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- 雅吉
- 观察成像
- Im-02876B
- 上海
- 2025年11月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 供应商：
上海雅吉
- 检测范围：
观察成像
- 检测方法：
免疫组化
- 应用：
检测组织内的特异性抗原
- 适应物种：
组织样本
- 标记物：
HRP 标记
- 样本：
组织
- 规格：
50T
人CD4+CD25+调节性T细胞（CD4+CD25+Treg）酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T
20pg/ml-480pg/ml
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中 CD4+CD25+ 调节性 T 细胞
（CD4+CD25+Treg）含量。实验原理
本试 剂 盒 应用 双 抗 体夹 心 法 测定 标 本 中人 CD4+CD25+ 调 节 性 T 细 胞
（CD4+CD25+Treg）水平。用纯化的人 CD4+CD25+调节性 T 细胞（CD4+CD25+Treg）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 CD4+CD25+调节性 T 细胞
（CD4+CD25+Treg），再与 HRP 标记的 CD4+CD25+ 调节性 T 细胞（CD4+CD25+Treg）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的
CD4+CD25+调节性 T 细胞（CD4+CD25+Treg）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人 CD4+CD25+调节性 T 细胞（CD4+CD25+Treg）浓度。
试剂盒组成
| 1 | 30 倍浓缩洗涤液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 终止液 | 6ml×1 瓶 |
| 2 | 酶标试剂 | 6ml×1 瓶 | 8 | 标准品（960pg/ml） | 0.5ml×1 瓶 |
| 3 | 酶标包被板 | 12 孔×8 条 | 9 | 标准品稀释液 | 1.5ml×1 瓶 |
| 4 | 样品稀释液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 说明书 | 1 份 |
| 5 | 显色剂 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 张 |
| 6 | 显色剂 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 个 |
- 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
- 不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤
- 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。
| 480pg/ml | 5 号标准品 | 150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液 |
| 240pg/ml | 4 号标准品 | 150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 |
| 120pg/ml | 3 号标准品 | 150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 |
| 60pg/ml | 2 号标准品 | 150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 |
| 30pg/ml | 1 号标准品 | 150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 |
- 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测 样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
- 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
- 配液：将 30 倍（48T 的 20 倍）浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍（48T 的 20 倍）稀释后备用
- 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
- 加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
- 温育：操作同 3。
- 洗涤：操作同 5。
- 显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
- 终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
- 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。
注意事项
- 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
- 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
- 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
- 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
- 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
- 底物请避光保存。
- 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
- 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
- 本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期
- 试剂盒保存：；2-8℃。
- 有效期：6 个月
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