昆虫蛋白提取试剂盒（pull-down、co-IP等）

1. 提取液制备：
每500ul冷的昆虫蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，4ul蛋白稳定剂，混匀后置冰上备用。
2. 取50-100mg昆虫组织样本剪碎，加入500ul昆虫蛋白提取液。
3. 用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
4. 将匀浆在4℃条件下振荡20-30分钟。
5. 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到昆虫总蛋白。
7. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

1.蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，不必进行超声处理。
4.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。