Flag标签抗体打折促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博供应的Flag标签抗体打折促销用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多Flag标签抗体等一抗产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：Flag标签抗体打折促销
规格：20μl
英文名：Anti-Flag antibody
品牌：百奥莱博
编号：RFT170
小鼠抗DYKDDDDK标签单克隆抗体，浓度为1mg/ml，采用蛋白A纯化，Western Blot推荐稀释比例1:1000～1:2000。

应用举例：

第一道：30ng DYKDDDDK融合蛋白
第二道：50ng DYKDDDDK融合蛋白
第三道：75ng DYKDDDDK融合蛋白.
电泳：15% SDS-Urea-PAGE
转膜：NC膜印记一小时.
封闭：5%脱脂奶室温一小时
一抗：1:2000稀释4℃过夜
二抗：HRP标记羊抗小鼠IgG(H&L)1:5000稀释
检测: 化学发光底物，CCD摄像机采集图像

我公司的Flag标签抗体打折促销，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
ARB13361 牛抑肽酶(AP)Elisa方法检测 
ARB11635 人淋巴细胞抗原6复合物基因座A(Ly6A)含量检测 Human lymphocyte antigen 6 complex locus a,ly6a ELISA KIT
D2000 DNA ladder（100-2000bp） 100次
57-30-7 Pentobarbital Sodium *
ARB13432 鸡心肌肌*蛋白I(cTNI)Elisa定量检测 Chicken cardiac troponin i ,ctniELISA KIT
抗酸染色液(Ziehl-Neelsen热染法)   3×50ml|3×100ml
ARB11051 人表面膜免疫球蛋白A(mIgA)尿液中含量检测 Human membrane iga,miga ELISA KIT
胰蛋白酶(牛胰) Snailagglutinin 9002-07-7
F030840 BIOTIN标记兔抗驴IgG抗体 Polyclonal Rabbit Anti-Donkey IgG*BIOTIN
ARB12036 大鼠γ*基丁酸(GABA)含量测试 Rat gamma-aminobutyric acid,gaba ELISA KIT
L-(-)樟脑磺酸 D-Serine methyl ester hydrochloride 35963-20-3
BL1150 D-PBS，液体，不含*、*和酚红
F030630 FITC标记兔抗人IgG抗体 Rabbit Anti-Human IgG*FITC
PC3601 TUREscript SYBR Green qRT-PCR Kit (两步法荧光定量反转录PCR试剂盒)
Flag标签抗体打折促销关键词：Anti-Flag antibody,Flag标签抗体,RFT170


·λDNA/HindIII(125～23130bp)
编号：RFT026
规格：100次(2×25μg/2×250μl)
本产品是由λDNA经HindIII完全酶切而成，适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。产品浓度为0.1μg/μl，已含有1×loading buffer，可直接取2-5μl上样，使用方便。8条带的大小分别为125，564，2027，2322，4361，6557，9416，23130bp。



使用方法：
1.65℃加热5分钟，立即冰浴3分钟，取2-5μl本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中。
注：根据梳子的厚度和宽度进行上样。每1mm×1mm(厚度×宽度)加样孔上样1μl。窄齿梳子(一般为1mm×2mm)上样2μl；宽齿梳子(一般为1mm×5mm)上样5μl。如果使用厚齿梳子或宽于5mm的梳子，可以适当调整上样量。
2. 建议电泳条件：凝胶浓度为1.0％，凝胶长度10cm，电泳电压4-10v/cm，电泳时间45分钟。
3. 通过EB染色后紫外灯下观察条带。

注意事项：
1. λDNA酶切Marker的末端容易由COS末端结合在一起，电泳前65℃预热5分钟能解开结合的COS末端，得到更清晰的电泳图像。如果不预热，23130bp和4361bp会结合形成27491bp的额外片段，同时电泳后4361bp亮度会明显弱于其他片段。
2. 琼脂糖的质量对DNA的电泳有很大影响，电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖。
3. 请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的琼脂糖凝胶进行电泳，以保证Marker良好的分离效果。

储存条件：-20℃，有效期1年。


Flag标签抗体打折促销关键词：Anti-Flag antibody,Flag标签抗体,RFT170


·2×SYBR qPCR MasterMix
编号：RFT094
规格：1ml|5×1ml|20×1ml
本制品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂。已经将 Hot-Start DNA聚合酶、dNTP、特殊稳定剂、优化的反应缓冲液和 SYBR? Green I 等试剂预混成一种适合 Real Time PCR反应检测用 2×MasterMix试剂，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。使用时只需加入模板、引物和水，便可在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对目的基因进行准确定量检测，重复性好，可信度高。以50μl qPCR反应体系为例，每次使用25μl 2×MasterMix，1ml可做40次 50μl qPCR反应。

使用方法：
1、冰浴中彻底融化2×qMasterMix，彻底混匀后快甩离心将溶液收集到管底。
2、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系：

 

	50μl反应体系	20μl反应体系	终浓度
2×qPCR MasterMix	25μl	10μl	1×
上游引物 10μM	1μl	0.4μl	0.2μM
下游引物 10μM	1μl	0.4μl	0.2μM
ROX Slolution I or II(50×)	1μl or 不加	0.4μl or 不加	x
模板	×μl	xμl	10pg-100ng
水	补至50μl	补至20μl

3、快甩离心将反应液收集到管底。
4、检测片段大于300bp，qPCR仪上推荐执行以下程序(三步法)：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	95℃	10min*	1
变性	95℃	15sec	40
退火	55℃	30sec
延伸	72℃	30sec

检测片段小于300bp，qPCR仪上推荐执行以下程序(两步法)：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	95℃	10min*	1
变性	95℃	15 sec	40
退火和延伸	60℃	60 sec

注：由于本MasterMix中的Hot-start DNA聚合酶是经过化学修饰封闭的，初始变性95℃ 10分钟是必须的，时间过短会降低酶的活性。

实验结果分析
反应结束后加做融解曲线，以区分扩增产物及引物二聚体。根据扩增曲线和融解解曲线结果可进行PCR定量标准曲线的制作。

注意事项
1、本制品中不含内参染料ROX，ROX染料单独供应。客户并根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX内参染料，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。
2、本制品含SYBR Green I，强光下易分解，使用时避免长时间强光照射本制品。
3、建议在冰上配制qPCR反应液，再放入qPCR仪器中扩增。可以提高扩增特异性，减少背景。
4、-20℃下保存时间较长，有微量沉淀产生，充分混匀后不影响使用。本制品已经优化了反应缓冲液中的Mg2+浓度，无需再调节Mg2+浓度。
5、模板DNA：用本产品，cDNA、基因组DNA、质粒DNA、病毒DNA等都可作为模板。在添加DNA模板时请注意模板量对PCR扩增的影响。本产品建议添加量为：cDNA添加量不应超过总反应体系的10%；基因组DNA为模板时，为避免在高浓度区域出现线性差的情况，请注意添加量小于500ng；病毒DNA也可作为PCR模板，添加时请以300ng为上限；由于质粒DNA浓度和拷贝数很高，在添加PCR模板之前最好进行稀释梯度试验，以便确定合适的质粒DNA拷贝数。
6、引物：
建议每条引物工作浓度200 nM～800 nM；为得到高灵敏度定量性的数据，引物的设计非常重要。以下列举了设计引物时需注意的一般事项。
a.引物长度请设定为18bp～30bp、GC含量为40%～65%；
b.扩增片段一般小于300bp，如可能请尽量设定在80bp～150bp。过长的片段容易导致扩增效率降低；
c.如设计mRNA为目的片段的引物，设计应尽量横跨内含子，以防止基因组DNA的扩增而引起假阳性；
d.请尽量选择Tm为65℃～67℃；
e.A、G、C、T整体分布尽量均匀。不要有部分的GC rich或AT rich(特别是3"端)。避开T/C(Polypyrimidine)或A/G(Polypurine)的连续结构；
f.避开引物内部或两条引物之间有3个碱基以上的互补序列。二条引物间的3"末端避开有2个碱基以上的互补序列；
g.引物设计完成后要使用BLAST检索确认引物的特异性。
此外，引物的纯化纯度对反应特异性有很大的影响。经过一般纯化、纯度较低的引物荧光强度散乱，容易产生非特异性产物，致使熔解曲线出现杂峰。请尽可能使用HPLC级别纯化，至少要用经Cartridge(OPC)级别以上纯化的引物。
7、对照设计：
a.No template control(NTC)：在qPCR反应体系中仅仅缺少模板。用以检测有无二聚体和试剂有无污染。
b.Reverse Transcripase control：用以评估逆转录反应中有无基因组DNA的污染。在逆转录反应中仅仅不含有逆转录酶。

常见问题及处理：

问题	可能原因	推荐的解决方法
无扩增曲线且无扩增产物(凝胶电泳)	反应体系中有PCR反应抑制剂	更换或纯化模板DNA。
	引物设计不合理	重新设计、合成引物。
	逆转录产物体积过量	减少逆转录产物量以不超过反应体系的10%。
	加样错误或有试剂未加	检查是否加了所有的所需试剂。
	引物的降解	通过PAGE电泳检测引物完整性。
	退火温度不正确	优化退火温度。
无扩增曲线但有扩增产物(凝胶电泳)	qPCR仪设置不正确	检查dye selction，reference dye是否选择正确
	失效的荧光检测	荧光检测应在PCR循环的退火/延伸阶段。
	荧光PCR仪问题	参考qPCR仪器说明书
阴性对照(NTC)有扩增曲线
	反应体系中有污染	qPCR片段较小，极易造成环境中气溶胶污染。如果融解曲线分析，解链温度和目的片段相同，凝胶电泳中NTC中的片段大小和目的片段相同，极有可能是反应体系中某一或某些试剂污染所引起的。建议换至没有污染源的环境进行PCR体系的配制。
	引物二聚体	进行溶解曲线分析，如果扩增曲线的解链温度小于80℃，凝胶电泳片段大小和目的片度不符。请重新设计引物。
		提高退火温度3℃。
PCR效率高于110%(斜率>-3.1)	有非特异性扩增	溶解曲线分析非特异性扩增；优化引物设计
PCR扩增效率低于90%(斜率<-3.6)	反应体系中有PCR反应抑制剂	更换或纯化模板DNA
	PCR扩增条件不合适引起扩增效率降低。	确认引物浓度。注意qPCR Master Mix是否失效。
	引物设计	重新设计引物，避免扩增区域的DNA二级结构。
实时荧光曲线线性不好	模板DNA含量较低或过高	应调整样品的DNA浓度。
	模板DNA中含有抑制PCR扩增反应的物质	对模板DNA进行纯化或更换模板。
	质量不好的逆转录试剂盒合成的cDNA，逆转录反应液中所含的物质可能抑制PCR反应。	请降低样品浓度，或将样品纯化后再进行反应。建议使用品牌质量较好的cDNA合成逆转录试剂盒。
CT值高于预期值	加入的模板量太少	适当增加模板量。
	样品被降解	检查样品的完整性。
	引物不合适	重新设计合成引物。
CT值低于预期值	加入了过多的模板	减少模板量。
	PCR产物太长	一般采用100-150bp的产物长度，一般不超过500bp
CT值的标准差>0.16	取样不准确	每种样品的反应混合液单独配制，充分混匀；
		qPCR之前要离心，管壁不要沾有反应液。
ΔRn值太小	PCR效率太低	优化PCR反应条件。
	目标模板数太低	增加模板量。
扩增曲线的荧光信号弱，或扩增曲线呈锯齿状	ROX添加量太大	使请根据ROX使用方法和使用的PCR仪进行确定ROX的添加量。
	荧光校正错误	请联*(代"系")PCR仪器工程师或参照PCR仪器的使用说明书，进行本底和荧光校正。
	PCR的延伸时间过短即荧光读取时间不充分，荧光收集不能充分完成。	适当增加延伸时间。
	以少于PCR仪器标准条件的反应体积进行扩增，荧光收集量的误差会增大	应增加反应体积以满足PCR仪器标准。

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期半年。

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