口腔/咽拭子基因组DNA快速提取试剂盒

口腔/咽拭子基因组DNA快速提取试剂盒采用特制的进口DNA吸附柱和独特的缓冲液系统，特别适合于从口腔咽拭子中分离纯化基因组DNA。各种来源样品裂解消化处理后DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜（特别配备了Carrier RNA可以从体系中轻松捕获微量核酸）,再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的基因组DNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的DNA无杂质和PCR抑制剂，可直接适用于PCR分析。
产品特点：
1、配备了Carrier RNA 用于充分收集特别微量DNA。
2、提取的DNA纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种常规操作，包括PCR、酶切、测序、Southern 杂交等。
自备试剂：无水乙醇
产品信息：

组分	保存	50次
裂解液 ML	室温	20ml
结合液 CB	室温	20ml
抑制物去除液 IR	室温	25ml
漂洗液 WB	室温	15ml（第一次使用前加入 60ml 无水乙醇）
Carrier RNA	-20℃	50ul
洗脱缓冲液 EB	室温	10ml
蛋白酶 K（20mg/ml）	室温	1ml
吸附柱 AC	室温	50个
收集管	室温	50个

使用方法
提示：第一次使用前请先在 15ml 漂洗液 WB 中加入 60ml 无水乙醇，充分混匀， 加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入! 取样：取一根医用消毒棉签（手不要碰触脱脂棉部位），伸进口腔，紧靠脸颊内侧来回 刮拭 20 次（不时旋转棉棒），需充分接触口腔粘膜。 注意：避免用手触及棉签，采集前可先用清水轻轻漱口。为防止样本被食物或者饮料 污染，取样前 30 min 内应该避免进食或者饮水。
操作： 1、用剪刀将棉签部分从其杆上剪下，放入 2ml 离心管中，加入 400μl 裂解液 ML。
2、再加入 20μl 的蛋白酶 K (20mg/ml)溶液，立刻涡旋振荡充分混匀，56℃放置 30 min， 期间每 10 min 涡旋混匀 10 sec。
3、加入 400μl 结合液 CB，立刻涡旋振荡充分混匀，70℃放置 10 min（挤压去除拭子， 将尽可能多的裂解液转移至新的离心管中）。 如果拭子上细胞数量少，导致提取的基因组 DNA 产量过低, 可以在 400μl 结合液 CB 中加入 1μl Carrier RNA 储存溶液。
4、冷却后加 200μl 无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心以除去管盖内壁的液 滴，收集所有的液体到管底。（如果周围环境高于 25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入）
5、将上一步混合物中加入一个吸附柱 AC 中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm 离心 30-60 sec，倒掉收集管中的废液。
6、加入 500μl 抑制物去除液 IR，12,000rpm 离心 30 sec，弃废液。
7、加入 500μl 漂洗液 WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心 30 sec， 弃掉废液。
8、重复操作步骤 7。
9、将吸附柱 AC 放回空收集管中，12,000rpm 离心 2 min，将吸附柱置于室温放置数分 钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
10、取出吸附柱 AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加 20-50μl 洗脱缓 冲液 EB（洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中预热效果更好），室温放置 1 min， 12,000rpm 离心 1 min。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置 1 min， 12,000rpm 离 心 1 min 。 洗 脱 体 积 越 大 ， 洗 脱 效 率 越 高 ， 如 果 需 要 DNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于 20μl，体积过 小降低 DNA 洗脱效率，减少 DNA 产量。（注意:DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解） 注意：DNA 浓度及纯度检测 得到的基因组 DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有 关。回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 DNA 应在 OD260 处有显著吸收峰，OD260 值为 1 相当于大约 50μg/ml 双链 DNA、 40μg/ml 单链 DNA。OD260/OD280比值应为 1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而 使用灭菌水比值会偏低，因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低