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- 信裕生物
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- XY001C
- 中国/美国
- 2025年07月05日
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- 详细信息
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- 文献和实验
- 技术资料
- 样本：
详见说明书
- 库存：
50
- 标记物：
黄曲霉毒素B1
- 适应物种：
详见说明书
- 应用：
免疫效果评价、辅助诊断等
- 检测方法：
酶联免疫法
- 检测范围：
详细说明书
- 供应商：
上海信裕生物科技有限公司
- 规格：
盒
黄曲霉毒素B1试剂盒
产品品牌信裕生物产品型号XY001C
产品介绍
【产品简介】
黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液，动物饲料相关的产品中。其中黄曲霉毒素B1（AFB1）的毒性、致癌性、污染频率均居于首位。薄层色谱一直是检测黄曲霉毒素常用的方法，但是此方法制备样品及分析样品时费时又费力。而使用黄曲霉毒素B1 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉毒素B1残留。参考国家标准GB/T 5009.22-2003。
【测定原理】
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物黄曲霉毒素B1和微孔条上预包被的偶联抗原竞争黄曲霉毒素B1抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物黄曲霉毒素B1的含量成负相关，与标准曲线比较可得出相应残留物黄曲霉毒素B1的含量。
黄曲霉毒素B1试剂盒【试剂盒技术指标】
规 格：96孔/盒
灵 敏 度： 0.025ppb
检测时间： 75min
样本检测下限：
大米、玉米、小米………………………………2.5ppb
酱油、醋…………………………………………0.5ppb
食用油……………………………………………2.5ppb
酒类（葡萄酒、啤酒、黄酒）…………………0.5ppb
花 生……………………………………………2.5ppb
月饼、桃酥、花生酱等……………………………1ppb
面 粉………………………………………………1ppb
一般饲料…………………………………………2.5ppb
饲料（配合料及浓缩料）…………………………1ppb
牛奶………………………………………………0.5ppb
反应率：
黄曲霉毒素B1……………………………………100%
回收率：
食 品…………………………………………85±10%
饲 料…………………………………………75±10%
【试剂盒组成】
1、 微量测试孔：（1X96孔板）每条8孔，一板12条
1、 标准液X6瓶：（1ml/瓶） 0ppb、0.025ppb、0.05ppb、0.1ppb、0.2ppb、0.4ppb
2、 酶标记物 12ml…………………………红色帽
3、 抗体工作液 7ml…………………………绿色帽
4、 底物液 A液 7ml…………………………棕色帽
5、 底物液 B液 7ml…………………………黑色帽
6、 终 止 液 7ml…………………………黄色帽
7、 20X浓缩洗涤液40ml…………………… 透明帽
8、 5X浓缩样品稀释液50 ml…………………蓝色帽
【所用仪器、试剂】
仪 器：微孔板酶标仪450nm/630nm、旋转蒸发仪/氮气吹干装置、均质器、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量
0.01g）
微量移液器：单道 20μl～200μl、100μl～1000μl、多道 250μl
试 剂：甲醇、三氯甲、正己烷、滤纸
黄曲霉毒素B1试剂盒【样本前处理步骤】
处理任何样本时，都必须注意：
（a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
（b）实验之前须检查实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。
样本前处理需配制：
配液1、50%甲醇溶液：50ml蒸馏水或去离子水和50ml纯甲醇混合制备50％甲醇溶液。
配液2、将5X浓缩样品液用去离子水按照1：4稀释（1份浓缩样品液+4份去离子水）用于样品的稀释。
一、食品
l、脂肪含量小的固体样品(如大米、玉米、小米等)
1、称取1g粉碎的样品于50ml离心管中，加入10ml 的50%甲醇溶液混合；强力振荡5min。
2、用Whatman No.1滤纸过滤；收集过滤液。
3、取出上清液50ul与样品稀释液450ul 充分混合30s取50ul进行分析。
样本稀释倍数:100
2、酱油、醋
1、称取2g样品于50ml离心管中；先加入3ml去离子水充分混匀，再加入10ml三氯甲，振荡5min，室温4000r/min以上，离心10min；
2、取出下层5ml的三氯甲到另一洁净容器中于50℃水浴中氮气/空气吹干。
3、加入1mL的50%甲醇溶液将充分溶解干燥物。
4、取50ul与样品稀释液950ul 充分混合30s，取50ul进行分析。
样本稀释倍数:20
3、食用油(如菜油、麻油、色拉油、花生油等)
1、称取1g油样品于50ml离心管中，先加入5ml 正己烷，再加入10ml的50%甲醇溶液混合；强力振荡5min；室温4000r/min以上，离心10min。
2、取下层溶液50ul与样品稀释液450ul 充分混合30s取50ul进行分析。
样本稀释倍数:100
4、酒类（葡萄酒、啤酒、黄酒）
1、称取2g酒样品于50ml离心管中；加入10ml三氯甲，振荡5min，室温4000r/min以上，离心10min；
2、取出下层5ml的三氯甲到另一洁净容器中于50℃水浴中氮气/空气吹干。
3、加入1mL的50%甲醇溶液将充分溶解干燥物。
4、取50ul与样品稀释液950ul 充分混合30s，取50ul进行分析。
样本稀释倍数:20
5、花生
1、称取1g粉碎的样品于50ml离心管中，先加入5ml 正己烷，再加入10ml的50%甲醇溶液混合；强力振荡5min；室温4000r/min以上，离心10min。
2、取下层溶液50ul与样品稀释液450ul 充分混合30s
取50ul进行分析。
样本稀释倍数:100
6、月饼、桃酥、花生酱等
1、称取2g粉碎的样品于50ml离心管中，先加入5ml 正己烷，再加入10ml的50%甲醇溶液混合；强力振荡5min；室温4000r/min以上，离心10min。
2、取下层5mL提取液于50ml离心管中；加入10ml三氯甲，振荡5min，室温4000r/min以上，离心10min。
3、取出下层5ml的三氯甲到另一洁净容器中于50℃水浴中氮气/空气吹干。
4、加入1mL的50%甲醇溶液将充分溶解干燥物。
5、取50ul与样品稀释液950ul 充分混合30s，取50ul进行分析。
样本稀释倍数:40倍
7、面粉
1、称取2g面粉样品于50ml离心管中，再加入10ml的50%甲醇溶液混合；强力振荡5min；
2、用Whatman No.1滤纸过滤；收集过滤液。
3、取过滤溶液5mL于50ml离心管中；加入10ml三氯甲，振荡5min，室温4000r/min以上，离心10min。
4、取出下层5ml的三氯甲到另一洁净容器中于50℃水浴中氮气/空气吹干。
5、加入1mL的50%甲醇溶液将充分溶解干燥物。
6、取50ul与样品稀释液950ul 充分混合30s，取50ul进行分析。
样本稀释倍数:40倍
二、饲料
1、一般饲料及原料（脂肪和蛋白含量小的饲料)
1、称取1g粉碎的样品于50ml离心管中，加入10ml 的50%甲醇溶液混合；强力振荡5分钟。
2、用Whatman No.1滤纸过滤；收集过滤液。
3、取出上清液50ul与样品稀释液450ul 充分混合30s取50ul进行分析。
样本稀释倍数:100
2、配合料及浓缩料（脂肪和蛋白含量高的饲料)
1、称取2g样品于50ml离心管中，再加入10ml的50%甲醇溶液混合；强力振荡5min；
2、用Whatman No.1滤纸过滤；收集过滤液。
3、取过滤溶液5mL于50ml离心管中；加入10ml三氯甲，振荡5min，室温4000r/min以上，离心10min。
4、取出下层5ml的三氯甲到另一洁净容器中于50℃水浴中氮气/空气吹干。
5、加入1mL的50%甲醇溶液将充分溶解干燥物。
6、取50ul与样品稀释液950ul 充分混合30s，取50ul进行分析。
样本稀释倍数:40倍
三、乳制品
1、生鲜牛奶；
1、直接取50μl牛奶+950μl样品稀释液混合30s；
2、取50μl用于检测检测分析。
样本稀释倍数:20
2、奶粉、奶油、奶酪
1、称取5g样品于50ml离心管中，加入10ml甲醇，强力振荡5min；室温4000r/min以上，离心10min。
2、取2ml上清液，于50℃水浴中氮气/空气吹干。
3、用1ml正己烷溶解残留物，加入1ml稀释后的样品稀释液混合30s；室温4000r/min以上，离心5min，
4、取50ul下层溶液进行检测分析。
样本稀释倍数:1
黄曲霉毒素B1试剂盒【备注】
如根据样品的国家允许量标准判定（详见附件表），在样品测定前，用样品稀释液将样品提取液再进一步进行适当倍数稀释，即为待测样品液； 取50ul待测样品液进行定量或限量测定。
【酶标免疫分析程序】
测定前应须知：
1、 使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20-25℃）。
2、 使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。
3、 在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4、 在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。
黄曲霉毒素B1试剂盒操作步骤：
1、 将所需试剂从冷藏环境中取出，置室温（20-25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、 按板架及需要取出微孔条，将不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、 配液：将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水按照1：19稀释（1份浓缩洗涤液+19份去离子水），或按所需用量配制洗涤
液。
4、 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5、 加标准品/样本50μl/孔到各自的微孔中，然后加抗体50μl/孔，用盖板膜封板，轻轻震荡混匀。37℃环境中反应30min。
6、 取出将孔内液体甩干，用洗液250μl/孔洗板4-5次，每次间隔15-30秒，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头
刺破）。
7、 每孔加入酶标记物100μl，盖板膜盖板后置37℃环境中反应30min。将孔内液体甩干，用洗涤液充分洗，4-5遍（同上），用吸
水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。
8、 显色：每孔加入A液50μl，再加B液50μl，轻轻振荡混匀，37℃环境中避光显色15min。
9、 测定：每孔加入终止液50μl，轻轻振荡，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测,在5min内读完数据）测定吸
光度值（OD值）。
【结果判定】
结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与黄曲霉毒素B1的含量成负相关。
1、粗略判定：
用样本的平均吸光度值与标准吸光度值比较即可得出其浓度范围(ppb)。假设样本1的吸光度值为0.310， 样本2的吸光度值为0.820，标准液吸光度值分别是：0ppb为1.610；0.025ppb为1.350；0.05ppb为1.030；0.1ppb为0.660； 0.2ppb为0.379；0.4ppb为0.198。则样本1的浓度范围是0.2ppb-0.4ppb； 样本2的浓度范围是0.05 ppb-0.1 ppb。乘以其对应的稀释倍数即为样本中黄曲霉毒素B1的实际含量。
2、定量判定：
所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以第一个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
| 百分吸光度值（%）＝ | B | ×100% |
| B0 |
B0—0ng/ml标准溶液的平均吸光度值
以标准品百分吸光率为纵坐标，以黄曲霉毒素B1标准品浓度（ng/ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中黄曲霉毒素B1实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样品的准确、快速分析。
3、标准曲线：
B/B0 (%)
0.025 0.05 0.1 0.2 0.4
黄曲霉毒素B1(ppb) [μg/kg]
图1：黄曲霉毒素B1检测试剂盒的回归曲线
4、再现性：
%CV
0 0.025 0.05 0.1 0.2 0.4
黄曲霉毒素B1 (ppb) [μg/kg]
图2：黄曲霉毒素B1检测试剂盒的精密度
由多个不同的实验结果确定了精密度，图2显示出黄曲霉毒素B1检测试剂盒的精密度情况，获得的标准吸收值的变异系数（%CV）对相应黄曲霉毒素B1浓度作曲线，可以看到在全部范围内变异系数如此之低，可以得到很好的再现性。
【注意事项】
1、 使用前将所有试剂温度回升至室温20-25℃。试剂及标本没有回到室温（20-25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2、 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、 混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。
4、 反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5、 不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD值的变化。不要交换使用不同批号的盒中试剂。
6、 不用的微孔板放进自封袋密封；标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位（A450nm< 0.5 ）时，表示试剂可能变质。
8、 该试剂盒最佳反应温度为37℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
【储存】
原包装应储存于2～8℃保鲜冷藏，切勿冷冻。
【有效期】
有效期12个月;生产日期、有效期、生产批号见外包装。
【备注】
如根据样品的国家允许量标准判定（详见附件表）；在样品测定前，用样品稀释液将样品提取液再进一步进行适当倍数稀释，即为待测样品液； 取50ul待测样品液进行定量或限量测定。
附件表：黄曲霉毒素B1国家允许量标准
（说明：色拉油卫生标准GB13103-91 和精练食用植物油卫生标准GB15197被GB2716－2005覆盖取代。）
| 标准 编号 |
标准名称 | 实施日期 | 适用范围 | 指标 （μg/kg) |
| GB 2715-2005 |
粮食卫生标准 黄曲霉毒素B1允许量 | 2005-10-1 | 玉米 | ≤20 |
| 大米 | ≤10 | |||
| 其他 | ≤5 | |||
| GB 2716-2005 |
食用植物油卫生标准 黄曲霉毒素B1允许量 |
2005-10-1 | 花生油 | ≤20 |
| 其他食用油 | ≤10 | |||
| GB 1217-2003 |
酱油卫生 标准 |
2004-5-1 | 黄曲霉毒素B1允许量 | ≤5 |
| GB 2718-2003 | 酱卫生标准 | 2004-5-1 | 黄曲霉毒素B1允许量 | ≤5 |
| GB 1219-2003 |
食醋卫生 标准 |
2004-5-1 | 黄曲霉毒素B1允许量 | ≤5 |
| GB 2758-2005 | 发酵酒卫生标准 | 2005-10-1 | 黄曲霉毒素B1允许量 | ≤5 |
| GB 2761—1981 | 食品中黄曲霉毒素B1允许量标准 | 1982-6-1 | 玉米，花生仁，花生油 | ≤20 |
| 玉米及花生仁制品（按原料折算） | ≤20 | |||
| 大米，其他食用油 | ≤10 | |||
| 其他粮食，豆类，发酵食品 | ≤5 | |||
| 婴儿代乳食品 | 不得 检出 |
|||
| GB 2761—1981 | 发酵类豆制品卫生标准 | 1982-6-6 | 黄曲霉毒素B1允许量 | ≤5 |
| GB 2713-1996 |
淀粉类制品卫生标准 | 1997-5-1 | 黄曲霉毒素B1允许量 | ≤5 |
| GB 10765-1997 |
婴儿配方乳粉Ⅰ | 1998-9-1 | 黄曲霉毒素M1允许量 | 不得 检出 |
| GB 10766-1997 |
婴儿配方乳粉ⅡⅢ | 1998-9-1 | 黄曲霉毒素M1允许量 | 不得 检出 |
| GB 10767-1997 |
婴幼儿配方粉及婴幼儿补充谷粉通用技术条件 | 1998-9-1 | 黄曲霉毒素B1或M1允许量 | 不得 检出 |
| GB 10769-1997 |
婴幼儿断奶期辅助食品 | 1999-9-1 | 黄曲霉毒素B1或M1允许量 | 不得 检出 |
| GB 10770-1997 |
婴幼儿断奶期补充食品 | 1999-9-1 | 黄曲霉毒素B1 | 不得 检出 |
| GB 13078-2001 | 饲料卫生标准 黄曲霉毒素B1允许量 | 2001-10-1 | 玉米,花生饼（粕），棉籽饼（粕），菜籽饼（粕），肉牛精料补充料 | ≤50 |
| 豆 粕 | ≤30 | |||
| 仔猪配合饲料及浓缩饲料 | ≤10 | |||
| 肉用仔鸡（鸭）前期，雏鸡（鸭）配合饲料及浓缩饲料，奶牛精料补充料 | ≤10 | |||
| 肉用仔鸡后期，生长鸡，产蛋鸡，鹌鹑配合饲料及浓缩饲料 | ≤20 | |||
| 肉用仔鸭后期，生长鸭，产蛋鸭配合饲料及浓缩饲料 | ≤15 | |||
| 生长肥育猪，种猪配合饲料及浓缩饲料 | ≤20 |
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文献和实验相关实验
某些黄曲霉和寄生曲霉产生的一种肝毒素。它对动物有极强的毒性和高度的致癌性。目前已分离出B1 、 B2 等 12种衍生物，其中以 B1 的毒性最强。各种黄曲霉毒素的结构相似，都含有 1个糠酸呋喃的基本毒性结构和 1个氧杂萘邻酮结构。纯黄曲霉毒素不溶于水、乙烷、乙醚、石油醚等，而溶于氯仿、甲醇、苯、丙酮等有机溶剂。 1960年英国曾发生震动世界的 10万只火鸡突然死亡的事件，就是因为饲料中有黄曲霉毒素，其中毒症状为食欲不振，走路摇摆，羽翼下垂，昏睡， 1周左右死亡。解剖检查，见肝
曲霉属黄曲霉产生的菌类毒素。 1960年英国在数月内约死掉十万只火鸡，经过研究证实，是由繁殖在花生粗粉饲料中的黄曲霉产生的毒素所致。用紫外线照射黄曲霉毒素，可发出青和绿的四种相类似的荧光物质，为了区别，分别称为 B1 、 B2 、 G1 、 G2 ，并明确了它们的化学结构。它也是引起肝脏病变的致癌物质。由于考虑到黄曲霉是日本酿造品中广泛使用的米曲霉的野生种，因而以曲霉属为中心，对该毒素的生产性进行了广泛的调查，虽有类似的物质，但经过对动物的实验，未能确定其毒性。此外，最初被鉴定
近日，蒙牛纯牛奶被检测出强致癌物——黄曲霉毒素M1，消息一出顿时又掀起一股食品安全隐患的讨论。相比之前的三聚氰胺，黄曲霉素是否更难检测？ 现整理出全套的专业检测方案，让乳和乳制品中黄曲霉毒素M1无处躲藏。 1. 试用范围 牛奶，奶粉，发酵乳，干酪，奶油等乳制品 2. 方法原理 黄曲霉毒素M1易溶于极性溶剂，因此均匀基质中的黄曲霉毒素M1可以通过甲醇/水震荡分散提取，对于高脂肪/油含量的样品基质加入正己烷予以脱脂。本方法采用免疫亲和柱净化，荧光检测器测定乳制品中黄曲霉毒素
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