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- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 品系：
详见说明书
- ATCC Number：
小鼠杂交瘤细胞；EphB4品牌
- 细胞类型：
A类
- 肿瘤类型：
详见说明书
- 供应商：
上海抚生
- 库存：
58
- 生长状态：
贴壁生长
- 年限：
详见说明书
- 运输方式：
低温冷藏
- 器官来源：
详见说明书
- 是否是肿瘤细胞：
否
- 细胞形态：
详见说明书
- 免疫类型：
详见说明书
- 物种来源：
详见说明书
- 相关疾病：
详见说明书
- 组织来源：
详见说明书
- 英文名：
详见说明书
- 规格：
株
细胞名称 小鼠杂交瘤细胞；EphB4品牌
形态特性 淋巴母细胞样
生长特性 半贴壁生长
特征特性 细胞注射小鼠腹腔可产生高滴度的单抗，可用于基础研究和临床检验。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
传代方法 1：
3传代,2-3天传一代
传代情况 C10
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶 同工酶鉴定
染色体
使用权限 A类
小鼠杂交瘤细胞；EphB4品牌细胞总RNA的提取
1）、6孔板细胞（CNE-2）汇合度为90-100%时，取出无菌室，去其上清，用PBS洗两次后，每孔加TRIZOL试剂 1 ml，摇匀，无菌罩内消化3-5分钟（观察：液体变粘稠，细胞脱壁）。
2）、将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一DEPC处理过的1.5 ml EP管中，加新开的氯仿0.2 ml，轻摇15秒。
3）、室温静置2-3分钟后，12000 rpm，15 min，4℃，离心。然后取上清无色水相（约0.6 ml）到 EP管（DEPC处理过），加0.5 ml新开的异丙醇，室温下静置10分钟。
4）、12000 rpm，10分钟，4℃，离心。观察总RNA在管底的白色沉淀，弃去上清（小心别丢了沉淀），75%乙醇1.0 ml洗涤（用DEPC水新配制）后，7500 rpm，5 min，4℃离心。
5）、去上清，点离，用小Tip吸干液体。气干沉淀5-10分钟， DEPC处理水20-30 ul加入，中枪打匀,按实验方法流程60℃水浴10分钟溶解总RNA，测OD值。
6）、电泳。
小鼠杂交瘤细胞；EphB4品牌的操作流程:
1. 细胞收到后建议在培养箱稳定4小时左右再依据细胞密度，换液培养或传代。
2. 如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞及时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶中继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基，培养2-3天。若3天后细胞都没有出现增殖而是继续脱落死亡，请及时联系实验室，技术人员会跟进解决。
3. 贴壁细胞生长缓慢：适当提高血清浓度（最高不超过20%），或可根据该细胞生长密度，考虑胰酶消化后，转移到新的培养瓶继续培养。
4. 生长不均：贴壁细胞若出现生长不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重新打散细胞，加入新鲜培养基进行培养。
细胞周期的概念:
细胞周期是可再生细胞从准备时期到分裂为两个细胞的一个循环阶段。
细胞周期分为细胞间期和细胞分裂期，细胞间期较长，而细胞分裂期较短。
FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 马血清)，对细胞而言差异极大，请务必依据细胞株资料单指定之血清种类培养之。
本公司所经营产品均为科研产品，为科研实验使用，小鼠杂交瘤细胞；EphB4品牌不得用于人体注射，服用等，望注意，谢谢合作！
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文献和实验【原创】实验方法分享：用某品牌rProtein A填料有效纯化小鼠腹水单抗
(PBS+1M NaCL,pH7.5-8) 的缓冲液置换0.3ml该品牌rProteinA填料的storage buffer。 2，用binding buffer等体积稀释小鼠腹水1ml（15ml离心管），10000RPM离心15分钟 3，取离心上清，把步骤1中的填料加入，室温在摇床上晃匀5-60分钟（时间越长，温度37度，能提高抗体和填料的结合率，此次实验中就晃了5分钟，导致流穿中还有一点点抗体残留;） 4,3-5000RPM离心1-3分钟，沉降填料，吸去上清（流穿） 5，加入10
（1）体内诱生法 取Balb/c小鼠，首先腹腔注射0.5 ml液体石腊或降植烷进行预处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周，可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体。 （2）体外培养法 将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中，杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体，收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。近年来，各种新型培养技术和装置不断出现，大大提高了抗体的生产
1975年Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞与和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交瘤细胞既可产生抗体，又可无性繁殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破使血清学的研究进入了一个高度精确的新纪元。 免疫细胞化学的 技术关键之一是制备特异性强、亲合力大、滴度高的特异性抗体，由于每种抗原都有几个抗原决定簇，用它免疫动物将产生对各个决定簇的抗体，即多克隆抗体。单克隆抗体则是由一个产生抗体的细胞与一个骨髓瘤细胞融合而形成的杂交廇细胞经无性繁殖而来
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