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲*透明,封片。
二.石蜡切片
如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。
3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察:
Casein的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项:
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。
蛋白质银染检测试剂厂家现货关键词:蛋白质银染检测试剂,百奥莱博,ZN1894
SJ0755 *化锰
CYB164010 兔抗狗IgG-HRP
ARB13530 兔β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)代做ELISA实验 Rabbit amyloid beta Peptide 1-40,aβ1-40 ELISA KIT
ARB13557 兔子内皮型一氧化*(代"氮")合成酶3(eNOS-3)Elisa方法检测 Rabbit endothelial nitric oxide synthase 3,enos-3 ELISA KIT
NF-202 羊抗人APO-B血清
BL0884 兔抗猴IgG免疫血清 0.5ml
Mallory PTAH染色液(化学氧化法) 100ml
ARB10842 人抗呼吸道合胞病毒抗体(RSV)ELISA代测服务 Human anti-respiRatory syncytial virus antibody,rsv ELISA KIT
ARB10311 人巨噬细胞趋化因子(MCF)含量测试 Human macrophage chemotatic factor,mcf ELISA KIT
ARB11609 人脱氧吡*(代"啶")酚/脱氧吡*(代"啶")啉(DPD)尿液中含量检测 Human deoxypyridinoline,dpd ELISA KIT
考马斯亮蓝快速染色液 "100ml
酚酞单磷酸环己*(代"胺")盐 Besmarck brown Y 14815-59-9
ARB12677 大鼠颗粒酶B(Gzms-B)酶免分析 Rat granzymes b,gzms-b ELISA KIT
ARB10786 人抗巨噬细胞抗体(Anti-mAcrophAge Ab)酶标法分析 Human anti-macrophage antibody ELISA KIT
BL1365 2×RNA Loading Buffer(变性)
62758-13-8 Resazurin sodiu*(代"m") salt刃天青
白蛋白检测试剂盒(*甲*(代"酚")绿比色法) 100T
ARB13962 猪氧化低密度脂蛋白(OxLDL)Elisa定量检测 Porcine oxidized lowdensity lipoprotein,oxldl ELISA KIT
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物干燥,连续洗涤使用预制型的薄层基质。该方法为精确和灵敏的MALDI检测创造了最佳条件。然而,这种样品制备方法制备的样品不能承受激光辐射,会被迅速漂洗。因此,该方法不适用于PSD光谱的蛋白质谱鉴定,因为PSD光谱法通常每个片段质量范围需要多达100甚至以上次数反复的激光辐射。 如果在分析之前,使用小型吸附柱对较大体积的肽混合物进行浓缩,抑或通过向肽混合物中添加少量反相色谱珠的方式进行批量吸附。而进行批量吸附,只需要将磁珠吸附到的肽混合物进行洗涤,即可获得肽混合物,然后转移至上样处并干燥即可。这种
凝胶蛋白检测技术 理想的检测方法必须具有以下特点:①良好的线性范围,即染色强度与蛋白质量成正比;②良好的通用性,即对不同蛋白质具有相同的染色能力;③良好的兼容性,检测后不影响后续的鉴定过程,即不影响蛋白质或多肽在质谱仪中的离子化过程;④高灵敏度,检测出尽量多的低拷贝蛋白;⑤高稳定性和重复性。但目前仍无完全符合上述条件的检测方法。考马斯亮蓝染色、银染等各种传统显色技术对于蛋白质组学高灵敏度、高重复性、宽线性和高度自动化的要求逐渐显出局限性,目前不断有新的检测技术开发出来,如荧光标记、同位
;银染灵敏度虽高,却常与质谱不兼容;荧光染色以SYPRO试剂为主。蛋白质检测灵敏度高,能兼容质谱,但由于需要配备特殊的检测仪器及试剂的昂贵,未被作为常规方法使用;而同位素显色则存在安全性和操作局限性等问题。因此,筛选简便、节约、检测灵敏度高、质谱兼容的蛋白质着色法是蛋白质组 研究所需。由于考马斯亮蓝染色法的广泛运用,近年来就考马斯亮蓝染色法在提高其灵敏性方面研究者们作了许多改进,方法众多,评价不一。 我们在作双向凝胶电泳 时,将常用的几种考马斯亮蓝染色法及银染进行了比较,并就其染色
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