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3个月
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MiaoLingBio
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1000
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淼灵生物
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1管
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文献和实验载体的构建与转化 以克隆质粒pGEM-3Zf(-)-TFPI为模板通过PCR扩增TFPI基因,其中引物在设计中引入了Nco工和Not工限制性内切酶位点。应用NcoI和NotI双酶切TFPI基因片段和表达载体pET-28a(+),并用T4DNA连接酶将酶切产物进行连接,构建表达质粒pET-28a(+)-TFPI。将连接产物直接转化感受态大肠杆菌DH5c~,涂布于LBK平板,挑单克隆放大培养,并抽质粒进行双酶切检测及测序分析,筛选出重组的阳性克隆。 (四)TFPI基因N端密码子优化
]。抗终止元件能使RNA 多聚酶越过核糖体RNA操纵子中的rho依赖性终止子即boxA[70,71]。转录抗终止是有一个极其复杂的过程,其中包含许多已知和未知因子。有关这方面的知识已有详尽的综述。在此我们主要讨论抗终止元件在E.coli中表达外源基因的应用。 在E.coli表达系统中作用比较强、应用较广的一个启动子是噬菌体T7晚期启动子[72,73]。该系统的活性依赖于提供T7 RNA多聚酶的转录单元。RNA多聚酶的严格阻遏对防止T7启动子的渗漏是必需的。有许多用于调节T7多聚酶表达的途径,但每一
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