一管式病毒RNAout

产品及特点
一管式病毒RNAout是专用于血清(血浆)等液体样品中提取病毒 RNA 的纯化试剂。本产品回收率极高,尤其适合于整合到临床 RT-PCR 检测试剂盒中。且能用于提取其他液体样品和微量
样品。
1. 回收率达到 90%以上，高于绝大部分基于离心柱的提取方法。
2. 灵敏度高，RT-PCR 检测到的最终灵敏度可以达到 50-100 拷贝/mL(对 HIV 和HCV)。
3. 一管式操作，不使用离心柱，整个操作过程均在室温下完成。
4. 无毒环保，不需要使用苯酚和氯仿等有毒的有机溶液。
5. 可放量，如果加上病毒离心富集步骤，每管最多可以处理样品 1.5 mL。规格及成分 成 份 编 号 塑料袋包装
RNA 病毒裂解液 3073a 30 mL
使用手册 3073sc 1 份
运输及保存 常温运输，4℃保存，有效期一年。



自备试剂 异丙醇，70%乙醇。
一管式病毒RNAout使用方法 一：准备工作
1. 血浆的抗凝剂必须是 EDTA 或 ACD，不能是肝素。使用 ACD 时由于所加入 ACD会增加体积，样品会被稀释，得到的病毒滴度会比使用 EDTA 低 15%左右。
2. 用于制备血浆的全血在 2-25℃放置的时间不能超过 6 小时，在此时间内，可以室温800-1600g 离心 20 分钟，上清即为血浆。
3. 血浆可以在 2-8℃或更低温度下运输，可以在室温放置一天，2-8℃放置 5 天，-20℃以下长期保存。
4. 血浆最好按 0.6mL/管的量分装保存，以避免反复冻融。
5. 实验前所有试都必须放置在室温。
6. 实验当天新鲜配制 70%的乙醇。
二：病毒提取操作
1. 标记 1.5-2 mL 螺旋盖塑料离心管(如 Sarstedt CAT#:782.694.006)，为避免污染，建议不要使用压盖式塑料离心管。注意设置阳性和阴性对照。
2. 每管（包括正负对照管）中加入 0.6 mL RNA 病毒裂解液（需提前融化）。
3. 快速震荡样品几秒，再短暂离心，取 0.2 mL 液体样品加入到已经装有 0.6 mL RNA
病毒裂解液的管中。如果病毒需要富集，可以将 1.5 mL 液体样品在 4℃ 24,000 g冷冻离心 60 分钟, 移弃 1.3 mL 上清后在取用样品。
4. 在正负对照样品管中分别加正负对照样品。
5. 室温放置 10 分钟。此间可以在每个管上做个标记，以在下步区别向心面和离心面。
6. 振荡数秒后加入 0.7 mL 室温异丙醇，旋紧盖后振荡 30 秒混匀，把离心管的向心面对向转头的中央，13,000-15,000 g 室温离心至少15 分钟。
7. 小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的 RNA 沉淀（此时可能看不见）。
8. 加入 1.0 mL 室温 70%乙醇, 振荡数秒后 15,000 g 室温离心 5 分钟。注意：在离心机中放置离心管时将其向心面对向转头的中央。
9. 小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的 RNA 沉淀（此时呈膜状沉淀）。
10. 再短暂离心数秒, 用移液器移弃残留液体（70%乙醇），否则它会影响后续反应。
11. 加入 200 μl RNase-free 水或天泽基因的 1X 液相 RNase Erasol(能灭活残留的RNase, 而 RNase-free 水无此功能)，用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁离心面的膜状 RNA 沉淀，溶液将呈混浊状,含少量不溶物。由于不溶沉淀物中含有 RNA，所以不要离心后取上清使用，必须取混合液使用，哪怕很浑浊。
12. 直接取适量用于 RT-PCR，如果溶于 200 uL 水,同时样品使用量不超过 RT-PCR 体系的 1/2，不溶物一般不会影响 RT-PCR。剩余样品可以室温放置 2 小时，也可保
存于-80℃保存一个月。
使用效果

图注：用本产品和市场上进口 Q 公司同类产品分别提取 0.2 mL 培养的 B 型流感病毒上清液(含1000 拷贝/mL 病毒)，RNA 溶于 200 uL 水中，取 10 uL 进行荧光 PCR(50 uL 体系，使用 MJ
Research 的 CHROMO4 荧光 PCR 仪)。红线表示本产品，蓝线表示进口的 Q 公司同类产

Q：提取液体样品/病毒核酸(RNA 或 DNA)为何很难？
A：原因一是量少。病毒颗粒中的 RNA 或 DNA 是作为遗传物质保存，每个病毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万个 RNA 分子)，同时其长度也十分有限(是细胞基因组的万分之一以下)，样品中病毒数往往也不是很多，使得样品中核酸的绝对量几乎是微乎其微，十分容易丢失。另外，由于得到的核酸量少，不能使用电泳和测 OD 检测，只能通过 PCR 或 RT-PCR 检测，而病毒 RNA 往往具有稳定的二级结构，进一步增加了鉴定的难度（即不知道是 RNA 提取的问题还是 RT-PCR 的问题）。
Q：如何判断是病毒 RNA 没提取出来还是提取出来了但没有 RT-PCR 成功？
A：在 RT-PCR 反应中加阳性和阴性对照。
备忘录
常见人类疾病相关 RNA 病毒
病毒 简称 疾病名称 类型 长度(Kb)
Measles virus MV measles ssRNA 4.5~8.5
Hepatitis A Virus HAV hepatitis type A ssRNA 7.5
Poliomyelitis virus PV polio ssRNA 7.8
Rubella virus RV German
measles ssRNA 7.9
Hepatitis C Virus HCV hepatitis type C ssRNA 9.3~9.4
Human immunodeficiency
virus HIV AIDS ssRNA 9.7
Dengue Virus DV dengue ssRNA 11
Yellow fever virus YFV yellow fever . ssRNA 11
Rabies virus RV rabies ssRNA 11.9
Influenza A virus IAV influenza ssRNA 13.5
Mumps virus MuV mumps ssRNA 15.4
Ebola virus EBV
virus
hemorrhagic
fever
ssRNA 19
一管式病毒RNAout关联产品 一管式病毒 DNAout（CAT#：3674）
柱式病毒 RNAout（CAT#：71001）