植物木葡聚糖内转糖苷酶(XET)活性ELISA试剂盒

植物木葡聚糖内转糖苷酶（XET）酶联免疫分析

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围： 96T
20U/L -800 U/L
使用目的：
本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中木葡聚糖内转糖苷酶（XET）活性。   实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物木葡聚糖内转糖苷酶（XET）水平。用纯化的植物木葡聚糖内转糖苷酶（XET）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物木葡聚糖内转糖苷酶（XET），再与 HRP 标记的木葡聚糖内转糖苷酶（XET）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在
HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物木葡聚糖内转糖苷酶（XET）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中植物木葡聚糖内转糖苷酶（XET）活性浓度。
试剂盒组成

1	30 倍浓缩洗涤液	20ml×1 瓶	7	终止液	6ml×1 瓶
2	酶标试剂	6ml×1 瓶	8	标准品（1600U/L）	0.5ml×1 瓶
3	酶标包被板	12 孔×8 条	9	标准品稀释液	1.5ml×1 瓶
4	样品稀释液	6ml×1 瓶	10	说明书	1 份
5	显色剂 A 液	6ml×1 瓶	11	封板膜	2 张
6	显色剂 B 液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1 个

植物木葡聚糖内转糖苷酶（XET）酶联免疫分析标本要求

1. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2. 不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀  释。

800U/L	5 号标准品	150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液
400U/L	4 号标准品	150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
200U/L	3 号标准品	150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
100U/L	2 号标准品	150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
50U/L	1 号标准品	150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

 

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，

然后再加待测样品 10µl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

10 分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

植物木葡聚糖内转糖苷酶（XET）酶联免疫分析操作程序总结：




计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，