Nanog mRNA原位杂交试剂盒哪里买

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括Nanog mRNA原位杂交试剂盒哪里买在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：Nanog mRNA原位杂交试剂盒
产地：国产|进口
规格：100T
品牌：百奥莱博
编号：ZN0946
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：mouse
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.Nanog mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
Nanog的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。
关键词：ZN0946,百奥莱博,Nanog mRNA原位杂交试剂盒


Nanog mRNA原位杂交试剂盒哪里买正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：

 

编号	名称
ZN0994	NK2R mRNA原位杂交试剂盒
ZN0848	LIF mRNA原位杂交试剂盒
ZN1649	人IL12重组蛋白
ZN0211	Caveolin mRNA原位杂交试剂盒
ZN0341	CTP mRNA原位杂交试剂盒
ZN0580	GDF9 mRNA原位杂交试剂盒
ZN1930	ECM Kit(山羊IgG)
ZN0381	DAT mRNA原位杂交试剂盒
ZN0261	CD8A mRNA原位杂交试剂盒
ZN1613	人CYR61重组蛋白
ZN0710	IGFBP5 mRNA原位杂交试剂盒
ZN0585	GFRA3 mRNA原位杂交试剂盒
ZN1165	PPARD mRNA原位杂交试剂盒
ZN1212	Rap1a mRNA原位杂交试剂盒
ZN1334	STK31 mRNA原位杂交试剂盒
ZN1602	人Clusterin重组蛋白
ZN0076	APEX1/Ref1 mRNA原位杂交试剂盒
ZN0829	L-MYC mRNA原位杂交试剂盒
ZN1306	SPATA20 mRNA原位杂交试剂盒
ZN0331	CRH mRNA原位杂交试剂盒
ZN1055	Oxytocin R mRNA原位杂交试剂盒
ZN1094	PAX1 mRNA原位杂交试剂盒
ZN1464	Urotinsion II Receptor mRNA原位杂交试剂盒
ZN0895	MEX3C mRNA原位杂交试剂盒
ZN1977	阳性对照空白片
ZN0112	AXIN2 mRNA原位杂交试剂盒
ZN0883	MASH1 mRNA原位杂交试剂盒
ZN0080	Apolipoprotein E mRNA原位杂交试剂盒
ZN0758	Integrin-β2 mRNA原位杂交试剂盒
ZN0782	Interleukin 5/IL-5 mRNA原位杂交试剂盒
ZN1098	PAX8 mRNA原位杂交试剂盒
ZN0986	NGX6-1/2 mRNA原位杂交试剂盒
ZN1061	P130 mRNA原位杂交试剂盒
ZN1093	PAX-2 mRNA原位杂交试剂盒
ZN0788	Interleukin 8/IL8 mRNA原位杂交试剂盒
ZN1342	Sμmo1 mRNA原位杂交试剂盒
ZN1309	SPRY4 mRNA原位杂交试剂盒
ZN0593	Glucocoticoid Receptor/GR mRNA原位杂交试剂盒
ZN1886	生物素标记的蛋白质分子量标准
ZN1891	凝胶蛋白质蓝染-脱色液(考马斯亮蓝染色脱色液)
ZN0100	ATF-2 mRNA原位杂交试剂盒
ZN0319	CORIN mRNA原位杂交试剂盒
ZN1759	小鼠Fetuin A重组蛋白