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修饰siRNA合成

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  • TSB026
  • 2026年03月31日
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    RNAi技术的最大难题就是化学合成siRNA稳定性问题。GenePharma化学修饰stableTMsiRNA最大的目标就是一次性获得最佳的实验数据。我们的方法就是使用RNAi-Mate转染试剂将化学修饰stableTMsiRNA导入哺乳动物细胞中,获得如下满意结果:

    1、高效的基因沉默

    2、高稳定性—在血清和培养基中

    3、最大限度减少副作用

    4、更长的作用时间

    化学修饰stableTMsiRNA oligo与普通的siRNA oligo性能对照表
     
    关键难题 标准的siRNA 化学修饰stableTMsiRNA
    siRNA 降解 标准的非修饰的siRNA在细胞培养过程中很容易降解,虽然在大部分的离体实验中是有效的,但是在细胞培养中寿命较短。 GenePharma化学修饰stableTMsiRNA不仅增强了在血清和细胞培养中的寿命,而且加强了在离体条件下的应用能力。
    作用时效 作用时间较短,一般情况下为一周左右。 GenePharma化学修饰stableTMsiRNA作用时间长,比标准的siRNA的作用时间延长一倍左右。
    活体应用的活性 标准的siRNA稳定性较差,一般不适用于体内试验。 GenePharma化学修饰stableTMsiRNA在体内的稳定性强。

    GenePharma 提供的siRNA 修饰方式

    可提供选择的标记和修饰方式包括如下:

    注:价格只是修饰费用,不包括RNA合成费用

     

    末端修饰方式 规格 纯化方式 价格
    5’  FAM 5 OD HPLC ¥300
    5’  Biotin 5 OD HPLC ¥300
    5’  Amine 5 OD HPLC ¥300
    5’  Phosphate 5 OD HPLC ¥300
    5’  Thiol 5 OD HPLC ¥300
    5’  Cholesteroi 5 OD HPLC ¥300
    碱基修饰方式 规格 纯化方式 价格
    Deoxyinosine 5 OD HPLC ¥100
    2’  Fluoro dU 5 OD HPLC ¥100
    2’  Fluoro dC 5 OD HPLC ¥100
    2’  OMe  rU 5 OD HPLC ¥100
    2’  OMe  rC 5 OD HPLC ¥100
    2’  OMe  rG 5 OD HPLC ¥100
    2’  OMe  rA 5 OD HPLC ¥100
     

    本公司提供的siRNA相关产品直接作用于靶基因mRNA,因此我们建议您在收到我们的相关产品后先进行实时定量PCR检测,以确定靶基因mRNA表达水平的变化,进而直接确认我们合成或构建的siRNA产品是否有效。

     

    RNAi活体研究(In vivo RNAi)


    在培养的哺乳动物细胞中,RNA干扰已经广泛应用于基因功能的研究。虽然RNAi干扰已经在体外(in vitro)研究中成为一个强大的研究方法,但是我们还是要着眼于将基因功能的研究放在整体生物中进行评价。为此,研究人员现在应用RNAi活体研究(RNAi in vivo)的方法来进行研究。虽然此项研究还处于早期,但是活体RNAi用已经越来越广使用并取得了不少进展。

    目前在活体研究中的两个基本方法:
     

    1. 化学合成的siRNA

    2. 质粒或者病毒载体的方法

    化学合成方法容易合成,成本低,转染效率高,目前已经广泛应用于活体研究,质粒和病毒相对而言难于构建合成,并且经常有突变,转染效率低,有免疫原性等缺点。
    在活体水平,siRNA成功调控基因的成麽主要依赖于有效的传递方式,特异靶组织的siRNA富集浓度,siRNA的稳定性。目前已经有多报道应用局部注射或者全身性给药的方式,siRNA成功抑制基因表达。最新的报道,siRNA可以穿过血脑屏障作用于靶点。活体给药的位置如下图:



     

    化学修饰的stableTM siRNA已经成功应用于活体研究。

    权阳生物提供多种修饰方式的siRNA满足客户活体水平基因功能研究。我们的单体的修饰方式有2’-F, 2’-Ome,磷酸化修饰,胆固醇修饰,巯基修饰等。我们in vivo siRNA经过离子交换式的HPLC纯化,纯度>95%以上。

    目录号 产品说明 规格 纯化方式 价格 交货期限
    A02004 Chemically modified siRNA 4 OD HPLC ¥600 6个工作日
    A02005 Chemically modified siRNA 5 OD HPLC ¥700 6个工作日
    A02010 Chemically modified siRNA 10OD HPLC ¥1300 6个工作日
    A02025 Chemically modified siRNA 25OD HPLC ¥2700 6个工作日
    A02050 Chemically modified siRNA 50OD HPLC ¥5000 6个工作日
    A02100 Chemically modified siRNA 100OD HPLC ¥6500 8个工作日
    A02250 Chemically modified siRNA 250OD HPLC ¥7500 10个工作日

     

     
     

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    相关实验
    • 化学合成siRNA

      在较早的哺乳动物 RNAi 实验中, siRNAs 是通过化学方法合成的,就像合成引物一样, 是应用起来最方便的一种方法,研究人员几乎不需要做什么工作。但是RNA合成成本高,定制周期长,特别是有特殊需求的RNA序列。由于价格比其他方法高出很多, 而且设计好的 siRNAs 中通常只有大约 25% 的 siRNAs 能高效抑制基因的表达(抑制效率 >80% ), 一个基因通常合成 3—5 对 siRNAs , 这使得化学合成 siRNA 的成本更高 (就是 6 — 10 条

    • siRNA的化学合成

      化学合成siRNA 与生物合成siRNA 相比,有以下优点:►操作简便,研究人员得到合成好的siRNA 后,进行简单的稀释处理即可实验。►转染效率高,相对于分子量较大的DNA 质粒,其转染效率高。►对细胞的或者组织的毒副作用小。►可大规模制备,本公司的合成规模可达到克级 (一次合成量1 - 100 g)。►特别适用于基因靶位点已确定,需要大量siRNA 进行siRNA 动物实验研究。

    • siRNA 的化学修饰和临床应用

      [1]。对合成siRNA 进行化学修饰是可行的办法, 恰当的修饰能够增加siRNA 的稳定性,同时有效抑制目的基因的表达。未修饰siRNA 与血浆蛋白亲和力不够,不被细胞摄取,所以用于治疗的siRNA 在不使用病毒等基因治疗载体时,需要先进行化学修饰[1]。siRNA的化学修饰主要有三类:磷酸骨架修饰、核糖修饰和碱基修饰。表1 总结了既能增加siRNA 的稳定性,又能维持其基因沉默效力的几种化学修饰。 表1 几种有效的siRNA 化学修饰(请点击放大后查看

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