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文献和实验/C2c1 和 CRISPR/C2c2 等亚类型,但应用最多的是 CRISPR/Cas9,而 CRISPR/C2c1 和 CRISPR/C2c2 尚无在作物改良上应用的报道。上述 3 类基因组编辑技术均能对植物基因组进行精准的定点敲除、插入和替换,因此,其对于控制作物重要农艺性状基因的功能鉴定、作物重要性状的遗传改良具有巨大的应用潜力。相比传统的常规育种,基因组编辑技术能直接对目标性状基因进行修饰,有可能大幅度提高目标性状聚合的精准度和加快聚合育种进程。而相比传统的转基因育种,基因组编辑在靶向修饰
%(3 个靶点都突变),获得纯合突变株的效率分别为 14.3%、47.6% 和 40.7%。因此,在基因敲除时,建议单个基因设计 2 个靶位点,能减轻遗传转化的工作量,也能更省、更快地获得纯合突变植株,极大地节省人力和物力。1.4 如何快速获得纯合的 DNA-free 编辑植株目前,获得纯合的 DNA-free 编辑植株主要有 2 种途径:一是通过经典的 TALENs 和 CRISPR/Cas9 技术获得基因得以修饰的植株后,通过自交或杂交的方式剔除外源基因;二是直接利用 DNA-free 植物基因组编辑
shRNA,在类器官中实现目标基因的长期稳定敲低。相比于CRISPR彻底敲除可能导致的细胞致死或代偿机制,shRNA介导的基因敲低更适合研究必需基因的部分功能缺失,或用于模拟某些基因表达量异常而非完全突变的疾病状态。 3、CRISPR/Cas9基因编辑 慢病毒可高效递送CRISPR/Cas9系统(包括Cas9蛋白和sgRNA),在类器官中实现精准的基因敲除、敲入与定点突变。由于慢病毒能实现稳定整合,它特别适用于需要长期培养的类器官模型,常用于构建肿瘤驱动基因突变模型、修复
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