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- 百奥莱博
- 北京
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- 2025年07月13日
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北京百奥莱博科技有限公司
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2×200ml
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产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：TH474
规格：2×200ml
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文献和实验流式课堂 | 裂红 or 分离液？外周血不同制备方法应用场景
、粒细胞等），需要裂解红细胞；倘若检测的是红细胞，不需要裂解红细胞； ⊙ 如果后续样本不用于流式分析，而是需要培养或者冻存复苏，使用裂红后培养的细胞，活性可能会打折扣。 Ficoll 密度梯度离心法 01 原理 根据细胞的沉降系数差异，借助细胞分离液和离心操作，对细胞进行分离。 02 优点 ⊙ 获得的细胞更纯净，有利于细胞培养后检测胞内因子 ⊙ 可将细胞冻存后再复苏、培养、检测 ⊙ 去除死细胞 03 缺点 ⊙ 步骤复杂，需 30min 以上 ⊙ 取白膜层需要丰富的经验 ⊙ 只能获得淋巴细胞和单核细胞
核细胞分离开来。 Ficoll密度梯度离心法是分离、纯化PBMC最常用的方法。Ficoll是蔗糖的多聚体，中性，平均分子量400000，当密度为1.2g/mL，未超出正常生理性渗透压，也不穿过生物膜，故常用作PBMC分离的分离液。红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分离液比重，离心后漂浮于分离液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分离液中。吸取分层液液面上的白膜层细胞，并进行适当的清洗，就可从外周血中分离到较高纯度的单个核细胞，即PBMC。 2 方法 1） 取新鲜抗凝
到离心机，500 g 离心 25 min。 小心取出离心管，吸取中间层的白色薄膜层，即为单个核细胞。 用 10 mL PBS 洗涤获得的单个核细胞，250g 离心 10 min，弃上清。 重复洗涤一次。 用细胞染色缓冲液重悬细胞备用。 注意事项： Ficoll 使用时的温度很重要，温度太高或者太低都会影响分离效果。 血液样本最好为新鲜抗凝血（采血 2 h 以内），为保持细胞活力，应避免冷冻和冷藏。 3.50 mL 离心管离心效率比 15 mL 离心管差，为了获得最大量的单核细胞，最好用15
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